CLIP3启动子区3bp indel与大肠癌发生相关性研究

王会平 杨 雪 朱占胜

1徐州医科大学基础医学院遗传学教研室 江苏省徐州市 221004 2徐州医科大学公共卫生学院 江苏省徐州市 221004 3徐州医科大学基础医学院病理学教研室 江苏省徐州市 221004

结直肠癌（CRC）是世界第三大最常见的癌症，其死亡率在恶性肿瘤中列第三位[1]，目前CRC发病机制仍未完全揭示，现有研究发现其与遗传相关[2]。凋亡是基因调控的程序化细胞死亡，细胞增殖与细胞凋亡的比例决定肿瘤的生长。TNF-α信号途径是细胞凋亡的主要途径之一。在CRC发生过程中，CLIP3通过调控RIP1的泛素化参与激活TNF-α信号途径诱导细胞凋亡的发生[3]，因此CLIP3与CRC的关系逐渐成为目前研究的热点。本项目首次发现并提出了CLIP3基因启动子区一个3-bp插入/缺失多态性（rs372459950）和CRC患病风险相关联，本研究对于CRC的预测和防治具有重要意义。本课题组调查了徐州市第二医院就诊的CRC患者与健康对照体检人群的rs372459950，试探讨其与CRC患病风险的相关度。

1 对象与方法

1.1 研究对象

CRC患者450例，男289例，女161例，年龄51.6±10.4岁，无高血压、糖尿病、严重肝肾疾病及心肺功能不全史，收集2015年5月至7月在徐州市二院入院治疗的CRC患者，患者符合我国卫生部2010年关于结直肠癌的命名和诊断标准。健康对照799例，选自健康体检人群的随机个体，男512例，女287例，年龄52.1±10.3岁，无相关病史。受试对象为徐州地区本地人群、汉族并且没有血缘联系。

1.2 标本收集

各受试对象均抽取静脉全血1.5 mL，采用DNA抽取试剂 (Qiagen)从全血标本提取DNA留用。

1.3 基因分型

基因分型采用基因测序的方法，抽提DNA的样本送上海生工公司测序。测序结果比照NCBI SNP database确定样本基因型，最终计数由不同二个实验者进行。

1.4 统计分析

采用Χ2检验分析除年龄外临床资料各因素差别；年龄两组差别采用双侧t检验；使用Χ2检验分析受试两组的基因型和等位基因频率差别；遗传多态性与CRC患病风险的相关度用逻辑回归分析进行分析，选取校正临床资料各因素后的比值比（OR）和95%置信区间（CI）表示， P＜0.05具有统计学意义。

2 结果

2.1 受试对象各组临床资料

450例CRC样本和799例健康对照样本人口学资料情况比较（见表1），数据提示各临床资料间无明显差别（P＜0.05）。

表1：病例组和对照组的临床资料

2.2 rs372459950基因座分型结果

经测序比对，分别得到插入/缺失（Ins/Del），插入/插入Ins/Ins），缺失/缺失（Del/Del）三种基因型。我们观察到缺失的碱基序列为CTT，对照组基因座基因型分布频率 Phwe＞0.05。

2.3 CLIP3基因插入/缺失多态性频率分布

研究中插入缺失多态的基因型及等位基因频率分布特点见表2，从表中可以看出，Del/Del基因型频率在病例组中的频率为8.2%，而在正常对照组中的频率为4.8%，显然病例组中Del/Del基因型频率高于正常对照组。

表2：CLIP3基因插入/缺失多态基因型分布

2.4 多态性与CRC易感性分析

逻辑回归分析（校正各临床资料因素）结果表明：带有杂合子和缺失型纯合子的个体CRC患病风险升高（OR=1.21，95%CI: 1.01-1.56，P=0.09）（OR=1.80，95%CI: 1.20-2.35，P=0.001）， 即 在 95%置信区间中，以插入型纯合子为对照，携带杂合子个体CRC患病风险增加21%（P=0.09），携带缺失型纯合子个体CRC患病风险增加80%（P=0.001）。上述分析数据表明rs372459950与CRC患病风险显著关联，并且杂合子和缺失型纯合子促CRC发生。

3 讨论

CLIP3启动子区3-bp插入/缺失多态有可能影响该启动子区活性，进而干扰CLIP3基因的转录，从而来调控CLIP3基因表达，而CLIP3在调节TNF-α介导的细胞凋亡中起着重要的作用，然而，在目前的研究中我们仅发现了CLIP3基因多态与CRC的关联性，CLIP3在CRC发生过程中促癌还是抑癌还需要进一步的功能实验鉴定。

近年来的研究发现在多形性成胶质细胞瘤细胞中CLIP3表达下降，患者的生存率明显下降。CLIP3与spy1作用，可以调节肿瘤抑制基因CYLD的表达。到目前为止，尚无在CRC中该调节通路被激活的相关报道，课题组猜测CLIP3可能通过不依赖TNF-α介导的细胞凋亡途径进行调控，这种潜在的通路有待探索。

本论文是首次发现在中国汉族人群中CLIP3基因启动子区域插入/缺失多态与CRC易感性之间存在显著关联，但本次实验人力，物力，财力都有限，调查范围仅局限在徐州地区的汉族人群，且未检测基因表达情况，得出更加明确的结论还有待于更大样本量和其他不同人群中相关研究数据的支持。

（通讯作者：朱占胜）

[1]Siegel R,Naishadham D,Jemal A.Cancer statistics,2013.CA：a cancer journal for clinicians.2013;63(01)：11-30.

[2]侯睿智,舒振波,侯睿达,刘艳.大肠癌相关基因突变与大肠癌遗传易感性的研究.中国实验诊断学 ,2017;21(01)：173-176.

[3]Fujikura D,Ito M,Chiba S,Harada T,Perez F,Reed JC, Uede T,Miyazaki T.CLIPR-59 regulates TNF-αinduced apoptosis by controlling ubiquitination of RIP1.Cell Death Dis.2012;3(02)：e264.