原癌基因和链蛋白在肝癌中的表达及临床意义

王娟+黄炳臣+卢运龙+罗春英+吴雪铭+马凤艳+成迎迎+龙喜带+黄小英

【摘要】目的探讨原癌基因（c-myc）和β-链蛋白（β-catenin）在肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC，以下简称“肝癌”）中的表达及意义。方法通过免疫组化EnVision法检测108例肝癌组织及癌旁组织中c-myc和β-catenin的表达，观察c-myc和β-catenin在肝癌组织中的表达与临床病理特征之间的关系。结果c-myc和β-catenin在肝癌组织中的表达率分别为42.59%（46/108）和40.74%（44/108），c-myc和β-catenin在癌旁组织中阳性率分别为1481%（16/108）和4.63%（5/108），二者比较差异有统计学意义（P<0.001）。c-myc和β-catenin在癌组织中的表达与肿瘤分化程度相关（P<0.001），与年龄、性别、有无癌栓、肿瘤个数、肿瘤直径、癌旁组织是否有肝硬化均无统计学关联（P>005）。结论在肝癌组织中c-myc和β-catenin表达密切相关。

【关键词】c-myc；β-catenin；肝癌；表达；临床意义

中图分类号：R735.7文献标识码：ADOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2017.06.001

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression and significance of c-myc and β-catenin in HCC（Hepatocellular carcinoma）.MethodsThe relationship between c-myc and β-catenin expression in HCC and the clinicopathological characteristics was observed through respectively detecting the expression of c-myc and β-catenin in 108 cases of HCC tissues and adjacent tissues by Immunohistochemical EnVision method.ResultsThe expression rate of c-myc and β-catenin in HCC tissues was 42.59%（46/108）and 40.74%（44/108）respectively，and the positive rate of them in the adjacent tissues was 1481%（16/108）and 4.63%（5/108），respectively，so difference between the two groups was statistically significant（P<0001）.The expression of c-myc and β-catenin in cancer tissues was correlated with the degree of tumor differentiation（P<0001），but it was not statistically related to age，sex，tumor thrombus，tumor number，tumor diameter and cirrhosis of adjacent tissues（P>0.05）.ConclusionThe expression of c-myc and β-catenin in HCC tissues was closely related.

【Key words】c-myc；β-catenin；HCC；expression；clinical significance

肝癌（HCC）是最常见的恶性肿瘤，是多基因突变、多因素和多步骤的复杂过程。近年来肝癌的发病率和死亡率呈逐步上升趋向[1]。该病具体的发病机制仍是研究热点。由于肝癌早期症状隐匿、进展迅速，很多患者临床确诊时已为晚期。原癌基因（c-myc）是细胞增殖的重要调节因子，与多种肿瘤发病机制密切相关。β-链蛋白（β-catenin）是一种通过参与信号传导、影响肿瘤发生发展的癌基因。笔者应用免疫组化方法检测c-myc和β-catenin在肝癌中的表达情况，分析它们表达的相关性及与临床病理参数的关系。1资料与方法1.1一般资料收集2013年5月至2017年5月在右江民族医学院附属医院住院手术的108例肝癌患者癌组织以及相应的癌旁组织作为研究对象，其中男性患者95例，女性患者13例，年龄22～74岁。患者术前均未进行任何抗癌诊断及治疗，每例均取肝癌组织及对应癌旁肝组织（距肿瘤邊缘2 cm），且所有病例均无明确肝外转移。按Edmondson分级法进行分级：Ⅰ～Ⅱ级为高分化75例，Ⅲ～Ⅳ级为低分化33例。临床资料包括患者的姓名、性别、年龄；病理资料包括肿瘤直径、肿瘤个数、癌旁组织伴肝硬化、门脉癌栓等。

1.2检测方法肝癌手术切除的所有标本经10%的福尔马林固定24 h，常规石蜡包埋切片。免疫组化染色EnVision两步法，DAB显色。c-myc和β-catenin抗体和试剂盒均购自福州迈新，所有操作步骤均按照说明书上进行。用PBS缓冲液作为一抗阴性对照。

1.3免疫组化结果判定β-catenin蛋白的阳性定位于细胞核，以核内有明显的棕色颗粒作为核阳性的判定标准；c-myc阳性定位于细胞核，以核内有明显的棕色颗粒作为核阳性的判定标准。

1.4统计学方法应用SPSS 23.0统计学软件进行分析，计数资料的组间比较采用χ2检验，相关性分析采用MeNemar相关分析，检验水准：α=0.05，双侧检验。2结果2.1肝癌组织和癌旁组织中c-myc和β-catenin的表达肝癌组织病理形态学发生改变（图1-A），c-myc阳性表达着色位于胞核，呈棕黄色（图1-B）；β-catenin阳性表达位于胞核，呈棕黄色（图1-C）。c-myc在肝癌组织、癌旁组织中阳性率分别为42.59%（46/108）和1481%（16/108）；β-catenin在肝癌组织、癌旁组织中阳性率分别为40.74%（44/108）和4.63%（5/108），二者差异均有统计学意义（P<0.001）。见表1。endprint

