复方中药对奶牛回乳效果及泌乳相关因子的影响

肖劲邦，姜思汛，巫晓峰，邓俊良，左之才，曹随忠，余树民，朱颍琨，钱柏霖，沈留红

（四川农业大学动物医学院，动物疫病与人类健康四川省重点实验室/奶牛疾病研究中心，成都 611130）

复方中药对奶牛回乳效果及泌乳相关因子的影响

肖劲邦，姜思汛，巫晓峰，邓俊良，左之才，曹随忠，余树民，朱颍琨，钱柏霖，沈留红*

（四川农业大学动物医学院，动物疫病与人类健康四川省重点实验室/奶牛疾病研究中心，成都 611130）

【目的】探究复方中药对奶牛回乳效果及回乳期奶牛血清泌乳相关因子胰岛素样生长因子1（IGF-1）、信号转导和转录激活因子5（STAT5）和转化生长因子β1（TGF-β1）含量的影响。【方法】选取规模化奶牛场妊娠后期、即将干乳、产奶量为（15.42±0.71）kg的的健康奶牛80头。随机分为A、B、C、D组，每组20头，采用逐渐干奶法回乳，回乳开始当天记为第0天，A组为对照组，不饲喂复方中药，B、C、D组均从回乳第1天开始，每日上午8:00分别饲喂复方中药400、500、600 g，回乳完成后停止饲喂复方中药。分别采集回乳期奶牛第0、1、3、5、7、9和11天尾静脉血，并记录奶牛单日产奶量，ELISA法检测回乳期奶牛血清IGF-1、STAT5和TGF-β1含量。【结果】回乳期各组奶牛产奶量均随时间推移降低，A、B、C、D组回乳时间分别为11、7、5、5 d。在奶牛回乳期，各组奶牛血清IGF-1和STAT5含量均随时间推移呈下降趋势，并在回乳期后回升，而各组奶牛血清TGF-β1含量均呈上升趋势，并在回乳期后下降；回乳期奶牛产奶量与IGF-1和STAT5含量均分别呈极显著正相关（P＜0.01），与TGF-β1含量呈极显著负相关（P＜0.01）；IGF-1与 STAT5含量呈极显著正相关（P＜0.01），而 TGF-β1与 IGF-1、STAT5含量分别呈极显著负相关（P＜0.01）。【结论】复方中药能明显促进回乳期奶牛回乳，饲喂500 g/日即可达到最佳回乳效果。在奶牛回乳期，IGF-1和STAT5是奶牛回乳的负调控因子，而TGF-β1是奶牛回乳的正调控因子。

奶牛；复方中药；转化生长因子β1；信号转导和转录激活因子5；胰岛素样生长因子1

泌乳相关内分泌因子对哺乳动物生长、发育、泌乳等过程中的激素调控，具有不可替代的作用。目前研究较多的内分泌细胞因子主要有胰岛素样生长因子 1（Insulin-like growth factor 1，IGF-1）、转化生长因子 β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）和信号转导和转录激活因子5（signal transduction and transcriptional activation factor of 5，STAT5）等[1]，它们参与调控雌激素（estrogen，E）、孕酮（progesterone，P4）、催乳素（prolactin，PRL）、胰岛素（insulin，INS）、肾上腺皮质激素(adrenocortical，ACTH)和生长激素（growth hormone，GH）等生殖激素[2-3]，并与之共同形成乳腺发育和泌乳的调控网络。目前运用复方中药对人和小鼠等动物催乳或回乳的研究已有报道[4-5]，并显示均与泌乳激素及因子呈一定相关性[6-7]。奶牛经过泌乳期，机体消耗严重，需要通过干乳期恢复自身体质及更新乳腺组织，为下一个泌乳期做充分准备，但传统回乳方式效果差，易产生乳房炎、流产和抗生素残留等副作用[8]，因此，回乳复方中药在奶牛回乳期的运用有着较广阔的研究前景[9]。但目前还未见复方中药对回乳期奶牛泌乳激素、因子、产奶量及回乳时间等影响的研究报道。所以，本研究旨在探究复方中药对回乳期奶牛血清IGF-1、TGF-β1和STAT5含量的影响，为进一步研究复方中药对回乳期奶牛泌乳相关因子的调控机理，以及为寻求更安全、有效的回乳技术措施，改进奶牛回乳方法，降低回乳期奶牛乳房炎发生率提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 试验动物

