中性粒细胞碱性磷酸酶活性在各血液病诊断中的价值和意义

姜方毅

[摘要] 目的 探讨中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）活性在各血液病诊断中的价值和意义。方法 方便选取130例该院于2015年1月—2017年1月所收治的血液病患者及37名健康人静脉血制备血涂片，利用Kaplow偶氮偶联法行NAP细胞化学染色，并利用显微镜油镜对100个成熟中性粒细胞进行观察，记录观察结果。结果 对照组不同性别的NAP阳性率（34.78%vs28.57%）及NAP积分[（46.89±23.82）分vs（48.03±22.34）分]比较差异无统计学意义（χ2=0.241，P>0.05；t=0.236，P>0.05）；研究组患者当中，ALL、LR、AA、CLL、MM及PV疾病患者的NAP积分较对照组明显更高（t=9.712，P<0.05；t=15.614，P<0.05；t=10.683，P<0.05；t=9.231，P<0.05；t=7.032，P<0.05；t=5.672，P<0.05）；CML、MDS-RAEBT及PNH疾病患者的NAP积分较对照组明显更低（t=5.981，P<0.05；t=4.143，P<0.05；t=4.143，P<0.05）；AML疾病患者的NAP积分较对照组略低[（19.1±1.2）分vs（21.3±0.2）分]，但两者比较差异无统计学意义（t=1.321，P>0.05）。结论 NAP活性可有效辅助诊断各血液疾病，并对不同疾病进行鉴别，具较高临床应用价值。

[关键词] 中性粒细胞；碱性磷酸酶活性；血液病

[中图分类号] R5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2018）11（a）-0185-03

[Abstract] Objective To investigate the value and significance of neutrophil alkaline phosphatase （NAP） activity in the diagnosis of various hematological diseases. Methods A total of 130 patients with blood diseases admitted to the hospital from January 2015 to January 2017 and 37 healthy individuals were convenient enrolled in venous blood to prepare blood smears. NAP cytochemical staining was performed using Kaplow azo coupling method. 100 mature neutrophils were observed with a microscope oil mirror and the observations were recorded. Results There was no significant difference in NAP positive rate （34.78% vs 28.57%） and NAP score [（46.89±23.82）points vs （48.03±22.34）points] in the control group （χ2=0.241， P>0.05； t=0.236， P>0.05）； among the study group， the NAP scores of ALL， LR， AA， CLL， MM and PV patients were significantly higher than those of the control group （t=9.712， P<0.05； t=15.614， P<0.05； t=10.683， P<0.05； t=9.231， P<0.05； t=7.032， P<0.05； t=5.672， P<0.05）； NAP scores of patients with CML， MDS-RAEBT and PNH diseases compared with the control group significantly lower （t=5.981， P<0.05； t=4.143， P<0.05； t=4.143， P<0.05）； NAP scores of patients with AML disease were slightly lower than those of the control group [（19.1±1.2）points vs （21.3±0.2）points， but there was no significant difference between the two （t=1.321， P>0.05）. Conclusion NAP activity can effectively assist in the diagnosis of various blood diseases， and identify different diseases， which has high clinical application value.

[Key words] Neutrophils； Alkaline phosphatase activity； Blood diseases

堿性磷酸酶多见于成熟的中性粒细胞、网状细胞及吞噬细胞当中，其他细胞中的碱性磷酸酶含量较少，即使进行检测，检测结果也多为阴性[1]。中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）的活性受细胞成熟度、功能、病菌种类及感染程度的影响，观察NAP活性可帮助临床对血液病进行诊断和鉴别。该案方便选取了该院于2015年1月—2017年1月所收治的130例各血液疾病患者及同期于该院行健康体验 的37名健康患者为对象进行研究，探讨了NAP在各血液疾病诊断中的价值与意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

方便选取该院所收治的血液病患者130例作为研究组，所有患者均依骨髓穿刺涂片细胞学检查、骨髓活检病理检查及相关实验室检查，并结合临床参照文献得以确诊，其中男62例，女68例；年龄5～82岁，平均（35.7±12.1）岁；急性髓细胞白血病（AML）25例，再生障碍性贫血（AA）20例，急性淋巴细胞白血病（ALL）18例，慢性髓细胞白血病（CML）18例，类白血病反应（LR）6例，骨髓增生异常综合征（MDS-RAEBT）12例，真性红细胞增多症（PV）4例，阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）2例，多发性骨髓瘤（MM）14例，慢性淋巴细胞性白血病（CLL）11例 。另选同期于该院行正常体检的健康人37名作为对照组，其中男23名，女14名；年龄5～79岁，平均（35.2±12.2）岁。两组患者在性别、年龄等方面比较差异无统计学意义（P>0.05）。该研究经该院伦理委员会批准，患者知晓该案研究内容，并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 试剂与仪器 ①NAP固定液；②NAPⅠ液；③NAPⅡ液；④苏木素复染液；⑤仪器：显微镜、37℃恒温水浴箱、电子计数器。

