血府逐瘀口服液中苦杏仁苷鉴别和羟基红花黄色素A的含量测定

郑宏亮

摘 要：目的：建立血府逐瘀口服液鉴别和含量测定方法。方法：采用薄层色谱法对苦杏仁苷进行定性鉴别，HPLC法测定羟基红花黄色素A含量。结果：薄层色谱法专属性良好，能准确定性鉴别。羟基红花黄色素A在5.03μg·mL-1～100.51μg·mL-1内呈现良好的线性关系，r=0.99994；平均回收率为99.15%，RSD（%）=0.49%。结论：该方法能准确控制血府逐瘀口服液的质量。

关键词：血府逐瘀口服液；薄层色谱法；HPLC；羟基红花黄色素A；苦杏仁苷

血府逐瘀口服液主要成份为桃仁、红花、当归、川芎、地黄、赤芍、牛膝、柴胡、枳壳、桔梗、甘草。具有活血化瘀，行气止痛，用于淤血内阻，头痛或胸痛，内热憋闷，失眠多梦，心悸怔忡，急躁善怒。为了更好的控制本品质量，参照药典，建立了桃仁药材中苦杏仁苷的薄层定性鉴别，红花药材中羟基红花黄色素A的含量测定方法，并对建立的方法进行了方法学验证试验。

1 仪器、试药和材料

高效液相色谱仪（Agilent1200）；羟基红花黄色素A对照品（中检所，批号：110737-201516，含量：98%）、苦杏仁苷对照品（中检所，批号：110820-201506）；乙腈、甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯；血府逐瘀口服液（市售样品，规格：10ml/支）；硅胶G薄层板（100mm×200mm，青岛海洋化工厂）。

2 含量测定

2.1对照品溶液的制备：取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加25%甲醇制成每1m1含50μg的溶液，即得。

2.2供试品溶液的制备：精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加入25%甲醇适量，超声处理（功率300W，频率50kHz）15分钟，放冷，用25%甲醇定容至刻度，摇匀，滤过.取续滤液，即得。

2.3线性关系考察：精密称取羟基红花黄色素A对照品12.82mg，置25ml量瓶中，加25%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密吸取对照品储备液0.1ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml，分别置10ml量瓶中，加25%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为不同浓度的对照品溶液。精密吸取10？滋l，分别注入高效液相色谱仪，以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，进行线性回归，见表1。

表1 线性关系测定结果

结果羟基红花黄色素A在5.03μgomL-1～100.51μgomL-1的浓度范围内呈现良好的线性关系。

2.4 重复性试验：取同一批号样品，平行处理6份样品，计算羟基红花黄色素A的含量，结果6份样品含量的RSD小于2.0%，重复性良好，见表2。

表2 重复性测定结果

2.5 加样回收率试验：精密量取已知含量的本品0.5ml，共9份，分别精密加入相当于已有量80%、100%、120%水平的对照品原液各3份，分别为0.4ml、0.5ml、0.6ml（精密称取羟基红花黄色素A对照品28.16mg，置10ml量瓶中，加25%甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品原液），置50ml量瓶中，加入25%甲醇适量，超声处理（功率300W，频率50kHz）15分钟，放冷，用25%甲醇定容至刻度，摇匀，滤过.取续滤液，即得供试品溶液。进样20ul，记录峰面积，以外标法计算羟基红花黄色素A回收率，结果表明本方法回收率良好，见表3。

表3 回收率测定结果

2.6溶液稳定性考察：取本品供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、12小时，将供试品溶液注入液相色谱仪，分别记录不同时间点羟基红花黄色素A的峰面积。结果峰面积的RSD为0.34%，小于2.0%，表明12小时内样品供试品溶液稳定。

2.7 不同色谱柱对色谱系统的影响：分别选择Spursil C18（4.6×250mm，5？滋m）、Diamond C18（4.6×250mm，5？滋m）、Phenomenex C18（4.6×250mm，5？滋m）色谱柱，进行测定，记录色谱图，计算样品中羟基红花黄色素A含量，结果不同色谱柱对测定结果无影响。

2.8不同高效液相色谱仪对色谱系统的影响：分别选择Agilent1100、Agilent1200、岛津20A高效液相色谱仪，进行测定，记录色谱图，计算样品中羟基红花黄色素A含量，结果不同高效液相色谱仪对测定结果无影响。

3 结论

经过方法学验证试验，结果苦杏仁苷的薄层鉴别方法和羟基红花黄色素A的含量测定方法专屬性强、准确可靠，可用于血府逐瘀口服液的质量控制。

4 讨论

4.1薄层定性鉴别苦杏仁苷步骤中，本品水液用乙醚振摇弃去乙醚液，主要是脱脂，否则实验结果不会显苦杏仁苷斑点。

4.2 羟基红花黄色素A是具有单查尔酮苷类结构的化合物，是红花药材功效的最有效水溶性成分，所以本品采用25%甲醇作为溶解溶剂。由于本品成分复杂，经摸索试验流动相采用甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（23：2：75），增加水相比例，延长保留时间，使羟基红花黄色素A峰与相邻色谱峰达到完全分离。

参考文献

[1]中华人民共和国药典（一部）.化学工业出版社， 2015：277-278.

[2]中华人民共和国药典（一部）.化学工业出版社， 2015：151.