P16和Ki-67在宫颈上皮内瘤变分级中的临床应用

马 艳，丁香平

(江西省妇幼保健院肿瘤科阴道镜室，南昌 330006)

P16和Ki-67在宫颈上皮内瘤变分级中的临床应用

马 艳，丁香平

(江西省妇幼保健院肿瘤科阴道镜室，南昌 330006)

目的检测不同级别的宫颈上皮内瘤变(CIN)中P16和Ki-67的表达水平，探讨P16和Ki-67对辅助CIN分级的临床意义。方法选择不同级别的CIN患者513例(其中CINⅠ263例，CINⅡ131例，CINⅢ119例)，应用免疫组织化学法对其宫颈上皮组织进行P16和Ki-67检测，分析不同级别CIN所对应的P16和Ki-67表达强度。结果P16表达强度在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中逐渐增高，P16表达强度与CIN分级呈正相关(r=0.621，P<0.01)；Ki-67表达强度在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中逐渐增高，Ki-67表达强度与CIN分级亦呈正相关(r=0.702，P<0.01)；P16和Ki-67两种方法的表达呈一致性(r=0.834，P<0.01)。结论P16和Ki-67对CIN分级提供十分有用的参考价值，两者联合应用有助于病理医生对CIN诊断的一致性。

P16； Ki-67； 免疫组织化学； 宫颈上皮内瘤变； 分级

宫颈上皮内瘤变(CIN)诊断和分级以病理诊断为金标准，而一份良好的组织学报告取决于临床病史、病理组织的质量和病理学医师的专业技能和经验。相关报道[1-2]表明对于高级别CIN(HSIL)，在不同的病理学医师之间诊断的可重复性较好，而在诊断低级别CIN(LSIL)时可重复性较差。P16蛋白是由正常细胞产生的蛋白质，可以抑制细胞周期蛋白D的合成，通过免疫组织化学染色检测可了解其失活状态；P16蛋白是辅助诊断CIN并鉴别LSIL和HSIL的一个标记物[3]。Ki-67增殖细胞核抗原反映细胞增殖活性，通过免疫组织化学染色检测标记细胞的抗体水平，可反映正常和病变细胞的增殖活性。有研究[4]认为Ki-67阳性细胞在CIN各级别的差异有显著性，是有利于CIN分级的标记物。本研究通过检测不同级别CIN中P16和Ki-67的表达水平，探讨P16和Ki-67对辅助CIN分级的临床意义。

1 对象和方法

1.1 研究对象

选择2016年1—12月在江西省妇幼保健院门诊就诊的513例患者，通过了解病史和病理诊断为CIN，其中CINⅠ 263例，CINⅡ 131例，CINⅢ 119例)。宫颈上皮组织标本采用苏木素-伊红(HE)染色，由3位高年资病理医师检阅切片，选取2位以上医师一致诊断意见。

1.2 检测方法及判定标准

试剂：鼠抗P16/MTS1(6H12)抗体和小鼠抗人Ki-67单克隆抗体。组织切片：甲醛溶液固定石蜡切片。采用德国Leica公司生产的BOND-MAX型全自动免疫组织化学染色机检测。

P16结果判定：阳性细胞比例<5%(-)阴性，阳性细胞比例5%～25%(+)弱阳性，阳性细胞比例26%～75%()阳性，阳性细胞比例>75%()强阳性。Ki-67结果判定：<5%细胞着色(-)阴性，5%～25%细胞着色(+)弱阳性，26%～50%细胞着色()阳性，>50%细胞着色()强阳性。

1.3 统计学方法

应用SPSS19.0建立数据库，采用非参数检验中Spearman检验进行相关性分析。

2 结果

2.1 P16在各级别CIN的表达强度

P16表达强度在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中逐级增高，Spearman检验，相关系数r=0.621，P<0.01，提示P16表达强度与CIN级别呈正相关。见表1。

表1 P16在各级别CIN的表达强度 例

2.2 Ki-67在各级别CIN的表达强度

Ki-67表达强度在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中逐级增高，Spearman检验，相关系数r=0.702，P<0.01，提示Ki-67表达强度与CIN级别呈正相关。见表2。

表2 Ki-67在各级别CIN的表达强度 例

2.3 P16和Ki-67在各级别CIN的表达强度相关性比较

P16和Ki-67两种检测方法在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ表达强度呈一致性，相关系数r=0.843，P<0.01。

