创面负压治疗促进碱性成纤维细胞生长因子(bFGF）在糖尿病足肉芽组织表达

姜强,李建婷,娄凯,陆勇,黄国宝

济南市中心医院内分泌科 ，山东济南 250013

糖尿病足是一种糖尿病多见并发症[1]，表现为足部软组织与骨关节畸形与破坏，迁延难愈。创面负压由多侧空引流管、医用泡沫材料以及负压引流装置组成，可以及时排除创面及腔隙中的液化、渗液坏死组织，加速毛细血管的生长，促进腔隙及创面有效敛合，在深部腹部开放创口的愈合中发挥重要作用[2]。bFGF属于多功能外源性生长因子[3]，有促进外胚层及中胚层的细胞修复及再生作用，是促进创面愈合的关键因子。我们对创面负压对糖尿病足患者创面bFGF的影响进行了观察总结。

1.资料与方法

1.1 一般资料

选择2015年2月—2017年2月，在该院就诊的50例糖尿病足患者：常规组女11例，男14例，年龄均值（58.46±5.52）岁；干预组女10例，男15例，年龄均值（58.51±5.31）岁。两组病患性别、年龄等资料存在良好一致性（P＞0.05）。

1.2 治疗方法

常规组：常规纱布换药，依照敷料浸湿的具体情况，每2～3 d换1次药，将失活坏死的组织及脓液及时清理。

干预组：对创面常规消毒，将坏死失活的组织有效清除，确保创面、创腔无异物及脓液残留。依照患者创面实际大小设计合适的修剪敷料，深腔底部填塞敷料；将半透性黏贴薄膜覆盖创面，确保创面的封闭性；用连接管连接负压引流装置，保证敷料与半透明薄膜因负压吸引于皮肤凹陷；如有漏气，需再次将创面封闭；设置负压在-125mmHg，总计治疗1周。治疗期间需对患者引流管堵塞、出血及漏气等情况密切观察，一旦发现异常需尽早处理。

治疗前后每位患者均取创面肉芽组织2份，厚度0.5 cm，直径0.8 cm。一份采取免疫组织化学染色；另外一份置于-80℃储藏柜中保存。收集标本后，通过Western blotting法对bFGF蛋白的表达进行检测。

1.3 效果评价

两组治疗1周后，对选取的创面肉芽组织切片依次行HE（苏木素伊红）染色、Masson染色（以图像分析软件分析切片中胶原含量）、免疫组化染色（以图像分析系统分析光密度值表示bFGF含量），并用Western blotting法分析bFGF表达的情况。

对比治疗5、10 d和15 d时，两组的创面愈合面积。愈合面积=（治疗前溃疡面积-治疗后剩余未愈合面积）/治疗前溃疡面积×100.00%。

1.4 统计方法

整理及汇总实验数据，用SPSS 22.0统计学软件处理，（±s）表示计量资料，t检验表示组间差异，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者HE染色情况对比

干预组治疗后肉芽组织HE染色存在新鲜肉芽组织，主要表现为成纤维细胞、中性粒细胞浸润，并形成大量的新生毛细血管；常规组成纤维细胞与中性粒细胞浸润与干预组相比要少。

2.两组织Masson染色对比

干预组治疗前后胶原纤维沉积为（9.9±3.2） %VS（23.3±6.9）%，t=-11.251，（P＜0.05）；常规组治疗前后为（9.2±2.5）%VS（10.3%±3.5）， t=-1.924。干预组治疗前后胶原面密度差值（13.3±5.4）%显著高于常规组（1.2±2.5）%，t=9.257（P=0.002）。

表1 治疗后创面愈合面积对比（x ±s）

2.3 免疫组化染色分析

bFGF阳性细胞在免疫组化切片显示为棕黄色或棕褐色颗粒。干预组治疗后棕黄色颗粒明显增加，光密度显示bFGF表达水平为（0.424±0.090），显著高于治疗前（0.22±0.03），t=14.356（P＜0.05）；常规组治疗前后变化不明显，（P＞0.05）；干预组治疗前后光密度差值（0.20±0.05）vs常规组（0.02±0.02）差异有统计学意义，t=12.04（P＜0.05）。

2.4 Western blotting法分析

干预组治疗前肉芽组织bFGF表达水平为0.67±0.20，治疗后为 2.99±1.12，t=-10.723（P＜0.05）；常规组治疗前后（0.63±1.20 vs 0.70±0.17）差异不明显；干预组治疗前后bFGF灰度差值（2.31±0.99）与常规组（0.11±0.08）比较差异有统计学意义，（t=10.142，P＜0.05）。

2.5 两组治疗后创面愈合面积比较

常规组治疗5、10 d与15 d后，创面愈合的面积均小于干预组，具体数据见表1。

3 讨论

该研究发现创面负压治疗可使糖尿病足患者创面肉芽组织中纤维细胞、成纤维细胞以及毛细血管胚芽的数量多于常规组，bFGF表达高于常规治疗组，并使创面愈合快于常规治疗组。

糖尿病足具有迁延不愈的特点。细胞因子在伤口愈合中的作用至关重要[3]。bFGF是促进创面愈合的一种关键因子，通过刺激成纤维细胞增殖、迁移、分化，调节血管生成和促进胶原蛋白沉积，加速创面愈合[3]。该研究显示，创面负压可以增加bFGF在糖尿病足创面表达，促进肉芽组织中纤维细胞、成纤维细胞以及毛细血管胚芽生长，在加速糖尿病足创面愈合中发挥了重要作用，值得进一步推广。

[1]中国医疗保健国际交流促进会糖尿病足病分会.中国糖尿病足诊治指南[J].中华医学杂志, 2017,97(4) :251-258

[2]Bertelsen,C.A.,Fabricius,R.,Kleif,J. et al. Outcome of negativepressure wound therapy for open abdomen treatment after nontraumatic lower gastrointestinal surgery: Analysis of factors affectingdelayed fascial closure in 101 patients[J]. World Journal of Surgery, 2014,38(4):774-781.

[3] Schweigerer L, Neufeld G, Friedman J, et al. Capillary endothelial cells express basic fibroblast growth factor, a mitogen that promotes their own growth[J]. Nature. 1987，325(6101):257-259.