红枣中黄酮类化合物最佳提取工艺研究

包东东

自然界中多数植物都可合成黄酮类化合物，黄酮类化合物多与糖结合为黄酮苷，少部分为游离态。黄酮类化合物具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗过敏及调节血脂血糖等诸多药理作用，同时它还是1种天然抗氧化剂，可清除人体氧自由基，起到抗衰老与增加机体免疫力的作用。具有广泛开发前景的天然药物[1]。新疆红枣资源丰富，除干制外, 还可有蜜枣、酒枣、枣泥、枣脯、枣汁、枣酒等深加工产品。据文献报道，红枣富含黄酮类化合物，故以当地一些难以加工的裂枣、劣枣为原料提取黄酮类物质，可使资源得以充分利用，拓宽当地红枣销路，利于新疆经济加快发展。笔者采用超声波辅助提取法，通过实验确定提高红枣中黄酮类化合物最佳提取工艺，以期为从天然植物材料中提取黄酮类化合物提供参考。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器 选用阿克苏红枣作为提取原料。实验试剂包括盐酸、氢氧化钠、氢氧化钙、乙醇、亚硝酸钠、10%硝酸铝10%、芦丁标准液等。仪器选用T6型紫外可见分光光度计；KQ-3200DB 型超声波仪（150W）；BL2200H型电子天平。

1.2 样品制备 红枣洗净，切碎，于75℃下烘干24h，粉碎机粉碎后过60目筛备用。

1.3 方法

使用芦丁标准液绘制黄铜标准曲线[2]，采用超声波辅助提取法提取原料中黄酮类化合物，通过超声功率、温度、时间与液料比4个单因素实验确定最佳提取工艺。

1.3.1 温度的选择：准确称取样品6份各2.00g，以60%乙醇溶液20ml为溶剂，设定提取温度依次为30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃，超声功率60%，提取30min，取上清液1ml以硝酸铝比色法测定，以确定黄酮类化合物提取最佳温度。

1.3.2 时间的选择：准确称取样品6份各2.00g，以60%乙醇溶液20ml为溶剂，温度50℃，超声功率60%，提取时间依次为10、20、30、40、50与60min，取上清液1ml以硝酸铝比色法测定，以确定黄酮类化合物提取最佳时间。

1.3.3 液料比的选择：准确称取样品6份各2.00g，分别以60%乙醇溶液8、12、16、20、24、28及32ml为溶剂，温度50℃，超声功率60%，取上清液1ml以硝酸铝比色法测定，以确定黄酮类化合物提取最佳液料比。

1.3.4 超声功率的选择 准确称取样品6份各2.00g，以60%乙醇溶液20ml为溶剂，温度50℃，超声功率分别为40%、50%、60%、70%、80%及90%，提取30min，取上清液1ml以硝酸铝比色法测定，以确定黄酮类化合物提取最佳超声功率。

1.4 数据处理 记录1.3中各单因素实验数据，分别绘制温度、时间、液料比及超声功率与提取量关系曲线并分析。

2 结 果

2.1 最佳提取温度 依照实验数据绘制温度—提取含量曲线（见图1），当提取温度＜60℃，提取量随温度上升而显著上升，当＞60℃时含量上升趋势趋缓，故考虑到能耗节约及黄酮类物质在较高温度下不稳定等因素，60℃为确定的最佳提取温度。

图1 温度—提取量曲线

2.2 最佳提取时间 依照实验数据绘制时间—提取量曲线（见图2），提取时间为10～20 min内提取量上升趋势明显，20～30min内提取量趋缓，＞30min提取量趋于平稳，继续增加提取时间对黄酮提取量影响不大。故确定30min为最佳提取时间。

图2 时间—提取量曲线

2.3 最佳液料比 依照实验数据绘制液料比—提取量曲线（见图3），液料比为5～10时提取量上升趋势明显，＞10时提取量上升趋缓。故考虑节约成本，确定10为最佳液料比。

图3 液料比—提取量曲线

2.4 最佳超声功率 依照实验数据绘制功率—提取量曲线（见图4），显示功率为20%～60%范围内时提取量上升趋势明显。功率＞60%后提取量无明显提升。故确定60%为黄酮类化合物提取的最佳超声功率。

图4 功率—提取量曲线

3 讨 论

溶剂的溶解度对黄酮类化合物提取有直接的影响。研究显示，黄酮类化合物在有机溶剂乙醇中溶解度大，提取率高，故本实验选用乙醇作为有机溶剂提取剂[3]，采用超声波辅助提取法进行提取。因提取的实质是物质从组织内部向溶液中转移的过程，在这个过程中，影响提取效率的主要因素包括提取温度、提取时间、料液比及微波功率等。需要注意的是，理论上原料颗粒越小，提取时间应越短，但因为粒度太小会加大分离提纯难度，增加运行成本，而颗粒太大又不利于植物组织中有效成分的析出，故粉碎粒度须适中。本实验结果显示，超声波辅助提取法提取红枣中黄酮类化合物的最佳工艺条件：液料比为10，超声功率60%，60℃下提取30min，可获得较高提取效率，值得推广与应用。

[1]刘世军,唐志书,崔春利,等.大枣化学成分的研究进展[J].云南中医学院学报,2015,38(3):96-100.

[2]韩志萍.陕北红枣中总黄酮的提取及含量比较[J].食品科学,2006,27(12):560-562.

[3]张春兰,张锐利,熊素英,等.超声波辅助提取红枣核中总黄酮的研究[J].安徽农业科学,2010,38(12):6503-6505.