选择四川省某规模化奶牛场半封闭统一舍饲，体重（582±41）kg、2～4胎中国荷斯坦奶牛 150头。从中选取即将进入回乳期，体况良好，健康，乳房、乳汁均正常，产奶量为（15.42±0.71）kg的妊娠后期奶牛80头。随机分为A、B、C、D组，每组20头。各组均采用逐渐干奶法进行回乳，回乳当天记为第0天，A组为对照组，不饲喂复方中药，B、C、D组从回乳第1天开始，每日上午8∶00分别饲喂复方中药400、500、600 g，直至停奶。

1.2 回乳方式

本试验采用逐渐干奶法[10]，即：停喂多汁饲料，减少精料喂量，以青干草为主，控制饮水，适当加强运动。在回乳第1天，挤奶次数由3次改为2次，第2天改为1次，逐渐减少挤奶次数，当日产奶量为3～5 kg时，停止挤奶。

1.3 试验药物

复方中药由四川农业大学动物医学院奶牛疾病研究中心研发。由麦芽，朴硝，升麻，柴胡，香附，薏仁，蚕蜕，白术，黄芩，知母，苏梗，芡实，五味子，蒲公英，甘草等组成，均购自成都荷花池中药材专业市场（一等品）。按比例配方粉碎过60目筛，塑料袋500 g/袋分装备用。

1.4 试验试剂

IGF-1、TGF-β1和STAT5双抗体夹心酶联免疫吸附检测（ELISA）试剂盒，均由美国RD公司提供。

1.5 试验方法

1.5.1 血清收集

试验奶牛回乳开始当天记为第0天，依次采集第 0、1、3、5、7、9 和 11 天尾静脉血 10 mL，置于未加抗凝剂的离心管中，室温下静置1 h，离心力352 g离心10 min，转移上层血清于EP管中，-20℃冻存，待检。

1.5.2 ELISA检测

采用双抗体夹心酶联免疫吸附技术（ELISA）测定IGF-1、TGF-β1和STAT5的水平，步骤严格按照说明书进行。

1.6 统计分析

SPSSl9.0软件进行统计学分析，K-S检验计量资料是否服从正态分布，以平均数±标准差（±S）表示，两组间采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，相关性分析采用双变量Pearson相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 复方中药对回乳期奶牛产奶量的影响

如表1所示，在奶牛回乳期，各组奶牛产奶量均随时间推移呈下降趋势，回乳期需要时间分别是11、7、5和5 d，回乳第0天，各组奶产量差异不显著（P＞0.05）；第1天，B组产奶量极显著高于D组（P＜0.01）；第3～5天，A、B 组产奶量均极显著高于C、D组（P＜0.01），第 3～7 天，A 组产奶量极显著高于 B组（P＜0.01）；C、D组产奶量在整个回乳期差异均不显著（P＞0.05）。

表1 复方中药对回乳期奶牛奶产量的影响Table1 Effects of compound traditional Chinese medicine on the milk yield of dairy cows during the period of milk with drawal kg/d，±S

表1 复方中药对回乳期奶牛奶产量的影响Table1 Effects of compound traditional Chinese medicine on the milk yield of dairy cows during the period of milk with drawal kg/d，±S

注：同行肩标有不同小写字母表示差异显著（P＜0.05），不同大写字母表示差异极显著（P＜0.01），有相同大、小写字母表示差异不显著（P＞0.05）。下表同。Note：Means in the same list with different superscripts（lowercase letters for the 0.05 level，capital letters for the 0.01 level）differ significantly between groups.Means in the same list with same letters represent no significant difference（P＞0.05）.The same below.

分组Group时间Time A（n=20） B（n=20） C（n=20） D（n=20）第0天第1天第3天第5天第7天第9天第11天15.43±0.60A 15.30±0.92AB 13.33±0.42A 10.44±0.74A 8.08±0.74A 6.73±1.064.38±0.7315.22±0.71A 15.91±0.57A 10.23±1.16B 7.45±0.94B 4.31±0.68B——15.27±0.72A 15.22±0.75AB 9.38±0.92BC 4.85±2.00C— —15.76±0.84A 14.45±0.68B 8.47±0.88C 3.94±0.51C— —

