miRNA-758在宫颈癌肿瘤组织、血液和宫颈脱落细胞中的表达情况及其对宫颈癌浸润和侵袭的调控机制

张丽娟

miRNA-758在宫颈癌肿瘤组织、血液和宫颈脱落细胞中的表达情况及其对宫颈癌浸润和侵袭的调控机制

张丽娟

目的探讨宫颈癌患者肿瘤组织、血液和宫颈脱落细胞中miRNA-758表达情况及其对宫颈癌浸润和侵袭的调控机制。方法选取宫颈癌患者40例作为宫颈癌组，另选取非宫颈癌患者40例作为非宫颈癌组。采用QRT-PCR对各标本中MEPE mRNA表达进行检测，采用Western Blot对肿瘤组织中MEPE蛋白表达进行检测，运用ELISA法对血液中MEPE蛋白表达进行检测，采用QRT-PCR对各标本中miRNA-758的mRNA表达进行检测，然后对2组患者各标本中MEPE mRNA、蛋白、miRNA-758表达水平进行统计分析。结果宫颈癌组患者肿瘤组织、血液、宫颈脱落细胞中MEPE mRNA、蛋白表达水平均显著高于非宫颈癌组(P<0.05)，miRNA-758表达水平均显著低于非宫颈癌组(P>0.05)。结论miRNA-758在宫颈癌患者肿瘤组织、血液和宫颈脱落细胞中表达水平降低，可能通过MEPE对宫颈癌浸润和侵袭进行调控，值得临床充分重视。

宫颈癌；肿瘤组织；血液；宫颈脱落细胞；miRNA-758表达；宫颈癌浸润和侵袭；调控机制

宫颈癌属于1种妇科恶性肿瘤，在临床极为常见，仅次于乳腺癌[1]。本研究主要探讨宫颈癌患者肿瘤组织、血液和宫颈脱落细胞中miRNA-758的表达情况及对宫颈癌浸润和侵袭的调控机制，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取我院2014年5月至2016年5月收治的宫颈癌患者40例，所有患者均接受手术治疗，均经术后病理证实为宫颈癌，均为首次发病，均知情同意；将术前应用过激素、接受过放化疗治疗的患者排除在外。患者年龄27～69岁，平均(48.5±10.2)岁。肿瘤直径<4 cm 36例，≥4 cm 4例。在宫颈鳞癌病理分级方面，30例患者为高中分化，10例患者为低分化；在浸润深度方面，22例患者为浅肌层，18例患者为深肌层；在淋巴结转移方面，12例患者有，28例患者无。将这些患者作为宫颈癌组，另选取我院同期收治的非宫颈癌患者40例作为非宫颈癌组，患者年龄25～66岁，平均(45.4±10.2)岁。2组患者的年龄差异不显著(t=1.886，P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

将2组患者的标本收集起来，分为以下三个部分：①将宫颈癌组患者的肿瘤组织及癌旁组织切除，将其保存在液氮低温环境中待测；②将2组患者的清晨空腹外周血采集下来，EDTA抗凝并在-20 ℃的温度下保存；③用取样专用软毛刷将宫颈脱落细胞收集起来，在细胞保存液中放置保存。采用QRT-PCR对各标本中MEPE mRNA表达进行检测；运用Trizol法将标本中的总RNA提取出来，然后分别进行逆转录将cDNA获取过来。运用2-△△Ct法将结果计算出来，并将MEPE/GAPDH比值计算出来。采用Western Blot对肿瘤组织中MEPE蛋白表达进行检测，采用image lab3.0软件将蛋白质信号条带图像获取过来并分析其信号，目的蛋白的相对含量=目的蛋白条带/内参β-actin条带的灰度值。运用ELISA法对血液中MEPE蛋白表达进行检测，采用QRT-PCR对各标本中miRNA-758的mRNA表达进行检测。

1.3 统计学分析

2 结果

宫颈癌组患者肿瘤组织、血液、宫颈脱落细胞中MEPE mRNA、蛋白表达水平均显著高于非宫颈癌组(P<0.05)，miRNA-758表达水平均显著低于非宫颈癌组(P<0.05)，见表1。

表1 2组患者各标本中MEPE mRNA、蛋白、miRNA-758表达水平比较

注：*为与非宫颈癌组比较，P<0.05。

3 讨论

2000年，相关医学学者最初从肿瘤相关性低血磷性骨软化症(osteomalacia due to low blood sugar，OHO)患者肿瘤组织的cDNA文库中将细胞外基质磷酸化糖蛋白(MEPE)筛选寻找并克隆了出来[2]。RT-PCR结果表明[3]，正常组织中MEPE表达于大脑及骨髓中，极少表达于人胎盘、肾、肺中。OHO患者肿瘤组织中具有较高的MEPE表达，因此临床普遍认为[4]，在低血磷性骨软化症的诱发因素中，其属于调磷因子。相关医学研究表明[5]，在DNA修复及对DNA损伤性的耐药性进行对抗的过程中，其均发挥着极为重要的作用。此外，还有相关医学研究表明[6]，肿瘤细胞的转移性受到MEPE/OF45表达水平的直接而深刻的影响，在肿瘤耐药性及迁移性中均占有极为重要的地位。但是，现阶段，还很少有相关医学研究报道宫颈癌组织中MEPE的表达情况及其调控基因[7]。

