鸡传染性支气管炎活疫苗生产工艺研究

刘涛 柳珊 何平有 邹立宏 朱秀同 王帅/瑞普（保定）生物药业有限公司

刘子伟 翟含流/保定市莲池区动物卫生监督所

吴浩/保定市农业局

鸡传染性支气管炎( Infectious bronchitis，IB)是由冠状病毒科冠状病毒属的传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus，IBV)引起的一种急性、高度接触性传染病，给养禽业带来巨大的经济损失，疫苗免疫是防控该病的有效手段。本文对可能影响鸡传染性支气管炎活疫苗毒液效价的几个主要生产工艺参数进行优化试验，以期提高批次间毒液效价稳定性，提升生产效率。

一、材料

SPF鸡胚、0.01M PBS、鸡传染性支气管炎病毒H120株种毒（IB种毒）均由瑞普（保定）生物药业有限公司生产部提供。

二、方法

1.接种日龄的优化。将IB种毒用PBS稀释100倍，按0.1 ml/胚分别接种到10日龄、11日龄、12日龄SPF鸡胚，弃去24 h内死亡鸡胚，每日照蛋2次，及时冷藏死亡鸡胚，36 h全部收获；分别测定不同日龄接种鸡胚繁殖的毒液效价及收获量。

2.种毒稀释倍数、收获时间的优化。将IB种毒用PBS分别稀释10、100、1 000倍，按0.1 ml/胚接种到11日龄鸡胚，弃去24 h内死亡鸡胚，每日照蛋2次，及时冷藏死亡鸡胚，每个稀释倍数分30 h、36 h、42 h、48 h进行收获；分别测定不同稀释倍数、不同收获时间繁殖的毒液效价及收获量。

3.冷蛋时间的优化。将IB种毒用PBS稀释1 000倍，按0.1 ml/胚接种到11日龄SPF鸡胚上，每日照蛋2次，弃去24 h内死亡鸡胚，及时冷藏死亡鸡胚，42 h将全部鸡胚放置4℃进行冷蛋，冷蛋时间分4 h、12 h、24 h，收获毒液，测定效价及收获量。

三、结果与分析

1.接种日龄的优化。结果显示接种10、11日龄鸡胚收获的毒液量不同，但毒液效价差异不大，11日龄鸡胚接种后毒液收获量较10日龄的高0.6 ml/胚；12日龄鸡胚接种收获的毒液效价低，且尿酸盐较多，影响后续保存效果；因此优选11日龄作为接种日龄。具体见表1。

表1 接种日龄试验结果

2.种毒稀释倍数、收获时间的优化。结果显示随着稀释倍数增大，毒液效价达到106.5EID50/0.1 ml以上所需的收获时间越长，10、100和1 000倍稀释，效价达到峰值的时间分别为36、42和42 h；但1 000倍稀释42 h收获效价为107.1EID50/0.1 ml，明显高于其他稀释倍数；因此优选1 000倍稀释，42 h收获。具体见表2。

表2 种毒稀释倍数、收获时间试验结果

3.冷蛋时间的优化。冷蛋时间4 h，收获毒液有溶血现象，不利于后续疫苗处理；12 h冷蛋充分，对收获量、效价差异无影响；24 h虽冷蛋充分，但效价降低明显，因此冷蛋时间优选12 h。具体见表3。

表3 冷蛋时间试验结果

四、讨论

针对IB毒液制备工艺各个参数进行优化，接种日龄由10日改进为11日；稀释倍数由10～100倍改进为1 000倍；收获时间由30～36 h改进为42 h；冷蛋时间由24 h缩短至12 h；使IB毒液收获量由9.8 ml/胚提高至11.1 ml/胚，效价由106.5EID50/0.1 ml提高至107.1EID50/0.1 ml。种毒用量越小，较少的继代代次即可满足生产需要，能更好保障生产毒液免疫原性。改进的工艺不仅提高了毒液效价，还提高收获量，效果显著。

（略）