2.2 复方中药对回乳期奶牛血清IGF-1含量的影响

如表2所示，在奶牛回乳期，各组奶牛血清IGF-1含量均随时间推移呈下降趋势，并在回乳期后回升，回乳第0天，B组奶牛血清IGF-1含量显著高于 C 组（P＜0.05）；第 1天，各组奶牛血清 IGF-1含量差异均不显著（P＞0.05）；第 3～7天，A 组奶牛血清IGF-1含量极显著高于 B、C、D 组（P＜0.01）；第9天，A、B组奶牛血清IGF-1含量均极显著低于C、D组（P＜0.01），A 组极显著高于B 组（P＜0.01）；第 11天，对照组奶牛血清IGF-1含量极显著低于中药组（P＜0.01）；C、D组奶牛血清IGF-1含量在整个回乳期均差异性不显著（P＞0.05）。

2.3 复方中药对回乳期奶牛血清TGF-β1含量的影响

如表3所示，各组奶牛血清TGF-β1含量在回乳期均呈上升趋势，并在回乳期后下降。回乳第0～3天，各组间 TGF-β1含量差异均不显著（P＞0.05）；第7天，A、B组 TGF-β1含量极显著高于 C、D 组（P＜0.01）；第 9～11天，B 组 TGF-β1含量极显著高于其他3组（P＜0.01）；C、D 组 TGF-β1含量在整个回乳期差异均不显著（P＞0.05）。结果表明复方中药可促使回乳期奶牛血清TGF-β1含量上升。

2.4 复方中药对回乳期奶牛血清STAT5含量的影响

如表4所示，在奶牛回乳期，各组奶牛血清STAT5含量呈下降趋势，并在回乳期后明显升高。第0～1天，STAT5含量在 4组间差异均不显著（P＞0.05）；第3～5天，A、B组 STAT5含量均极显著高于 C、D 组（P＜0.01），A 组STAT5含量显著高于 B 组（P＜0.05）；第7～9天，A、B组STAT5含量均极显著低于C、D组（P＜0.01）；第11天，A组STAT5含量极显著低于B、C、D 组（P＜0.01）；C、D 组STAT5含量在整个回乳期均差异性均不显著（P＞0.05）。

表2 复方中药对回乳期奶牛血清IGF-1含量的影响Table2 The effects of compound traditional Chinese medicine on IGF-1 of dairy cows during the period of milk with drawal ng·mL-1，±S

表2 复方中药对回乳期奶牛血清IGF-1含量的影响Table2 The effects of compound traditional Chinese medicine on IGF-1 of dairy cows during the period of milk with drawal ng·mL-1，±S

分组Group时间Time A（n=20） B（n=20） C（n=20） D（n=20）第0天第1天第3天第5天第7天第9天第11天56.04±3.81ab 54.88±3.93a 49.03±1.53A 46.78±1.70A 43.25±2.59A 42.20±2.76A 38.20±1.08A 57.34±3.24a 54.99±4.24a 43.78±2.42Ba 39.80±2.48B 38.17±1.48Ba 38.59±1.02B 45.20±1.30B 53.55±3.12b 54.08±2.69a 41.24±2.37BCb 39.43±1.56B 39.14±1.01B 45.79±2.85C 46.84±2.13B 55.88±3.14ab 54.74±2.45a 40.29±1.60C 40.80±2.30B 40.38±1.06Bb 45.82±2.09C 45.79±3.24B

表3 复方中药对回乳期奶牛血清TGF-β1含量的影响Table3 The effects of compound traditional Chinese medicine on serun TGF-β1 levels of dairy cows in dry period ng·mL-1

表4 复方中药对回乳期奶牛血清STAT5含量的影响Table4 The effects of compound traditional Chinese medicine on STAT5 of dairy cows during the period of milk with drawal ng·mL-1，±S

表4 复方中药对回乳期奶牛血清STAT5含量的影响Table4 The effects of compound traditional Chinese medicine on STAT5 of dairy cows during the period of milk with drawal ng·mL-1，±S

分组Group时间Time A（n=20） B（n=20） C（n=20） D（n=20）第0天第1天第3天第5天第7天第9天第11天9.29±0.13A 9.49±0.26A 9.40±0.23Aa 9.28±0.22A 8.59±0.27A 8.35±0.15A 8.40±0.22A 9.50±0.22A 9.35±0.24A 9.03±0.31Ab 8.51±0.22B 8.03±0.21B 9.27±0.21B 10.67±0.91B 9.52±0.22A 9.52±0.17A 8.55±0.23B 7.91±0.16C 9.57±0.25C 11.13±0.75C 10.98±0.90B 9.49±0.29A 9.45±0.24A 8.56±0.31B 8.09±0.26C 9.61±0.37C 10.89±0.56C 11.47±0.91B

