气相色谱法测定药用辅料苯甲醇含量

葛红莉 吴爱莉

(南京威尔药业股份有限公司，江苏 南京 210047)

苯甲醇，又名苄醇，是一种无色透明的液体，随着科学技术的日新月异，苯甲醇的用途越来越广泛[1]。苯甲醇作为药用辅料，在制剂中主要作用是止痛、防腐，因不良反应，其止痛作用已经弱化，主要用作防腐剂、抑菌剂，应用于液体制剂及半固体制剂[2～4]。本品的现行标准为《中国药典》2015年版四部[5]，为药用辅料品种，药典中含量测定采用气相色谱法，按外标法以峰面积计算，该方法准确性易受进样重复性和实验条件稳定性的影响。因此，拟建立气相色谱法，以1,3-丁二醇为内标物测定苯甲醇的含量，该方法方法简便，快速、灵敏、准确，结果较满意。

1 实验部分

1.1 仪器

⑴ 气相色谱仪：GC-2014型气相色谱仪，FID检测器，日本岛津(中国)有限公司。⑵ 分析天平：AL-204，梅特勒-托利多仪器有限公司)。

1.2 试剂

苯甲醇对照品(上海阿拉丁生化科技股份有限公司，纯度99.95%)；苯甲醇供试品(自制)；1,3-丁二醇(国药集团化学试剂有限公司，纯度99.9%)、乙醇(美国ACS恩科化学)。

2 方法和结果

2.1 色谱条件

色谱柱：DB-WAX(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；检测器：FID；载气为氮气、氢气、压缩空气(所有气体经净化处理)流量都为1.2 mL/min；进样口温度200 ℃；分流比100∶1；检测器温度250 ℃；柱温130 ℃维持30 min；进样量：1 μL。

2.2 溶液配制

2.2.11,3-丁二醇内标溶液的制备

精密称取1,3-丁二醇适量，用乙醇稀释制成每1 mL中约含1 mg 1,3-丁二醇的溶液，做为1,3-丁二醇内标溶液。

2.2.2对照品溶液的制备

精密称取苯甲醇对照品适量，用1,3-丁二醇内标溶液(1 mg/mL)稀释制成每1 mL中约含苯甲醇对照品1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.3供试品溶液的制备

精密称取苯甲醇供试品适量，用1,3-丁二醇内标溶液(1 mg/mL)稀释制成每1 mL中约含苯甲醇供试品1 mg的溶液，作为供试品溶液。

2.2.4系统适用性溶液的制备

精密称取苯甲醇对照品适量，用1,3-丁二醇内标溶液(1 mg/mL)稀释制成每1 mL中约含苯甲醇对照品10 mg的溶液作为系统适用性溶液。

2.3 专属性与系统适应性考察

专属性：精密量取空白溶液，1,3-丁二醇内标溶液、对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，记录色谱图，检测结果见图1～4，空白溶剂和内标物1,3-丁二醇在苯甲醇主峰位置未出现干扰峰，说明空白溶剂和内标物在苯甲醇含量测定中没有干扰。

图1 苯甲醇气相色谱图(空白溶液)Fig 1 Benzyl alcohol by gaschromatogram (blank solvent)

图2 苯甲醇气相色谱图(1,3-丁二醇内标溶液)Fig 2 Benzyl alcohol by gas chromatogram (1,3-butanediol internal standard solution)

系统适应性：取“2.2.4”项下系统适用性溶液检测，结果表明，1,3-丁二醇与苯甲醇理论塔板数≥60 000，各峰之间分离度达到基线分离(R>2.0)，苯甲醇峰峰高为基线噪音的5倍以上，出峰峰形好(见表1)。

图3 苯甲醇气相色谱图(对照品溶液)Fig 3 Benzyl alcohol by gas chromatogram(reference substance solution)

图4 苯甲醇气相色谱图(供试品溶液)Fig 4 Benzyl alcohol by gaschromatogram (test solution)