2.2肝癌组织中c-myc和β-catenin的表达与临床病理指标的关系c-myc和β-catenin在HCC中的表达与年龄、性别、有无癌栓、肿瘤个数、肿瘤直径、癌旁组织是否有肝硬化均无显著性相关（P>0.05），与HCC组织分化程度有显著相关性（P<0.001）。見表2。

2.3c-myc和β-catenin在肝癌中表达的相关性c-myc和β-catenin均为阳性表达30例，均为阴性表达48例，依据MeNemar的相关性分析，二者在肝癌中表达呈正相关性（r=0.855，P<0.001）。见表3。

3讨论目前为止，HCC的发病机制尚不是十分明确，主要是通过各基因的表达产物作用于肝癌细胞的增殖、分化、代谢过程，最终导致肝细胞癌变。

c-myc是一种基因核内转录因子，参与调控肿瘤细胞增殖及分化。研究发现，致癌基因c-myc扩增或过表达参与多种肿瘤的复发、转移[2]，在肿瘤的分化及预后方面起到关键作用[3]，其表达紊乱时会造成癌基因的激活，促进胃癌程序性细胞死亡[4]，它的异常表达参与胃癌的增殖及分化[5]。c-myc等多种原癌基因的激活及p53等抑癌基因的失活在肝癌形成的过程中起到至关重要的作用。此外，c-myc癌基因连续激活时可引起肝细胞的增殖和选择性转化，导致HCC的发生。黄炳臣等[6]检测81例肝癌组织发现c-myc参与肝癌的形成，且与肝癌的分化密切相关。本研究结果显示，c-myc在癌组织中阳性表达显著高于癌旁组织，二者差异有统计学意义。这表明c-myc的异常表达与肝癌的发生有密切的联系。我们还发现c-myc在HCC中的表达与年龄、性别、有无癌栓、肿瘤个数、肿瘤直径、癌旁组织是否有肝硬化均无统计学关联，与HCC分化程度有关，此结果与某些文献报道相一致，表明c-myc参与肝癌的形成，且可能与肝癌的分化程度有关。

Wnt信号通路主要有3条信号通路构成，Wnt/β-catenin信号通路是经典Wnt信号通路。迄今为止，Wnt/β-catenin是最受重视的信号通路，涉及多种肿瘤的形成机制。研究[7～9]发现在恶性肿瘤的细胞核中，Wnt/β-catenin异常的积聚与肿瘤预后不良有关。已有文献猜测Wnt/β-catenin信号通路可能参与了肝细胞癌变的过程。刘铭等人[10]通过110例肝癌标本发现β-catenin在HCC中的异常表达与肿瘤分化、被膜浸润等因素有关。Evason等[11]研究发现β-catenin在肝细胞癌早期发生改变、胞肝癌发生机制中起着重要作用。刘德忠等[12]用免疫组化检测83例肝癌组织发现β-catenin与肝癌的分化有关，癌组织分化越低其阳性表达越高，此外其表达紊乱对肝癌患者的预后有一定的影响。Witjes等[13]发现β-catenin与HCC组织学分化程度相关，低分化癌细胞中β-catenin表达升高。另外有文献认为阻断β-catenin的异常表达，可提高患者预后的情况，可为临床上治疗肝细胞癌提供一些新的思路。我们的研究结果显示，β-catenin在肝癌组织中阳性表达明显高于癌旁组织，二者差异有统计学意义，表明β-catenin的异常表达参与肝癌的形成。我们研究还发现β-catenin在HCC中的表达与年龄、性别、有无癌栓、肿瘤个数、肿瘤直径、癌旁组织是否有肝硬化均无统计学关联，与HCC组织分化的程度有关，与某些文献报道相一致，表明在肝癌中存在β-catenin胞核的异常积聚，猜测该因子在肝癌发生、发展中起着重要作用。

本研究对c-myc和β-catenin进一步行MeNemar相关性分析，发现二者表达有密切相关性，呈正相关。程云娟等[14]检测40例肝癌样本发现c-myc和β-catenin的异常表达与肝癌的发生相关，且可以用于评估肝癌发病程度的进展及预后。姚忠强等[15]研究发现肝外转移、术后复发及肿瘤分化的程度都与c-myc和β-catenin的异常表达有关，表明c-myc和β-catenin二者在肝癌形成的过程中起到协同作用，二者具有细胞内调节增殖和癌变的信号传导途径，即Wnt途径。但本课题目前仅研究二者在蛋白水平的表达，二者在基因水平的表达与蛋白水平的表达是否具有一致性尚不是非常明确，因此需进一步检测c-myc和β-catenin在基因程度中的表达，明确其与肿瘤分化、增殖及凋亡之间的关系。

综上所述，c-myc和β-catenin参与肝癌的形成，可能作为判断恶性肿瘤的程度及转移的重要依据。因此，深入研究c-myc和β-catenin二者在肝癌中的关系，为进一步探讨肝癌的具体发病机制提供新的思路。

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（收稿日期：2017-09-21修回日期：2017-11-09）

（编辑：梁明佩）endprint