2.5 回乳期奶牛血清IGF-1、TGF-β1和STAT5含量和产奶量间的相关性

如表5所示，在奶牛回乳期，产奶量与IGF-1和STAT5含量均分别呈极显著正相关（P＜0.01），而产奶量与 TGF-β1含量呈极显著负相关（P＜0.01）；IGF-1与 STAT5含量呈极显著正相关（P＜0.01），而TGF-β1与IGF-1、STAT5含量分别呈极显著负相关（P＜0.01）。

表5 回乳期奶牛血清IGF-1、TGF-β1和STAT5含量和产奶量的相关性Table5 Correlation between the levels of INS，HC and IGF-1 milk yield during the period of milk with drawal

3 讨论

3.1 复方中药对回乳期奶牛产奶量的影响

目前，口服麦芽，外敷芒硝等方式促进妇女回乳的研究已报道较多[11-12]。王雄[4]利用“回乳抑增一号”（麦芽、牡蛎、浙川贝等）使妇女溢乳改善，郝振华等[5]利用麦芽治疗妇女产后溢乳有明显疗效。现有回乳方中多含有麦芽，且已经人工合成麦角衍生物——卡麦角林，其可明显抑制PRL生成，进而控制泌乳[13]。然而，复方中药运用于奶牛回乳还未见研究报道，本试验结果显示，在奶牛回乳期，各组奶牛产奶量均随时间推移呈降低趋势，回乳第1天，B产奶量极显著高于 C 组（P＜0.01）；第 3～5天，A 和 B组产奶量极显著高于C、D组（P＜0.01），且A产奶量极显著高于B（P＜0.01），表明了复方中药具有较好回乳效果，可能是复方中药以炒麦芽消食、回乳[4，12]；升麻、柴胡、香附、白术疏肝理气；黄芩、知母、苏梗安胎；五味子、蒲公英固精敛阴，清热解毒，统筹全局，断其生化之源，使肝气调达四运，有效抑制乳汁分泌而回乳，C、D组产奶量在整个回乳期差异均不显著（P＞0.05），表明回乳期奶牛饲喂复方中药500 g/日时，回乳效果即可达到最佳。

3.2 复方中药对回乳期奶牛血清IGF-1含量的影响

IGF-1是一类功能复杂的多肽因子，可促进乳腺泌乳[1]。A.L.Macrina等[6]研究表明，乳腺组织中存在IGF-1及其受体，可直接通过受体作用于乳腺，对乳腺最终分化完全、发育成熟与乳汁生成以及新生儿的生长发育具有调控作用[14]，R.Murney等[15]和H.Hernandez等[16]也表示IGF-1与奶牛产奶量相关性显著。本研究结果表示，在奶牛回乳期，血清IGF-1含量依次呈阶梯式下降，而第0和1天、第3和5天、第7和9天、第9和11天之间差异均不显著（P＞0.05），与上述结果趋势一致，可能是复方中药可促进回乳期奶牛血清IGF-1含量下降，反馈抑制乳腺泌乳细胞分泌。表明奶牛IGF-1不仅在奶牛青春期乳腺生长和泌乳期起正向调控，且在奶牛回乳期可降低IGF-1含量，促进回乳进行。

王昶[17]和唐中生等[18]发现丹参可使大鼠血清和肝组织IGF-1表达量上升，张弛等[19]利用丹参、黄芩等组成的复方中药在兔上获得相同研究结果，石宝明等[20]利用益母草、王不留行、黄芩等组成的复方中药显著增加泌乳大鼠产奶量及血清IGF-1含量，本试验结果显示，在奶牛回乳过程中，对照组奶牛血清IGF-1含量较复方中药组下降慢，C和D组奶牛血清IGF-1含量下降较B组快，而C和D组差异不显著（P＞0.05）。表明复方中药降IGF-1效果明显，其中C、D组效果较好，在回乳期后中药组IGF-1含量均上升，表明复方中药可使奶牛快速回乳，减少IGF-1低含量持续时间，回乳期完成之后，IGF-1回升，以满足怀孕后期胎犊快速生长发育的需要。

