食品中肌醇的微生物检测方法

□ 曾凤泽 乌兰察布医学高等专科学校 姚宇泽 乌兰察布市兽药监察所

肌醇属于维生素B族的范畴，有助于为人体细胞正常生长提供营养支持，有助于保障动物生理功能正常性。在对肌醇含量进行检测的过程中，高效液相色谱法、质谱法和气相色谱法均十分常见，但均存在一定的不足之处，如气相色谱法衍生化效率低下、气质联用法检测成本高。而微生物检测方法凭借其较高的灵敏度和重现性，在食品肌醇含量的测定过程中得到了广泛使用。基于此，为了充分提升肌醇含量测定的准确率，本研究运用微生物检测方法测定了维生素饮料中的肌醇含量，现将结果总结如下。

1 食品微生物检测方法概述

食品微生物检测是运用微生物学的理论与方法，检验食品中微生物的种类、数量、性质及其对人的健康的影响，以判别食品是否符合质量标准的检测方法。现阶段，食品微生物检验方法是食品质量管理必不可少的重要组成部分，它贯彻“预防为主”的方针，可以有效地防止或者减少人畜共患病情况的发生，保障人民的身体健康。食品微生物检验是衡量食品卫生质量的重要指标之一，也是判定被检食品是否食用的科学依据之一。通过食品微生物检验，可以判断食品加工环境及食品卫生情况，能够对食品被细菌污染的程度作出正确的评价，为各项卫生管理工作提供科学依据。肌醇是人体内重要的生长因子，主要以六磷酸酯的形式存在，若人体内缺乏含量充足的肌醇，极容易诱发脱发和湿疹等病症。有学者在研究中证实，肌醇对肝脏生长和骨髓发育起到了十分重要的作用，有助于实现对心肌细胞的有效保护。现阶段，在各类保健食品和功能性食品的生产过程中，肌醇已经成为一种常见的添加剂。食品是人体摄入肌醇的主要来源，肌醇能有效降低胆固醇和预防湿疹，对降低肝脏脂肪和预防动脉硬化起到了十分重要的作用。借助于微生物检测方法实现对食品中肌醇含量的科学测定，有助于判断所摄入食品的健康性和科学性，为个体饮食结构的合理调整提供科学的参考依据。

2 肌醇的微生物检测——以维生素饮料为例

2.1 一般资料

微生物检测试验所采用的试验材料主要包含高压灭菌器、旋涡混合器、离心机以及生化培养箱等设备。为了保证在检验试验过程中数据精准度，在机械设备的选择方面，本文根据以往试验开展过程中主要采用的生产品牌类型，选定了拥有质量保证的某品牌设备，同时，根据国家标准，选择某款维生素饮料作为研究对象，对肌醇水平进行检测。

2.2 方法

针对某款维生素饮料所开展的肌醇微生物检测试验，主要分为试验材料制备和试验培养两个部分。

（1）试验人员首先需要进行的是肌醇储备液的制备。在试验当中，试验人员将已经完成干燥处理的标准肌醇物质进行称取，称取数量为0.005 g，将其放入到容量瓶内部，利用蒸馏水对其进行定容。容量瓶总容量为250 mL，完成定容后肌醇标准液浓度为每毫升0.2 mg。随后，试验人员利用试验设备，吸取容量瓶内部的肌醇标准液，吸取总量为10 mL，将其加入到容量为200 mL的容量瓶当中，再次利用蒸馏水对其进行定容。此时，容量瓶内部的肌醇溶液浓度为每毫升10 μg，完成中间液制备，将两组液体共同存放如冰箱中低温保存。试验开展时，由试验人员将中间液取出，进行吸取10 mL液吸取，并将两次吸取中间液分别放入到100 mL容量瓶和50 mL容量瓶内部，利用蒸馏水进行定容。

