草莓茎尖脱毒及原种苗的网室繁育技术

赵霞，宋勇义，梁树乐

（1.烟台市牟平区果树技术推广中心，山东牟平264112；2.中国农业大学烟台研究院，山东烟台264670）

草莓是蔷薇科草莓属（Fragaria spp.）多年生草本植物，果实酸甜适口，素有“水果皇后”的美称。果实成熟早，温室栽培可以供应整个冬季市场，填补果品淡季，同时草莓也是重要的食品加工原料。草莓是靠匍匐茎进行无性繁殖的作物，经过几代后，容易感染多种病毒。感染病毒病的草莓生长缓慢、叶片皱缩、果实小而畸形、品质变差。我国已鉴定明确的草莓病毒病主要有四种，即草莓斑驳病毒（SmoV）、草莓轻型黄边病毒（SMYEV）、草莓镶脉病毒(SVBV）、草莓皱缩病毒(SCrV）等。一旦感染病毒，常规药剂很难进行防治，极大地制约了草莓产业的发展。

通常草莓脱毒苗在培养瓶中增殖扩繁，容易导致植物激素的累积，造成后代变异，如不易成花、产量低、畸形果多等，给草莓生产带来极大风险。采用热处理结合茎尖组织培养，获得草莓试管苗，在试管内不增殖的情况下，直接进行炼苗移栽，然后对移栽成活的试管苗，通过指示植物法进行病毒检测，然后对获得的脱毒原种苗在网室内进行繁育，进而获得新一代苗。通过这种方法繁育的一代苗，比通过单纯用试管苗进行多代增殖繁殖的变异小，生产风险降低，可以在草莓脱毒育苗中使用。针对草莓脱毒快繁，进行了5年的观察试验，并对草莓脱毒结合网室育苗技术进行总结如下：

1 草莓脱毒原理

植物体内的病毒是通过维管束纵向疏导和胞间连丝横向传播的，茎尖是植物细胞分裂最旺盛的组织，其生长点顶端还没有形成维管束，植物体内病毒的增殖、扩散和传播速度较植物茎尖分生组织细胞的分裂速度慢，所以茎尖分生组织往往不带病毒，因此通过茎尖培养可以获得脱毒植株。茎尖脱毒为了取得较好的脱毒效果，在保证成活率的前提下尽量切取较小的茎尖生长点。

热处理是指在35～40℃的温度条件下，植物组织中的很多病毒可被钝化，同时这种高温对植物组织的伤害较小，植株可以继续生长，因此利用热处理期间生长的枝、芽为材料进行繁殖，可以获得脱毒植株。

2 茎尖结合热处理脱毒

选择草莓品种6月份萌发的草莓匍匐茎作为试验材料，要求匍匐茎生长充实，小叶尚未展开，剪取4～5cm长的匍匐茎顶部。先用洗洁精洗刷草莓匍匐茎表面，用流水冲洗2h。在超净工作台上，将洗后匍匐茎顶端留2～3cm长，先后用75%酒精消毒30s、0.1%的升汞溶液消毒6～7min，再用无菌水冲洗 3～5 次。

将消毒后的草莓匍匐茎置于解剖镜下，剥取茎尖，切取0.2～0.3mm，切得越小脱毒效果越好，但成活率低，切得越大成活率高但脱毒效果差。将切取的生长点立即置于启动培养基上，启动培养基成分是MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L+GA0.5mg/L，蔗糖 30g/L，pH 值 5.8，琼脂 6～6.5g/L，经121℃压力灭菌15min后，置于温度25℃，光照1500～2000Lx、日照时数16h的培养条件下，进行启动培养。一般熟练的组培工每天可以剥取50个草莓生长点。

茎尖分化出植株以后，将培养瓶移入人工气候箱进行热处理，39℃/18℃（昼/夜）变温30d结合38℃恒温30d处理，也可以采用38℃恒温46d处理，这两种热处理的效果都很好。

3 草莓脱毒苗的检测

通过茎尖培养得到的草莓苗，只有经检测鉴定其植株没有含指定病毒时，才可称为脱毒苗。指示植物小叶嫁接法是草莓病毒病鉴定的一种常规有效的方法。应用较多的指示植物有EMC、UC5、UC10、UC11。小叶嫁接法是将待鉴定植株小叶嫁接到指示植物上，嫁接15d后开始观察症状表现，草莓斑驳病毒嫁接后10～20d指示植物开始出现症状，说明草莓病毒在嫁接后2周内就能从带病毒接穗传到指示植物上。草莓镶脉病毒嫁接后15～25d表现出症状。草莓皱缩病毒和草莓轻型黄边病毒表现症状较晚，一般嫁接30～45d后才能表现症状，症状先在新展开叶上表现，然后在老叶上出现。EMC和UC5对草莓斑驳病毒、草莓轻型黄边病毒、草莓皱缩病毒表现敏感，UC10和UC11只对草莓皱缩病毒和草莓轻型黄边病毒敏感。