3.3 复方中药对回乳期奶牛血清TGF-β1含量的影响

TGF-β1是一种多效的细胞因子，可影响上皮细胞增殖、凋亡并维持细胞外基质稳态，对乳腺形态发生及分泌功能均有重要作用。已有研究表明，TGF-β1可诱导乳腺上皮干细胞群衰老，抑制乳腺发育，并与乳腺泌乳的终止信号密切相关[21]。另外，TGF-β1可减少乳腺上皮细胞中由PRL诱导的β-酪蛋白mRNA和蛋白表达水平，且对蛋白表达水平的抑制更明显[22]。说明TGF-β1在动物乳腺退化过程中对抑制细胞生长起重要调控作用[23]。Vries等[24]指出TGF-β1含量表达在奶牛回乳后1周内达到最高，本研究发现，在奶牛回乳过程中，随泌乳量逐渐下降，血清TGF-β1含量呈上升趋势，与上述研究结果趋势一致，可能是由于回乳期奶牛机体缺少挤奶刺激，促使乳腺表达TGF-β1，减少β-酪蛋白mRNA和蛋白表达水平，降低奶牛泌乳量。

张臻等[25]使用黄芩、太子参等组成的复方中药提升了大鼠TGF-β1表达量，葛明晓等[26]利用熟地、山药和白术等组成的复方中药增加了妇女血清TGF-β1含量。本研究使用的复方中药可使奶牛快速回乳，回乳期结束后，各中药组TGF-β1含量均有一定程度的下降，缩短了TGF-β1高含量水平及回乳期持续时间，从而降低对细胞增殖的抑制作用[27]，间接促进胎犊生长发育。而对照组变化不明显，可能是由于对照组奶牛回乳持续时间较长，致使TGF-β1还未达到降低期。

3.4 复方中药对回乳期奶牛血清STAT5含量的影响

信号转导和转录激活因子（STATs）是一种独特DNA结合蛋白，其家族成员较多。其中STAT5可被母体体内多种生殖激素激活，参与乳腺细胞增殖、分化和泌乳[28]。乳腺发育各阶段均可在其上皮细胞中检测到STAT5，且其酪氨酸磷酸化状态与乳腺发育及乳蛋白基因的活化密切相关。STAT5发挥泌乳功能主要受到由催乳素介导的JAK2/STAT5信号转导通路调控[29-30]，从而促进乳腺上皮细胞增殖和表达[31]。藏长江等[32]研究结果表明，乳汁氨基酸和蛋白质含量均与STAT5的mRNA表达量呈显著正相关。因此，STAT5的活性是控制乳腺正常生长发育及泌乳的关键之一。本研究结果显示，在奶牛回乳过程中，各组STAT5含量均呈下降趋势，可能是由于STAT5磷酸化量减少，负反馈抑制STAT5进一步分泌。

李立科等[33]发现大豆异黄酮可激活大鼠JAK2通路，加快STAT5磷酸化，促进乳汁分泌。于丰彦等[34]也表示黄芩苷对STAT5具有明显调控作用。本研究结果发现，在奶牛回乳期，复方中药组奶牛血清STAT5含量下降趋势均比对照组明显，且B组较C、D组慢，而C组和D组差异不显著（P＞0.05）。可能是复方中药降低PRLR-JAK2-STAT5信号转导通路对乳腺细胞的作用。对照组STAT5含量在整个回乳期均未回升，可能是由于对照组奶牛仍继续泌乳，抑制其分泌。而中药组在回乳期后上升，可能是怀孕末期胎儿生长发育对JAK2/STAT5通路作用需求增加，促使STAT5含量快速回升，其机理有待进一步研究。

