多管发酵法与纸片法检测水中粪大肠菌群的比较

杨璐　朱雨欣

【摘 要】本文采用多管发酵法和纸片法同步检测了太湖水的粪大肠菌群，并对两种方法的实验结果进行了比较分析，结果表明，两者结果并无显著性差异，且多管发酵法，操作步骤繁杂、干扰因素多，检测周期长，不适合大批量样品的分析；纸片法操作简便、检测时间短，适合大批量水样的分析。

【关键词】粪大肠菌群；多管发酵法；纸片法；无显著性差异

水是微生物广泛分布的天然环境，水的细菌学测定特别是肠道菌的检验，是研究水体污染和环境卫生的重要指标。粪大肠菌群是总大肠菌群的一部分，主要来自粪便，被粪便污染的水源水如溪水也可能被肠道病原菌污染，从而引起肠道传染病甚至流行病，因此快速、方便、精准的粪大肠菌群检测方法对于判断水体粪大肠菌群的污染状况和对于有效预防、控制流行病有很深远的意义。

目前粪大肠菌的测定方法有多管发酵法、滤膜法、延迟培养法、纸片法等。多管发酵法、滤膜法是传统检测方法，干扰多、专一性差、操作繁琐费时，需要确认实验，因此检测周期较长，需48～72h，不适合大量样品的分析。在常规检验步骤不能实现时，可以用延迟培养法。纸片法依据环保部标准HJ 755-2015《水质 总大肠菌群和粪大肠菌群的测定 纸片快速法》，在水质监测工作中，纸片法由于其方便高效，应用逐年增多。本文采用多管发酵法和纸片法同步检测了太湖水的粪大肠菌群，并对两种方法的实验结果进行了比较分析。

1 粪大肠菌群的实验方法

1.1 多管发酵法

多管发酵法是根据大肠菌群在一定温度下能发酵乳糖产酸产气并能使乳糖蛋白胨培养液变黄且产生气泡的原理，将水样按三个10倍递减的浓度接种到有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中进行初发酵试验，在37℃±0.5℃下培养24±2h，再将产酸产气的阳性发酵管中轻微振荡，用接种环或灭菌棒转到EC培养液中进行复发酵试验，在44.5℃±0.5℃下培养24±2h，发酵管产气说明粪大肠菌群阳性。

1.2 纸片法

每个水样按三个10倍递减的是浓度接种，每个浓度梯度分别接种5张纸片。每张大纸片接种10mL水样，每张小纸片接种1mL水样，再是1︰10稀释的水样接种到5张小纸片中，每张接种1mL，浓度高时可适当稀释。接种水样时要均匀涂抹于纸片上，用手輕轻压平，做好标记，于44.5℃±1℃下培养18～24h。观察结果，若纸片上出现红斑或红晕且周围变黄为阳性或纸片全部变黄无红斑或红晕也为阳性。纸片无变化，纸片部分变黄无红斑或红晕，纸片不变黄有红斑或红晕均为阴性结果。

1.3 计算

两种方法均根据不同接种量所出现阳性结果的数目，从MPN表中查得相应的MPN指数，再经下面的公式换算成每100mL的MPN值。

MPN值=MPN指数×10（ml）/接种量最大的一管（ml）

MPN值再乘10，即为1L水样中的粪大肠菌群数。

2 实际水样检测结果

用纸片法和多管发酵法对8个实际水样中的粪大肠菌群作比对检测，结果见表1。

对两种方法的检测结果进行秩和检验，结果为t=7，P>0.10，表明纸片法与多管发酵法检测结果无显著性差异。

3 检测方法的比较

在粪大肠菌群检测方法中多管发酵法是传统的检测方法，干扰多、专一性差、操作繁琐费时，需要确认实验，不适于大量样品的分析。但传统方法均有原理简单、费用较低、利于推广的优点，因此仍是常规监测中的主要检测方法。

纸片法与多管发酵法相比，纸片法只需在44.5℃下培养18～24h就可出结果，纸片法快速省时简单方便，适合大批量监测和应急监测。两者比较见表2。

4 结论

实际水样检测结果证明，纸片法与多管发酵法检测结果之间无显著性差异。但是纸片法的检测结果普遍略低于经典的多管发酵法，这可能是因为纸片法是将接种后的样品直接放于44.5℃环境中培养，而多管发酵法是将接种后的样品先置于37℃环境中进行初发酵试验，再置于44.5℃环境中复发酵试验，比前者多一个富集过程。

纸片法具有快速简单方便等优点，可以较准确地判断水样微生物污染情况，可以作为环境分析方法中粪大肠菌群的快速筛查方法。因此在工作量大且需要快速判定时，可采用纸片法替代多管发酵法。

【参考文献】

[1]《水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定纸片快速法HJ 755-2015》环境保护部，2015.

[2]《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法HJ/T 347-2007》环境保护部，2007.endprint