2017年春季成都市猪瘟免疫抗体监测与分析

李俐睿+李敏+周潇潇+李桂黎+肖金鹏+杨泽晓+岳建国

摘要 为评估成都市猪瘟疫苗接种的免疫效果，采用ELISA方法对从成都市15个管辖区（市）县规模化猪场、散养户和屠宰厂采集的910份猪血清样品进行了猪瘟病毒免疫抗体的检测。结果表明，规模化猪场、散养户和屠宰厂受检样品的猪瘟病毒免疫抗体合格率分别为95.71%、99.29%、89.76%，免疫抗体平均合格率为94.07%，散养户猪瘟病毒免疫抗体合格率稍高于规模化猪场。

关键词 猪瘟；免疫抗体；监测；四川成都；2017年春季

中图分类号 S858.28 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）22-0228-02

Abstract In order to evaluate the immune effect of swine fever vaccine in Chengdu City，the swine fever virus immune antibody of 910 samples which collected from large-scale pig farms，scatter-feed households and slaughterhouses were detected by ELISA method.The results showed that the qualified rate of swine fever virus immune antibody of the detected samples collected from large-scale pig farms，scatter-feed households and slaughterhouses were 95.71%，99.29% and 89.76% respectively，the average qualified rate of immune antibody was 94.07%，and the qualified rate of swine fever immune antibody of the scatter-feed household was slightly higher than the large-scale pig farms.

Key words swine fever；immune antibody；surveillance；Chengdu Sichuan；spring of 2017

猪瘟俗称“烂肠瘟”，是一种由猪瘟病毒引起的具有高度传染性疫病，致死率高，是威胁养猪业的重要传染病之一。其临床典型特征是全身皮肤、浆膜、黏膜和内脏器官有不同程度的出血，而现在临床上的普遍情况是非典型化的、亚临床感染、持续感染及隐性感染等[1-2]。猪瘟被国际兽医局列为A类传染病[3]，我国将其列为一类疫病。

为有效做好猪瘟的防疫工作，成都市在每年2月和8月为管辖的15个区（市）县发放猪瘟疫苗，进行春、秋2季集中免疫。为切实了解2017年春季猪瘟疫苗免疫实施情况和评估免疫效果，根据免疫计划要求，于2017年5月对所有发放疫苗的区（市）县的部分规模场、散养户和屠宰厂采集血清样品，采用猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒对采集样品进行免疫抗体水平的检测。

1 材料与方法

1.1 试验材料

检测试剂为武汉科前生物股份有限公司猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒，批号为160507。

样品血清样品采集自成都市管辖的15个区（市）县的规模养殖猪场、散养户和屠宰厂，共计910份样品。

1.2 试验方法

1.2.1 准备。使用前将所有试剂平衡至室温。用样品稀释液2倍稀释待检血清和阳性、阴性对照；摇匀洗涤液后，用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。

1.2.2 检测步骤。每孔加入稀释好的洗涤液200 μL到抗原包被板，静置1 min倒掉液体，洗板3次，最后一次在吸水纸上拍干。再分别将稀释好的待检血清和对照各取100 μL加入到抗原包被板孔中，阴性对照和阳性对照各设2孔，轻轻振匀孔中样品，置37 ℃ 温育2 h。甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200 μL，静置1 min倒掉，洗涤3次，最后在吸水纸上拍干。每孔加酶标记物100 μL，置37 ℃ 温育30 min。洗涤5次，方法同上。每孔先加底物液A（50 μL）、再加底物液B（50 μL），混匀，室温（20～25 ℃）避光显色10 min。每孔加终止液（50 μL），10 min内测定结果。

1.2.3 检测结果判定。在酶标仪上测各孔的OD630 nm值。试验成立的条件为阴性对照平均OD630 nm值≥0.500，阳性对照的阻断率>50%。

阻断率（%）=（1-S/N）×100

式中，S为样品孔OD630 nm值，N为阴性对照孔平均OD630 nm值。样品阻断率≤30%，该样品判为猪瘟病毒抗体阴性；样品阻断率≥40%，该样品判为猪瘟病毒抗体阳性；样品阻断率在30%～40%之间，该样品判为可疑。

2 结果与分析

從表1可以看出，2017年春季成都市共检测免疫猪瘟血清910份，合格856份，平均合格率为94.07%。在210份规模场猪血清中，合格201份，平均合格率为95.71%。在280份散养户猪血清中，合格278份，平均合格率为99.29%。在420份屠宰厂猪血清中，合格377份，平均合格率为89.76%。

3 结论与讨论

猪瘟是一类动物疫病，无有效治疗方法，制定科学的免疫程序并按计划接种疫苗是防控该病的主要方针。为评估成都市春防后猪瘟病毒免疫的效果，对910份不同猪群来源猪血清样品中猪瘟病毒的抗体进行了检测，其中检出阳性856份，平均免疫合格率为94.07%，符合农业部规定要求的免疫抗体平均合格率在70%以上，在临床上可以对猪群产生相应的免疫保护作用，表明成都市在春季防疫工作中对猪瘟的强制免疫工作基本达到了预期的效果。endprint