3.5 回乳期奶牛血清IGF-1、TGF-β1和STAT5含量和产奶量间的相关性

哺乳动物泌乳受神经内分泌系统多种激素、乳腺外组织、自分泌的多种生长因子等因素的调控，相互间具有协同和拮抗作用，以内分泌、旁分泌、自分泌等方式共同调节乳腺的生长发育和泌乳[10]。神经内分泌的多种激素与乳腺外组织及乳腺分泌的多种因子相互协同，以内分泌、旁分泌和自分泌等方式共同调节乳腺的生长发育和泌乳[2]。有研究表明，IGF-1可间接调节乳腺和乳腺外营养竞争，使营养向乳腺转移，促进乳腺发育和乳的合成，提高奶牛产奶量[35-36]。在乳腺发育和泌乳中，生殖激素介导的JAK2/STAT5对乳腺发育和乳蛋白表达有促进作用，激素与其受体结合，受体二聚化，JAK2激酶活化，导致STAT5磷酸化，调控乳蛋白合成，影响泌乳量及品质。藏长江等[32]、苗培[37]和 Lo Y.H.等[38]也指出STAT5含量升高可促进乳汁生成、启动和维持。在乳腺退化过程中，TGF-β1在转录水平及蛋白水平上均增加[39]，诱导乳腺导管快速退化[40]，从而抑制泌乳。而回乳期奶牛血清IGF-1、TGF-β1、STAT5含量与产奶量间的相关性还未见报道，本研究表示，在奶牛回乳期，产奶量与IGF-1和STAT5含量均分别呈极显著正相关（P＜0.01），而产奶量与 TGF-β1含量呈极显著负相关（P＜0.01），IGF-1与 STAT5含量呈极显著正相关（P＜0.01），而 TGF-β1 与 IGF-1、STAT5含量分别呈极显著负相关（P＜0.01）。与上述学者研究结果一致。说明，IGF-1和STAT5是奶牛回乳的负调控因子，TGF-β1是奶牛回乳的正调控因子。

4 结论

复方中药能显著促进回乳期奶牛回乳，饲喂500 g/日复方中药回乳效果即可达到最佳。IGF-1和STAT5对奶牛回乳起负调控作用，而TGF-β1对奶牛回乳起正调控作用。

［1］BACH L A.Insulin-like growth factor binding proteins—an update［J］.Pediatric Endocrinology Reviews Per，2015，13（2）：521-530.

［2］OGATA Y，YU G M，HIDAKA T，et al.Effective embryo production from Holstein Cows treatedwith gonadotropin-releasing hormone during early lactation［J］.Theriogenology，2016，86（6）：1421-1426.

［3］文静，卜登攀，王建发，等.激素调控乳蛋白合成的作用及其分子机制［J］.华北农学报，2012，27（s1）：111-115.

［4］王雄.回乳抑增一号治疗高泌乳素血症与乳腺增生药效学研究［D］.武汉：湖北中医药大学，2012.

［5］郝振华，郭震兵.重用生麦芽治疗高泌乳素血症性不孕的临床观察［J］.新疆中医药，2016，34（1）：13-14.

［6］MACRINA A L，KAUF A C，KENSINGER R S.Effect of bovine somatotropin administration during induction of lactation in 15-month-old heifers on production and health［J］.Journal of Dairy Science，2011，94（9）：4566-4573.

［7］WANG J F，FU S P，LI S N，et al.Short-chain fatty acids inhibit growth hormone and prolactin gene transcription via Camp/Pka/Creb signaling pathway in dairy cow anterior pituitary cells［J］.International Journal of Molecular Sciences，2013，14（11）：21474-21488.

［8］HENDERSON A C，HUDSON C D，BRADLEY A J，et al.Prediction of intramammary infection status across the dry period from lifetime cow records［J］.Journal of Dairy Science，2016，99（7）：5586-5595.

［9］Zhao F R，Mao H H，Hu L M，et al.Antagonistic effects of two herbs in Zuojin Wan，a traditional chinese medicine formula，on catecholamine secretion in bovine adrenal medullary cells［J］.Phytomedicine International Journal of Phytotherapy&Phytopharmacology，2010，17（8-9）：659-668.

［10］王春璈.奶牛临床疾病学［M］.北京：中国农业科学技术出版社，2007.

［11］吴文英，周惠欢，吴秀娥.芒硝外敷治疗产后回奶的观察及护理［J］.医学信息，2013，26（8）：375.

［12］钟慧萍.炒麦芽泡茶饮用联合芒硝外敷双乳回奶的效果观察［J］.中外医学研究，2015，13（34）：157-159.

［13］杨强，陈晋，刘军.卡麦角林治疗泌乳素型垂体瘤的研究进展［J］.中国神经精神疾病杂志，2016，42（5）：311-314.

［14］Nawathe A R，Christian M，Kim S H，et al.Insulin-like growth factor axis in pregnancies affected by fetal growth disorders［J］.Clinical Epigenetics，2016，8（1）：1-13.

［15］MURNEY R，STELWAGEN K，WHEELER T T，et al.The effects of milking frequency on Insulin-like growth factor I signaling within the mammary gland of dairy Cows［J］.Journal of Dairy Science，2015，98（8）：5422-5428.

［16］HERNANDEZ H，FLORES J A，DELGADILLO J A，et al.Effects of exposure to artificial long days on milk yield，maternal insulin-like growth factor 1 levels and kid growth rate in subtropical goats［J］.Animal Science Journal，2016，87（4）：484-491.