3 讨论

P16蛋白能调节细胞周期蛋白E的合成，而细胞周期蛋白E能激活生长周期中DNA的合成，从而抑制细胞周期蛋白D的产生。HPV-E7基因产物可结合视网膜细胞瘤的基因产物和蛋白，并抑制后者的磷酸化过程，因此，P16的过度表达间接显示了E7蛋白的出现，表明致癌性的人类乳头瘤病毒(HPV)整合进入了宿主细胞。P16蛋白可通过免疫组织化学染色技术检测，且应用P16免疫组织化学技术能鉴别LSIL和HSIL，并有较高的敏感性和特异性，P16在预测LSIL的结局也有一定价值[3]。Volgareva等[5]研究显示P16的表达在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中的阳性率逐渐增加，推荐P16用于子宫颈癌的早期诊断的辅助检查。Finegan等[6]研究认为P16常在宫颈鳞状细胞癌组织中表达，在良性病变和低级别病变时阴性，P16可能是从低级别到高级别病变转化的标志物。O’Neill等[7]认为P16有助于诊断局灶性高级别CIN病变。也有研究[8]表明P16在宫颈病变组织中的表达与组织分化程度呈显著正相关关系，是宫颈病理和细胞学诊断的良好补充。本研究结果显示，P16表达强度与CIN级别呈正相关，支持上述结论，同时结果(表2)也显示有83.65%(220/263)CINⅠ患者P16呈阴性或弱阳性，39.69%(52/131)CINⅡ患者P16呈阴性或弱阳性，11.76%(14/119)CINⅢ患者P16呈弱阳性，提示P16并不能独立作为CIN级别高低的鉴别。

Ki-67是一种增殖细胞相关的核抗原，反映细胞增殖活性，与很多恶性肿瘤的发展、转移和预后有关，在宫颈病变中，Ki-67的表达良性病变明显低于恶性病变，Ki-67有助于CIN诊断、分级和评估预后[9-10]。Korolenkova等[4]认为Ki-67表达指数与CIN相关，并可作为CIN诊断、分级和评估病程的标记物。Calil等[11]认为P16和Ki-67的表达与宫颈病变是否为高危型HPV感染和宫颈高级别病变密切相关。本研究结果显示Ki-67表达强度在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中逐级增高，表达强度与CIN级别呈正相关，提示Ki-67表达与CIN病变程度呈正相关。张燕等[12]研究认为P16和Ki-67在宫颈组织中的表达一致性具有显著的正相关性，P16和Ki-67对宫颈良性改变的甄别、CIN的分级判定及宫颈早期浸润癌的诊断具有重要价值。谢小丽[13]研究认为P16联合Ki-67可以用于鉴别宫颈良性病变和CIN及CIN病变程度的判定。本研究结果显示P16和Ki-67两种检测方法在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ表达强度呈一致性，提示P16和Ki-67两种检测方法联合应用对CIN分级判断有重要参考价值。

P16和Ki-67能否对CIN进行预后判定目前尚有争议。del Pino等[14]对138例P16阳性的CINⅠ患者进行平均29个月的追踪随访，仅10.1%进展为CINⅡ或CINⅢ，47.6%转阴，42%维持CINⅠ，55.8%患者P16表达继续保持阳性，提示CINⅠ即使P16表达阳性，也很少进展高级别CIN。Zhong等[15]研究认为P16和Ki-67表达有助于提高CIN病变的诊断准确性，但不能对LSIL的预后进行预测。王荣敏等[16]对P16与CINⅠ病变进展进行Meta分析，认为P16是CINⅠ病变进展的预测因子，对CINⅠ的分流有一定价值，可用于筛查出高危人群重点随访。

综上所述，P16和Ki-67对CIN分级提供十分有用的参考价值，两者结合应用有助于CIN诊断和分级，两种方法联合应用可能对CIN预后判定有帮助，但仍然需要进一步相关研究。

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ClinicalApplicationofP16andKi-67inGradingofCervicalIntraepithelialNeoplasia

MAYan,DINGXiang-ping

(VaginoscopyRoom,DepartmentofOncology,JiangxiMaternalandChildHealthCareHospital,Nanchang330006,China)

ObjectiveTo detect the expression of P16 and Ki-67 in different grades of cervical intraepithelial neoplasia(CIN),and to investigate their clinical significance in CIN grading.MethodsThe expression of P16 and Ki-67 in cervical epithelium was measured by immunohistochemistry in 513 patients with different grades of CIN(263 cases of CINⅠ,131 cases of CINⅡ,119 cases of CINⅢ).ResultsThe levels of both P16 and Ki-67 expression were positively with the grade of CIN(r=0.621 andr=0.702,respectively;P<0.01).There was a consistency in the expression of P16 and Ki-67(r=0.834,P<0.01).ConclusionThe expression of P16 and Ki-67 provides a reference for CIN classification.The combined detection of P16 and Ki-67 expression is helpful for the consistency of CIN diagnosis.

P16; Ki-67; immunohistochemistry; cervical intraepithelial neoplasia; grading

2017-06-11

马艳(1982—)，女，学士，主治医师，主要从事妇幼保健学的研究。

R737.33

A

1009-8194(2017)10-0041-03

10.13764/j.cnki.lcsy.2017.10.016

钟荣梅)