研究表明，散养户的免疫效果要略好于规模场，屠宰厂血清样品猪瘟病毒免疫抗体阳性率最低，仅有89.76%。据了解，在发放疫苗后，散养户对政府采购的疫苗使用率要高于规模场，并且更乐意接受专业指导并科学地接种疫苗，而规模场一方面可能使用自行购买的猪瘟疫苗，另一方面随着近几年猪瘟防控措施的实施并得到了较好控制，对猪瘟疫苗接种工作重视程度有所下降。同时需要考虑的是，该试剂盒中抗原包被板上的E2蛋白并不能选择性地结合由疫苗免疫产生的猪瘟抗体，对由野毒感染所产生的猪瘟抗体同样能反应，因而这可能是散养户的免疫效果要偏高于规模场的原因之一。屠宰厂猪只免疫抗体可能与抗体的自然消长有关。此次监测结果也提示养殖场在自行购买商品猪瘟疫苗时要注意疫苗的质量、使用和保存，同时注意免疫抑制疫病的防控，以减少免疫失败的发生几率。

在加强猪瘟诊断和免疫监测的同时，必须从源头控制，从种源入手扎实抓好种猪场猪瘟的防疫工作。为避免免疫失败，淘汰隐性感染或潜伏感染的种公猪和母猪，特别是母猪一旦感染猪瘟病毒会发生水平和垂直传播，因而从源头上消除引起仔猪先天感染和免疫耐受的传染源特别重要[4-6]。同时制定科学合理的免疫程序，适当加大免疫剂量[7-9]，免疫仔猪时要排除母源抗体的感染，确定合适的首免日期，保证猪群具有抵抗猪瘟病毒感染的抗体水平。加强饲料管理，优先选用配合饲料，保证猪群的营养全面，使机体拥有较强的免疫力[10]。猪场必须实施严格的生物安全措施，定期对圈舍、垫草、粪水和用具等进行彻底消毒；来访人员和工作人员进入猪场必须经过淋浴等消毒程序；禁止外来人员或车辆进入猪场。需引进猪时，必须做好隔离观察和免疫检测[11-12]。

本次监测的910份不同来源猪群的血清样品中抗体阳性率几乎都在90%以上，但是尚无100%免疫合格率猪群，因而需要重视免疫密度，提高防止野毒感染的几率。鉴于猪瘟的高度接触性的性质和对养殖业的巨大危害，仍需认真分析猪瘟防疫过程中出现的各种问题，重视和加强猪瘟的防控工作，切实根据农业部农医发[2017]10号文件中《国家猪瘟防治指导意见》的防治目标，到2020年底，成都市所有猪场和部分地区达到猪瘟净化标准，并进一步扩大猪瘟净化区域范围。在平时开展的流行病学调查工作中，仍需继续在各个区（市）县选择一定数量的养殖场、屠宰厂和交易市场作为定点监测点，持续开展猪瘟疫情监测工作。同时，定期对区（市）县的基层防疫员进行技术培训，对养殖户推广最科学、最新的免疫程序和猪瘟的防疫知识，保障成都市畜牧业生产的健康发展。

4 参考文献

[1] 杜念兴.猪瘟的回顾与展望[J].中国畜禽传染病，1998（9）：317-319.

[2] 宁宜宝，王琴，赵耘.猪瘟病毒持续感染与猪瘟预防控制[J].中国兽药杂志，2005，39（5）：12-13.

[3] 杨克礼，徐涤平，梁望旺，等.猪瘟病毒检测技术研究进展[J].安徽农业科学，2007，35（16）：4853-4854.

[4] 王克领，郎利敏，熊华东，等.猪瘟免疫情况调查及防制对策[J].养猪，2004（6）：31-32.

[5] 范雅芬，柳林.规模化猪场猪瘟的预防与控制[J].畜牧与饲料科学，2010，31 （10）： 168-169.

[6] 谌灵，孙宝权，刘二松.规模化猪场猪瘟抗体跟踪监测结果与分析[J].中国兽医杂志，2007，12（43）：39-41.

[7] 张玉梅，陈平.猪瘟的流行特点及防制中存在的问题和对策[J].畜禽业，2006（1）：38-40.

[8] 汪令波.提高猪瘟疫苗免疫效果的措施[J].现代农业科技，2006（8）：144.

[9] 陳田梅，王荣祥，王强，等.猪瘟防制中存在的问题和对策[J].畜牧与饲料科学，2009，30（1）：111-113.

[10] 叶秀娟，付云玲，章红兵.规模猪场猪瘟发生的新特点和防制[J].上海畜牧兽医通讯，2005（5）：57-59.

[11] 陈远涛，麦小明，李松坤.猪瘟的综合防制[J].现代农业科技，2008（24）：247-248.

[12] 杜森有，朱景利，王文学.陕西省安塞县猪瘟免疫情况调查及防制措施[J].畜牧与饲料科学，2007，28（4）：67-68.endprint