［17］王昶.胰岛素样生长因子-1在肝纤维化大鼠中的表达及中药的干预作用［D］.大连：大连医科大学，2015.

［18］唐中生，吕明庄，贺志光，等.耳针联合中药对血管性痴呆大鼠记忆障碍及胰岛素样生长因子-1及乙酰胆碱酯酶表达的影响［J］.中华中医药杂志，2008，23（3）：270-272.

［19］张弛，杨志伟，段小英.活血通络法治疗激素性股骨头坏死兔胰岛素样生长因子1的变化［J］.中国组织工程研究，2012，16（52）：9787-9791.

［20］石宝明，单安山.促乳中草药对泌乳大鼠内分泌功能的影响［J］.东北农业大学学报，2011，42（12）：45-50.

［21］YANG G，ZHOU J，TENG Y，et al.Mesenchymal Tgf-Β Signaling Orchestrates Dental Epithelial Stem Cell Homeostasis through Wnt Signaling［J］.Stem Cells，2014，32（11）：2939-2948.

［22］KLENBERG D L，FELDMAN M，RUAN W.IGF-I：An essential factor in terminal end bud formation and ductal morphogenesis［J］.J Mammary Gland Biol Neoplasia，2000，5（1）：7-17.

［23］ZARZYNSKA J，GAJKOWSKA B，WOJEWODZKA U，et al.Apoptosis and autophagy in involuting bovine mammary gland is accompanied by up-regulation of TGF-beta1 and suppression of somatotropic pathway［J］.Pol J Vet Sci，2007，10（1）：1-9.

［24］VRIES L D，CASEY T，DOVER H，et al.Effects of transforming growth factor-β on mammary remodeling during the dry period of dairy cows［J］.J Dairy Sci，2011，94（12）：6036-6046.

［25］张臻，阙华发，朱元颖，等.益气化瘀中药对糖尿病皮肤溃疡大鼠转化生长因子β1的影响［J］.中西医结合学报，2007，5（4）：416-420.

［26］葛明晓，张金玉，赵彦鹏，等.益气血补肝肾中药对体外受精-胚胎移植周期中卵泡液转化生长因子β1和性激素水平的影响［J］.中国中西医结合杂志，2011，31（3）：327-330.

［27］YANG J W，HIEN T T，LIM S C，et al.Pin1 induction in the fibrotic liver and its roles in TGF-β1 expression and Smad2/3 phosphorylation［J］.J Hepatol，2014，60（6）：1235-1241.

［28］LINHER-MELVILLE K，HAFTCHENARY S，GUNNING P，et al.Signal transducer and activator of transcription 3 and 5 regulate system Xc-and redox balance in human breast cancer cells［J］.Mol Cell Biochem，2015，405（1-2）：205-221.

［29］IAVNILOVITCH E，GRONER B，BARASH I.Overexpression and forced activation of stat 5 in mammary gland of transgenic mice promotes cellular proliferation，enhances differentiation，and delays postlactational apoptosis［J］.Mol Cancer Res，2002，1（1）：32-47.

［30］IAVNILOVITCH E，EILON T，GRONER B，et al.Expression of a carboxy terminally truncated Stat5 with no transactivation domain in the mammary glands of transgenic mice inhibits cell proliferation during pregnancy，delays onset of milk secretion，and induces apoptosis upon involution［J］.Mol Reprod Dev，2006，73（7）：841-849.

［31］LI H M，WANG C M，LI Q Z，et al.Mir-15a decreases bovine mammary epithelial cell viability and lactation and regulates growth hormone receptor expression［J］.Molecules，2012，17（10）：12037-12048.

［32］臧长江，张养东，王加启，等.脂多糖对泌乳奶牛乳中氨基酸组成及蛋白质代谢相关基因表达的影响［J］.动物营养学报，2012，24（9）：1770-1777.

［33］李立科，罗启慧，唐秀莹，等.大豆异黄酮对肥胖大鼠肠道瘦素介导Janus激酶/信号转导及转录激活因子信号转导通路的影响［J］.动物营养学报，2016，28（8）：2448-2457.

［34］于丰彦，黄绍刚，张海燕，等.黄芩苷对溃疡性结肠炎患者信号转导和转录激活因子表达的影响［J］.中国中西医结合杂志，2015，35（4）：419-424.

［35］李蔚辉，魏学鑫.糖皮质激素的信号转导系统［J］.亚太传统医药，2007，3（12）：21-25.

