影响兽医实验室抗体检测结果因素及对策

郁再洛 （广西凌云县动物疫病预防控制中心 533199）

1 试剂因素

试剂选择是保证抗体检测质量的关键要素，但不同厂家的试剂在使用效果上仍存在差异，在购买与ELISA检测相关试剂时应引起注意，尽量购买与ELISA检测试剂盒相配套的化学试剂，注意ELISA检测试剂盒相配套的化学试剂生产日期及保存环境温度。保存方式不对均会影响ELISA检测结果，过期的试剂也会出现假阳性[1]。

2 样品因素

被检测的样本应该是新鲜的，尤其是血清样本，在采集过程中，应使用无菌采集管和采集针，分离血清后要分装到无菌EP管中，由于被检样品的污染可以导致ELISA敏感性和准确性降低。因此，采集样品时应注意无菌操作，减少被检验品的污染。被检样品的保存温度要适宜。尤其是抗体检测，样品要进行分装若干份，严禁反复冻融样品，被检样品在反复冻融过程中会破坏蛋白质结构，在检测过程中易形成假阳性，因此，被检样品在严禁反复冻融。

3 人为操作因素

人为因素也是影响兽医实验室抗体检测结果的主要因素，人为因素主要表现在加样、温育、洗板、显色、结果判定等众多因素均可以影响实验结果。

3.1 加样操作因素

不同类型抗体检测技术被应用于动物传染性疾病抗体效价检测中，在检测过程中加样成为影响动物传染性疾病抗体效价主要因素。尤其在添加样品过程中，一定要注意加样过程中不能出现气泡，加样要均匀，加样过程中一定要定量，一般为50μl样品，轻轻加到被检样品孔。另外，要注意样品在检测前一定要解冻完全，样品在使用之前提前拿出来，在室温解冻后，混合均匀后，在进行检测。

3.2 孵育时间与温度

ELISA检测相关抗体时，被检样品在加完后，一般进行孵育，使被检样品和所包被抗原或者抗体更好的结合，在被检样品和所包被抗原或者抗体更好的结合时需要合适温度与时间。不同类型抗体检测过程中应参照说明书要求进行孵育，孵育时间和温度严格按照说明书推荐进行操作。使ELISA包被的抗原或者抗体失活后，使被检样品不能与抗体或者抗原结合形成抗原符合物，严重影响实验结果。

3.3 洗板次数因素

ELISA检测相关抗体时，加完二抗进行孵育后需进行洗板，一般情况性有手工洗板和机器洗板两种方式。尤其在洗板过程中，洗涤次数应该合理，洗涤次数过多容易洗掉反应结合的复合物，洗板次数过少导致洗涤不干净，容易造成二抗稀释液的残留，影响反应结果。在洗涤完后注意拍板，把多余洗涤液甩出去，以免影响实验结果。

3.4 结果判定因素

在检测过程中，显色反应结束，加终止液，将酶标板放在酶标仪上读取结果要在15min内完成，设定的波长要与试剂说明书保持一致，酶标仪使用前先预热15～30min后，空白板自检1～2次再进行样品测试[2]。

4 环境因素

温度、湿度等外界的环境对ELISA检测结果影响极大。实验室温度过高或过低都会影响试剂的稳定性、敏感性和样品与试剂的有效结合，实验室检测时适宜的温度是20～25℃。

综上所述，用不同类型的ELISA检测动物相关传染性疾病抗体效价时，操作过程中应严格按照说明书进行操作，避免出现不良因素影响实验结果，因此，在实验过程中严格进行操作，减少误差，提高实验的准确性。

参考文献：

[1]王奥.化学实验室检测结果质量控制的影响因素及对策[J].化工设计通讯,2017,43(2):125,143.

[2]李清竹.影响血凝和血凝抑制试验结果的因素[J].现代畜牧兽医,2012(5):70.