1.2.2 方法 利用真空采血法于清晨采集所有研究对象的空腹静脉血10 mL，并制备血涂片。采取Kaplow偶氮偶联法行NAP细胞化学染色，即先于新鲜涂片上滴加固定液，30 s后行水洗并等待风干；将NAPⅠ液与NAPⅡ液混合，形成基质液，风干后的涂片置于基质液中，并存放于37℃环境下0.5 h；连缸取出以流水冲洗数分钟后待风干；利用苏木素将风干后的涂片再次染色，时间1～2 min，再以水冲洗待风干，之后即可进行镜检。

1.3 观察指标与评判标准

以五级积分值记录两组患者100个成熟中性粒细胞的观察结果，依每个细胞浆内所含颗粒的多少分为5级，分级标准：阴性反应为0分；胞浆未超过1/2区域现灰黑色至棕黑色沉淀记为1分；胞浆1/2～3/4区域现灰黑色至棕黑色沉淀记为2分；胞浆所有区域均现灰黑色或棕黑色沉淀，但密度较低，记为3分；胞浆所有区域均现深黑色团块沉淀，且密度较高，甚至覆盖胞核，记为4分。

1.4 统计方法

利用 SPSS 17.0统计学软件对所得数据进行分析，以均数±标准差（x±s）表示计量资料，行t检验，以百分比（%）表示计数资料，并利用χ2进行检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对照组不同性别NAP指标比较

对照组37名健康人当中，8例男性NAP呈阳性，阳性检出率为34.78%，4例女性NAP呈阳性，阳性检出率为28.57%，男性平均NAP积分为（46.89±23.82）分，女性平均NAP积分为（48.03±22.34）分，不同性别NAP阳性率及NAP积分比较均差异无统计学意义（χ2=0.236， P>0.05；t=0.041，P>0.05）。男女NAP阳性率及NAP积分比较均差异无统计学意义（P>0.05）。

2.2 各血液病患者的NAP积分及其与对照组的比较

研究组中ALL、LR、AA、CLL、MM及PV疾病患者的NAP积分较对照组明显更高（P<0.05）；而CML、MDS-RAEBT及PNH疾病患者的NAP积分较对照组明显更低（P<0.05），且MH、CML的NAP积分最低；AML患者的NAP积分较对照组虽略低，但两者比较差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

2.3 各血液疾病患者LSD和S-N-K多重比较结果

AA的NAP积分与PNH差异有统计学意义（t=4.871；P<0.05）；LR与CML、ALL与AML、MH与MM、CLL与CML的NAP积分比较均差异有统计学意义（t=16.712，P<0.05；t=15.123；P<0.05；t=4.332；P<0.05；t=57.874；P<0.05）。

3 讨论

很多血液疾病在病情早期时因无典型性临床症状，但行血液指标检测时其各项指标的水平又存在明显差异，加大了临床诊断的困难度，致临床易出现误诊和漏诊现象[2]。NAP是一种存在于中性粒细胞中的标志性的酶，其多见于成熟的中性粒细胞当中，是由胞质所含特殊颗粒所释放的一种碱性条件，可催化各类醇及酚的单磷酸脂水解[3]。NAP活性在很大程度上可反映粒细胞的成熟度及功能，同时，其也受感染程度、病菌种类的影响[4]。若中性粒细胞被活化，NAP阳性率及积分会明显升高[5]。如遇严重细菌感染，LR、AA、ALL、CML的NAP活性会发生急性变化[6]，PV、MM疾病发生后， NAP活性会明显增强，而CML、MH、MDS-RAEBT及DNH等疾病中的NAP活性会有所下降。

该案观察并对比了130例各血液病患者及37例健康人的NAP活性检测结果，研究结果显示，健康人不同性别的NAP阳性率（34.78%vs28.57%）及NAP积分[（46.89±23.82）分vs（48.03±22.34）分]比较匀差异无统计学意义（P>0.05），此研究结果与任文平等人[7]的研究结果（34.80%vs30.15%）、（47.10±23.75）分vs（48.80±20.58）分]基本保持一致，提示正常人NAP阳性率及NAP积分与性别无关。对比两组研究对象的NAP观察结果，研究组中ALL、LR、AA、CLL、MM及PV等疾病患者的NAP積分较对照组明显更高（P<0.05），而CML、MH、MDS-RAEBT及PNH疾病患者的NAP积分较对照组明显更低（P<0.05）。由此可以看出，NAP活性可有效反应患者血液疾病的发生，有助于提高临床诊断的正确性[8]。另，对研究组内不同血液疾病患者的NAP检测结果进行对比显示，AA与PNH、LR与CML、ALL与AML、MH与MM、CLL与CML的NAP积分比较均差异有统计学意义（P<0.05）。此提示，针对早期无典型临床症状，或是临床症状相似的血液病，可有采取观察NAP活性来对疾病进行鉴别。如，针对AA与PNH，在疾病发生时，AA的NAP活性会明显升高，且患者贫血程度越严重，其NAP积分就越高，即使患者病情有所缓解，其NAP积分也很难再恢复至正常水平；而PNH患者的NAP积分则会下降[9-10]。

综上所述，NAP活性可有效辅助诊断血液病，并鉴别各血液病类型，具较高临床应用价值。

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（收稿日期：2018-08-09）