［36］赵国丽，宫艳斌，韩元，等.激素和生长因子调控奶牛乳腺发育的研究进展［J］.中国奶牛，2011（6）：25-30.

［37］苗培.催乳素及其受体的研究进展［J］.中国畜牧兽医文摘，2016，32（3）：55.

［38］LO Y H，CHEN Y J，CHUNG T Y，et al.Emoghrelin，a unique emodin derivative in Heshouwu，stimulates growth hormone secretion via activation of the ghrelin receptor［J］.J Ethnopharmacol，2015，159（5）：1-8.

［39］WU W J，LEE C F，HSIN C H，et al.TGF-beta inhibits prolactin-induced expression of beta-casein by a Smad3-dependent mechanism［J］.J Cell Biochem，2008，104（5）：1647-1659.

［40］SERRA R，CROWLEY M R.Mouse models of transforming growth factor beta impact in breast development and cancer［J］.Endocr Relat Cancer，2005，12（4）：749-760.

The Effects of Compound Traditional Chinese Medicine on Return Milk and Lactation Correlation Factors in Dairy Cows

XIAO Jin-bang，JIANG Si-xun，WU Xiao-feng，DENG Jun-liang，ZUO Zhi-cai，CAO Sui-zhong，YU Shu-min，ZHU Ying-kun，QIAN Bo-lin，SHEN Liu-hong*
（College of Veterinary Medicine，The Key Laboratory of Animal Disease and Human Health of Sichuan Province，The Medical Research Center for Cow Disease，Sichuan Agricultural University，Chengdu 611130，China)

【Objective】 In order to explore the impacts of compound traditional Chinese medicine on return milk and the levels of serum insulin-like growth factor 1(IGF-1)，signal transducers and activators of transcription 5(STAT5)and transforming growth factor β1(TGF-β1)expression levels in dairy cow during the period of milk with drawal.【Methods】80 healthy Chinese Holstein cows that in late pregnancy and gave(15.42±0.71）kg milk per day were selected.The cows were randomly divided into four groups:group A，B，C and D，with 20 in each group.Stop dairy cows'milk by quickly dry milk method and the day when cows begun to return milk was regarded as 0 d.Group A was a control group，did not feed compound traditional Chinses medicine and the group B，C and D were fed 400 g，500 g，600 g compound traditional Chinses medicine respectively at 8.00 am.from 1 d to the day of drying milk completely.We collected cows'venous blood from the tail on the 0，1，3，5，7，9 and 11 d and noted the daily milk production.ELISA was used to evaluate the expression levels of serum IGF-I，STAT5 and TGF-β1.【Results】During the period of milk with recovery，the milk production of all 4 groups was on the decline.Group A，B，C and D returned milk on the 11 d，7 d，5 d and 5 d respectively.The expression levels of serum IGF-1 and STAT5 had downward trend and raised after the period of milk with recovery，but the expression levels of TGF-β1 had rising trend and declined after the period of milk with recovery in all 4 groups.There was highly significant positive correlation between milk production and the content of IGF-1 and STAT5(P＜0.01)The milk production showed highly significant positive correlation with the expression levels of IGF-1 and STAT5 and showed highly significant negative correlation with the expression level of TGF-β1.(P＜0.01).There were highly significant positive correction between IGF-1 and STAT5(P＜0.01)while there were highly negative correction between TGF-β1 and IGF-1，STAT5.【Conclusions】Compound traditional Chineses medicine can help cows to recoverymilk significantly，and feeding 500 g/d can achieve the best results.During the period of milk with recovery，IGF-1 and STAT5 are negative regulation factors of returning milk，while TGF-β1 is a positive regulation factor.

cow；compound traditional Chineses medicine；transforming growth factor β1；signal transducers and activators of transcription 5；insulin-like growth factor 1

S823.91

A

1000-2650（2017）04-0587-07

10.16036/j.issn.1000-2650.2017.04.020

2017-05-30

四川省教育厅重点项目（15ZA0024）；四川农业大学双支计划项目（03571303）；四川农业大学本科科研兴趣培养计划项目（KY2016062）。

肖劲邦，硕士研究生。*责任作者：沈留红，博士，副教授，主要从事反刍动物疾病及繁殖新技术的研究，E-mail：shenlh@sicau.edu.cn.com。

（本文审稿：石宝明；责任编辑：秦碧雯；英文编辑：刘益平）