品名分离度理论塔板数1,3-丁二醇66005苯甲醇34.1676825

2.4 线性关系考察

分别精密称取苯甲醇对照品，用1,3-丁二醇内标液(1 mg/mL)分别稀释制成浓度为：0.2、0.6、0.8、1、1.2、1.4 mg/mL的系列标准溶液。取1 μL注入气相色谱仪，记录色谱图，以苯甲醇的浓度(C，mg/mL)为横坐标，以峰面积(A)为纵坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程为y=120 641.24x-5 005.73，r= 0.999 4。结果表明，苯甲醇的浓度在0.203 8～1.630 1 mg/mL范围内，与苯甲醇峰面积呈良好的线性关系(n=7)。

2.5 检出限和定量限

精密配制苯甲醇对照品系列浓度溶液，取1 μL注入气相色谱仪，记录色谱图，以仪器3倍信噪比作为检测限，10倍信噪比作为定量限，检测得苯甲醇的检测限为4 ng，定量限为20 ng。

2.6 精密度试验

按照“2.2.2”和“2.2.3”项中要求配制对照品溶液、供试品溶液，取1μL注入气相色谱仪，分别重复进样6次，记录色谱图。结果显示，对照品溶液苯甲醇峰面积RSD为1.79%；供试品溶液苯甲醇峰面积RSD为0.15%，RSD均小于2.0%，说明本法进样精密度良好。

2.7 重复性试验

精密量取“2.2.3”项下供试品溶液6份，注入气相色谱仪，记录色谱图，结果显示，苯甲醇峰面积的RSD为0.30%，小于2.0%，说明本法重复性良好。

2.8 回收试验

精密称定苯甲醇对照品适量，制成低、中、高3个不同浓度的对照品溶液，每种浓度各3份。注入气相色谱仪，记录色谱图，计算回收率(见表2)。

结果表明，三种浓度的对照品溶液的平均回收率为100.42、101.04、101.06%，RSD为0.55、1.17、1.04%，均小于2.0%，表明具有良好的准确度(n=3)。

表2 苯甲醇加样回收率结果Table 2 Recovery

2.9 耐用性试验

精密量取“2.2.2”项下对照品溶液，另选用HP-INNOWAX气相毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)和FFAP气相毛细管柱(30 m×0.32 mm×0.5 μm)，分别对同一对照品溶液进行测定，这2种不同型号的色谱柱对苯甲醇含量检测结果与DB-WAX气相毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)的检测结果相近，说明本法色谱柱耐用性好。

2.10 样品含量测定

精密称取供试品(批号为20150924、20150925、20151012)，按照“2.2.3”项中要求配制供试品溶液，精密量取1μL，注入气相色谱仪，记录色谱图，按照内标法计算供试品中苯甲醇的含量，检测结果见表3。

表3 供试品测定结果Table 3 Results of test sousolutions

3 结 论

本文采用乙醇做空白溶剂，1,3-丁二醇为内标物，用气相色谱仪测定苯甲醇含量，通过对专属性、系统适用性、线性、检出限、定量限、精密度、重复性等试验验证，得出本检测方法操作简单，快速、灵敏、准确、重复性好，适用于测定苯甲醇含量。

[1] 袁雪芬,周桦.气相色谱法测定化妆品中苯甲醇[J].中国公共卫生,2000,16(4):322～322.

[2] Rowe RC,Sheskey PJ,Weller PJ编，郑俊民主译.药用辅料手册[M].化学工业出版社,2004:64～66.

[3] 孙占松.国内苯甲醇生产及应用分析[J].精细与专用化学品,2012,20(12):12～14

[4] 粟贵,刘雁鸣,李兰 等.高效液相色谱法测定药用辅料苯甲醇中苯甲酸和苯甲醛含量[J].中南药学,2014(12):1 239～1 241.

[5] 中国药典2015年版.四部[S].2015:519.