（2）与此同时，试验人员需要同时开展菌液的制备处理。首先选定在无菌环境当中，利用酵母菌进行活化，并将其在30 ℃培养基当中进行24 h培养。为了能够保证培养活力，在培养当中需要培养到二至三代，再将其后代斜面当中的菌种作为储备菌种，放入2 ℃环境中保存，保存时间控制在半个月以内。在开展试验前一天从保存环境去除，运用生理盐水对其进行灭菌，使其成为菌悬液，进入到离心管内部。启动离心管，进行3 min离心处理，每分钟离心2000转。完成后通过漩涡振荡器进行菌悬液于生理盐水的混合完成三次以上的洗涤。洗涤完成后，将其加入试管内部，借助分光光度计对其波长进行测量。测量结果显示透光率达到60%以上时表明该菌悬液的透光率能够利用增减菌液量的方式来实现调节。

（3）完成处理之后，试验人员需要将已经完成制备的肌醇溶液进行处理，通过高压灭菌器对标准液进行高压消化，消化时长为一小时，温度为120 ℃。处理之后将其冷却至室温，再利用盐酸溶液、氢氧化钠溶液进行调试，使其转变为微酸性。pH值测试为5，进行250 mL量瓶定容。此时，利用蒸馏水-肌醇标准液与已经完成测定的培养基共同加入试管当中，试管内部肌醇含量为0～10 μg。除不含有肌醇（即为0肌醇试管）不进行菌悬液接入外，其余试管均加入50 μL菌悬液。开启漩涡振荡器对每一个试管进行震荡，使其内部肌醇标准液与菌悬液混合，再打开培养箱，调整培养箱内部温度，温度达到30 ℃后，加入混合溶液进行培养，并对培养结果进行测量。

2.3 结果分析

通过对试验结果进行统计和分析可以看到，在肌醇变化的标准曲线当中，肌醇试样0～10 μg试管呈现出良好的线性关系。其中肌醇含量与吸光度之间呈现出正比关系。通过计算统计可以得出肌醇、吸光度二者变量的回归方程为y=0.0875x+0.7328，其中相关系数R2约为0.994。与此同时，在对所选样本维生素饮料进行平行试验当中，可以透过试验结果对所选几种不同品牌的维生素功能饮料进行数据观察，最终得到精密度情况。三组维生素饮料测试样本虽然存在一定的精密度差别，但是彼此之间差别较小，表明三个品牌维生素饮料内部肌醇水平相对接近。除此之外，在所进行的回收率试验方面，通过与其他类型食品试验的对比分析，能够较为明显地观察到维生素饮料实验品在肌醇标准溶液方面回收率情况。相比于其他类型食品试验，维生素饮料的回收率相对稳定，大体区间维持在98.6%～100.3%，准确度较高。

3 讨论

通过试验方式对维生素饮料试验样品进行肌醇水平的微生物检测可以看到，所采用的葡萄汁酵母菌测定方法，具有简单、实用等特点。所完成的结果检出符合微生物测定要求，其检出限更低、灵敏度更高，保障了检出结果的准确无误。这些结果都从侧面证明了微生物操作方法能够较好地还原食品当中肌醇含量水平。但同时，微生物检测方法所存在的不足之处，也同样是明显的。其中检验过程复杂，检验标准液、中间液制备过程过于繁琐。对于实验室和试验人员的要求极高，因此所受到的客观影响因素液较为普遍[1]。

笔者提出，在今后的微生物试验检测方法应用当中，试验检测人员需要注重多个方面的检测细节。首先，在器皿的洗涤方面，试验人员应当对试验器皿是否存在污染进行观察，对污染较为严重的器皿，需要选用碱性洗液对其加以洗涤，再利用蒸馏水对其进行加热处理，以保证处理完成后的器皿可以直接应用于试验现场之中[2]。其次，对于应用材料葡萄汁酵母菌的活化过程，需要采用专门使用的培养基，培养基需要保证菌种自身所拥有的生长特点，并维持在一个完全标准化的无菌环境中进行操作。值得注意的是，试验人员在肌醇测定过程中所采用的培养基，应当严格控制配制流程，一旦配制流程出现错误，很有可能造成培养成功率降低，对测定结果的准确性产生不利影响。因此，要确保检测过程的顺利进行，就要杜绝外界干扰的发生[3]。

4 结语

将微生物检测方法作为测定食品中肌醇含量的主要方法，能够有效提升检测的灵敏度，具有方便快捷的优势，且检测所需时间较短，检出限较低，与其他检测方法相比，具有不可比拟的优势，在食品检测过程中具有较强的推广价值，值得被广泛借鉴使用。