4 草莓脱毒苗的炼苗移栽

草莓脱毒苗的移栽最好在温室大棚中进行，温室的通风口用卡槽固定上40目的防虫网，或者在网室中进行，尽量减少组培苗从培养瓶中移出时生长环境的较大变化，以提高移栽成活率。首先将组培苗放入温室中，在自然光下进行炼苗3～4d，然后拧松瓶口2～3d，当组培苗无异常反应时，将其移栽到种苗穴盘中。栽培基质采用草炭土和珍珠岩2:1的比例，在栽植过程中，一定要将组培苗根系的琼脂清洗干净，用600倍的多菌灵浸泡草莓根系，如果根系过长，可以剪去部分老根后移栽。移栽后灌透水，前期放在小拱棚内保湿，同时适当用遮阴网遮阴，温度保持15～25℃，空气湿度85%～90%。草莓根系对肥很敏感，炼苗期不要施肥，15d后，可慢慢撤去小拱棚，增加光照和通风。

5 脱毒苗的网室繁育

经病毒检测获得的草莓脱毒苗，为避免后代产生变异，一般不在试管内进行增殖，通过网室进行保持及扩繁，防虫网以40目尼龙网较好。对每株原种苗编号，进行常规的生产栽培，并观察每个标号植株的生长及结果性状，符合生产要求的，且形正、产量高、无畸形果、果实颜色美观、抗性强的植株留下，作为繁育的原种苗，不符合要求的要及时拔除。

目前草莓繁殖主要采用两种方式，即匍匐茎育苗和高架育苗，网室中通常采用匍匐茎的方法进行繁殖，一般可以采用性状优良的原种苗繁殖后，再利用一代苗繁殖成二代苗供生产作为母苗使用。

5.1 网室匍匐茎育苗

苗圃地应选择土质疏松、肥沃的沙壤土地块，要求排灌方便，呈中性反应、有机质含量在1.5%以上、切忌选用土质粘重的地块。每667m2全年可繁殖3万株左右的优质秧苗。每畦栽1行，株距70～80cm，脱毒草莓苗缓苗后，如果发现叶色较淡，叶柄较细，应进行追肥。如果采用根外追肥，尿素和磷酸二氢钾的浓度应控制在0.2%，追肥间隔10～15d。可采用自动喷灌、滴灌装置喷滴保湿，做到畦面土壤潮湿又不积水，为母株生长及匍匐茎的抽生提供适宜生长条件。育苗地由于土质肥沃，空间大，极易生草，需多次反复进行除草。匍匐茎发生前，结合除草、松土，及时去除老叶。当匍匐茎大量发生后，不宜下锄，最好用手拔除杂草。

当秧苗发生匍匐茎后，要及时引蔓、压土，使匍匐茎在地面均匀分布，早发不定根。当产生的匍匐茎苗数量已达到繁殖系数时（30～60株），对匍匐茎摘心，此后再发匍匐茎也应及时去掉，利于匍匐茎苗生长，使之更加粗壮，利于进一步繁苗。

整个生长期，病虫害应以防为主，避雨栽培可有效减少草莓病害的发生，如发现有病虫危害，特别是夏季雨后炭疽病、叶斑病等叶片病害发生时，需进行化学防治。在草莓匍匐茎开始伸长、田间摘老叶结束及降雨前后进行重点预防，较为有效的药剂有咪酰胺、二氰蒽醌、速克灵、炭特灵、世高、甲基托布津等。7～8月的虫害主要是斜纹夜蛾，可选用的农药有农地乐1000倍或杀虫素2000倍或万灵1000倍液等，可交替进行防治，间隔期10d左右。叶斑病可用多菌灵600倍液和百菌清600～800倍液等交替防治。

5.2 高架育苗

在生产上可以采用高架育苗，与传统育苗方式相比，该方式采用新型的网槽式立体架进行育苗，以充分地利用空间、提高繁殖系数、培育壮苗、促进草莓花芽分化、并能有效避免病害发生。为降低成本，也可以自建种植架，一般架高1.8～2.0m，用长花盆或木箱栽植，往下分层依次将穴盘摆在架子上，随着匍匐茎形成的小苗逐步逐层压到穴盘中。栽培基质采用草炭土、椰糠、珍珠岩等，按照一定的比例混合，一般可以采用一份草炭土，两份椰糠或珍珠岩。具体的管理方法和操作及病虫害的防治可以参考网室匍匐茎育苗。