复方氨酚葡锌片中对乙酰氨基酚含量测定方法研究

王群葆，刘 涛，李 斌，杨凤巧，曹 旭，田运佳

(邢台市食品药品检验所，河北 邢台 054000)

复方氨酚葡锌片[1]于1989年由河北恒利集团制药股份有限公司研制，自1993年上市以来，凭借着其中药加西药一起治疗感冒的独特优势，深受广大患者的青睐。质量标准收载在国家药品标准WS1-(X-150)-97Z-2000，其中对乙酰氨基酚含量测定方法专属性差；按照现行标准控制本品质量存在一定安全风险，试验结果不能真正有效反映药品质量优劣，安全性和有效性检验项目设置不完善，有必要对现行标准进行完善和提高。

1 仪器与试药

仪器：Waters e2695高效液相色谱仪、Waters2489(UV)检测器，Empower工作站软件；色谱柱：Waters Sunfire C18(4.6×250mm，5μm NO.:186002560)；BP211D电子天平。

试剂和对照品：对乙酰氨基酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号100018-200408，使用前不需干燥)、原辅料(河北恒利集团制药股份有限公司提供)、甲醇(色谱纯 北京市通广精细化工公司)、冰乙酸(分析纯 北京化工厂)、水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 测定方法

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.5%冰乙酸(20:80)为流动相；检测波长为249nm；流速为0.8ml/min，柱温30℃，理论塔板数按对乙酰氨基酚峰计算应不低于5000。

(2)对照品溶液的制备：取对乙酰氨基酚对照品16mg，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取5ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

(3)供试品溶液的制备：取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于对乙酰氨基酚16mg)，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得。

(4)阴性对照溶液的制备：称取原料药不加对乙酰氨基酚，按供试品溶液制备的方法制备阴性对照溶液。

(5)测定法：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入色谱仪，记录色谱图。

2.2 线性关系考察

取对乙酰氨基酚对照品，精密称取10.16mg置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。分别精密量取2，3，5，8，10，20ml置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件下分别进样20μl进行测定。以对乙酰氨基酚对照品浓度(μg/ml)为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=9.98×104X-7.67×103，r2=0.9994，结果表明对乙酰氨基酚在2μg/ml～20μg/ml浓度范围内，线性关系良好。标准曲线见图1。

2.3 专属性试验

分别精密量取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各20μl注入液相色谱仪，按含量测定色谱条件测定，结果供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰的保留时间一致，而阴性对照溶液在与对照品溶液相应的位置上没有色谱峰，表明该方法的专属性较好，无干扰，可用作对乙酰氨基酚的鉴别。见图2、图3、图4

图1 对乙酰氨基酚标准曲线

图2 阴性对照溶液色谱图

图3 对照品溶液色谱图

图4 供试品溶液色谱图

2.4 精密度试验

取线性关系考察项下浓度为8μg/ml的对照品溶液，在上述色谱条件下重复进样5次，测定峰面积，结果见表1。

表1 精密度试验结果

2.5 稳定性试验

取对照品溶液，按含量测定方法测定，在0，1，2，5，8，12h分别进样20μl，记录峰面积，结果RSD=1.0%，表明溶液在12小时内稳定。见表2。

表2 稳定性试验结果

2.6 重现性试验

精密称取同一批样品(批号1211106，平均片重0.5012g)6份约0.08031g，照含量测定方法制成供试品溶液，分别精密量取20μl注入色谱仪，记录峰面积，结果含量RSD=0.25%(见表3)。表明该方法的重现性良好。

表3 重现性试验结果

2.7 回收试验

按处方比例精密称取原料药不加对乙酰氨基酚(约相当于10片量)，葡萄糖酸锌0.7020g、盐酸二氧丙嗪0.0122g、板蓝根浸膏粉2.5011g、淀粉0.7603g、硬脂酸镁0.0311g，研磨混匀。称取混匀原料药约0.08400g，置100ml量瓶中，平行9份。精密加入对乙酰氨基酚对照品14、16、18mg，各平行3份，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，再精密量取5ml置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，照含量测定方法测定。结果见表4。

表4 回收试验结果

2.8 耐用性试验

取同一批号样品照含量测定方法制备供试品溶液，分别用三个不同牌号的色谱柱测定，结果RSD为0.8%，流动相组成比例、柱温、流速等稍有变化和使用不同牌号液相色谱仪对测定结果影响不大，表明该方法耐用性较好。

2.9 批量试验

按含量测定方法，对10批不同批号的复方氨酚葡锌片进行含量测定，结果见表5。

表5 10批不同批号测定结果

3 讨论

[2-3]中都对对乙酰氨基酚含量测定方法进行改进，但阴性对照没有进行测试，原标准[1]采用的紫外分光光度法 双波长法，在267nm、271nm测定吸收值，以差值计算对乙酰氨基酚的含量，影响因素较多，方法专属性差，测得含量较高。用生产厂家原料药不加对乙酰氨基酚作阴性对照(平行3份)，按原检测方法，在267nm、271nm测定吸收值，差值平均为0.016(在240nm～290nm波长范围内，扫描图谱，见图5)，而按原检测方法，取样品检测含量时差值平均为0.051，说明阴性对照溶液对试验结果的影响较大。采用高效液相色谱法检测可以把其它影响因素排除，从而测得更为真实的结果。

图5 阴性对照紫外扫描色谱图

参考文献：

[1] 国家药品标准WS1-(X-150)-97Z-2000.

[2] 王彬彬,姜静.复方氨酚葡锌片中对乙酰氨基酚含量测定方法的改进[J].中国药师,2007,(08):830-831.

[3] 张平,俞永梅.复方氨酚葡锌片质量标准的提高研究[J].中国药师,2012,(11):1577-1579.