现阶段，在宫颈癌的筛查中，临床通常单独应用宫颈细胞学检查或将其和HPV检测有机结合起来。相关医学研究表明[8]，在分层筛查HPV阳性妇女的过程中，宫颈细胞学检查的时效性较好。宫颈细胞学检查具有较高的特异性，已经在分层筛查HPV初筛阳性妇女的过程中得到了广泛应用。检测宫颈脱落细胞样本中一些分子水平能够将有效依据提供给临床诊断和治疗宫颈癌的工作[9]。本研究结果表明，宫颈癌组患者肿瘤组织、血液、宫颈脱落细胞中MEPE mRNA、蛋白表达水平均显著高于非宫颈癌组(P<0.05)，miRNA-758表达水平均显著低于非宫颈癌组(P>0.05)，说明MEPE在一定程度上调控宫颈癌的途径可能是将其转录及蛋白功能表达水平上调。MEPE mRNA及蛋白表达水平在宫颈癌患者血液和宫颈脱落细胞中具有一致的上调趋势。由于肿瘤转移的常见渠道为血液，因此宫颈癌的转移可能受到血液中MEPE蛋白表达上调的影响，宫颈脱落细胞中具有异常的MEPE蛋白表达可能能够作为宫颈癌的潜在标志物。在宫颈癌病理中，miRNA-758可能将调控作用发挥了出来，同时对MEPE蛋白表达方式造成影响的途径还极有可能为调控靶基因MEPE的转录水平。

宫颈癌的发生发展是一个极其复杂的过程，涉及多阶段、多因素、多基因变异积累及相互作用，在分子水平上涉及众多抑癌基因、原癌基因、转移相关基因及蛋白质改变[10]。血液、宫颈脱落细胞这些生物标本的获取过程中具有无创性、较为简便的操作、较高的敏感性及特异性，因此具有较为广阔的临床诊断应用前景，现阶段，在临床检查中可以作为良好的辅助[11]。但是，临床仍然需要进一步研究宫颈癌细胞水平上miRNA-758的生物功能，将miRNA-758基因对MEPE和该肿瘤关系进行调控的直接证据进一步寻找出来，从而对肿瘤发展过程中miRNA-758的作用进行更深入的了解，将有效的理论依据提供给临床预防、诊断及治疗[12]。

总之，miRNA-758在宫颈癌患者肿瘤组织、血液和宫颈脱落细胞中表达水平降低，可能通过MEPE对宫颈癌浸润和侵袭进行调控，值得临床充分重视。

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ExpressionsofmiRNA-758inTumorTissue，BloodandCervicalExfoliatedCellsofPatientswithCervicalCancerandItsRegulationMechanismonInfiltrationandInvasionofCervicalCarcinoma

ZHANGLijuan.

TheSecondPeople'sHospitalofFuxin，Fuxin，123000

ObjectiveTo investigate the expressions of miRNA-758 in tumor tissue，blood and cervical exfoliated cells of patients with cervical cancer and its regulation mechanism on infiltration and invasion of cervical carcinoma.Methods40 cases of patients with cervical cancer were selected as cervical cancer group，40 cases of non-cervical cancer were selected as non-cervical cancer group，the expressions of MEPE mRNA in all samples were detected by QRT-PCR，the expressions of MEPE protein in tumor tissue were detected by western blot.The expressions of MEPE protein in the blood were detected by ELISA method，the expressions of miRNA-758 mRNA in the specimens were detected by QRT-PCR，and MEPE mRNA，protein，miRNA-758 expression levels in each specimen of the 2 groups were statistically analyzed.ResultsThe MEPE mRNA，protein，miRNA-758 expression levels in cervical tumor tissue，blood，cervical exfoliated cells of the cervical cancer group were significantly higher (P<0.05)，the miRNA-758 expression levels in cervical cancer group were significantly lower than the non cervical cancer group (P>0.05).ConclusionThe expression levels of miRNA-758 in tumor tissue，blood and cervical exfoliated cells of cervical cancer patients reduced，which may regulate infiltration and invasion of cervical carcinoma by MEPE，and it is worthy of clinical attention.

Cervical cancer;Tumor tissue;Blood;Cervical exfoliated cells;miRNA-758 expression;Infiltration and invasion of cervical cancer;Regulatory mechanism

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1934～1936)

123000 辽宁省阜新市第二人民医院(阜新市妇产医院)

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.12.006

R737.33

A

1001-5930(2017)12-1934-03

2016-12-28

2017-08-29)

(编辑：甘艳)