赤芍药材中芍药苷含量测定方法的改进

张 艳 ，申丽莎 ，杨 帆 ，王祯旭 ，邓开英

（1．重庆市中药研究院，重庆 400061； 2．重庆市食品药品检验检测研究院，重庆 401121；3．重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆 401121）

赤芍药材中芍药苷含量测定方法的改进

张 艳1，申丽莎1，杨 帆2，3，王祯旭2，3，邓开英2，3

（1．重庆市中药研究院，重庆 400061； 2．重庆市食品药品检验检测研究院，重庆 401121；3．重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆 401121）

目的对测定赤芍药材中芍药苷含量的高效液相色谱（HPLC）法进行优化。方法色谱柱采用Waters SunFire C18柱(150mm×4．6mm，5 m)，以乙腈－0．1% 磷酸（14 ∶86）为流动相，流速为 2．0mL ／min，检测波长为 230 nm。结果芍药苷进样量在 0．06104 ～1．2208 g范围内与峰面积积分值线性关系良好（r＝0．9999），平均加样回收率为97．65%，RSD为1．47%（n＝6）。结论该方法简便，快速，结果准确，可用于赤芍药材的质量控制。

赤芍药材；芍药苷；高效液相色谱法；含量测定

赤芍为常用中药，具有清热凉血、散瘀止痛的功效，主治热入营血，温毒发斑，吐血衄血，目赤肿痛，肝郁肋痛，经闭痛经，跌扑损伤，痈肿疮疡[1]。赤芍收载于2015年版《中国药典（一部）》，在历版药典中均采用甲醇－0．05mol／L磷酸二氢钾溶液（40∶65）为流动相测定其中芍药苷含量，该流动相含缓冲盐，对仪器系统和色谱柱损伤较大；供试品溶液制备样品0．5 g需采用甲醇浸泡4 h后再超声处理30 min。参照2015年版《中国药典（一部）》白芍药材含量测定项下芍药苷含量测定方法，经试验研究，对赤芍中芍药苷含量测定方法进行了改进，优化流动相的组成，简化供试品溶液制备方法，为完善赤芍的质量标准，并与白芍药材含量测定方法统一提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1．1 仪器

Agilent－1100型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；BP211S型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；Simplicity－185型超纯水机（美国 Millipore公司）。

1．2 试药

芍药苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110736－201035，含量为 96．5%）；赤芍药材(3 批，重庆市中药饮片厂有限公司、鑫斛药庄、重庆桐君阁大药房各1批），经重庆市食品药品检验检测研究院杨帆副主任中药师鉴定，均为毛茛科植物芍药 Paeonia lactiflora Pall．的干燥根；乙腈（色谱纯，美国 Fisher公司），水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Waters SunFire C18柱（150 mm × 4．6 mm，5 μm）；流动相：乙腈－0．1% 磷酸（14 ∶86）；流速：2．0 m L ／min；检测波长：230 nm；柱温：30 ℃；进样量：10μL。在此色谱条件下，供试品溶液中芍药苷色谱峰分离良好。色谱图见图1。

2．2 溶液制备

称取芍药苷对照品0．01265 g，精密称定，置100m L容量瓶中，加50%乙醇溶解并定容，作为对照品贮备液；精密量取该贮备液5 mL，置 10 m L容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取赤芍药材，粉碎，研细，取0．1 g，精密称定，置50mL容量瓶中，加稀乙醇35mL，超声处理30min，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

图1 高效液相色谱图

2．3 方法学考察

线性关系考察：取2．2项下对照品溶液，分别进样1，5，10，15，20 μL，测定峰面积。以进样量（C，μg）为横坐标、峰面积积分值(A)为纵坐标进行线性回归，得回归方程 A＝1141．98C ＋1．921，r＝0．9999(n＝5)。结果表明，芍药苷进样量在0．06104～1．2208μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验：精密吸取2．2项下对照品溶液10μL，连续进样测定 5次，记录峰面积。结果的 RSD为1．04%(n＝5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取新制备的同一供试品溶液，分别于0，2，4，8，12 h 时进样测定，每次 10 μL，记录峰面积。结果的 RSD为 1．18%(n＝5)，表明供试品溶液在 12 h内稳定。

重复性试验：取同一批赤芍样品，分别按2．2项下方法共制备供试品溶液6份，测定芍药苷含量。结果平均含量为2．0%，RSD为1．46%(n＝6)，表明方法重复性良好。

加样回收试验：称取已含量的同一批赤芍样品（同重复性试验样品）0．05 g，共6份，精密称定，分置50m L容量瓶中，分别精密加入对照品溶液适量，按2．2项下方法制备供试品溶液，测定，计算回收率。结果见表1。

表1 芍药苷加样回收试验结果（n＝6）

2．4 样品含量测定

取3批赤芍药材，分别按本研究中拟订的改进方法和2015年版《中国药典（一部）》收载方法测定，结果芍药苷的含量分别为 2．0% ，2．2% ，2．5% ，以及 2．1% ，2．3% ，2．4% ，两者结果基本一致。

3 讨论

流动相选择：文献[2－14]报道，高效液相色谱（HPLC）法测定中药芍药苷含量的流动相系统有乙腈－0．1%磷酸溶液、乙腈－水、甲醇－水、甲醇－0．1%磷酸溶液、甲醇－0．05mol／L磷酸二氢钾溶液等。本研究中主要比较了《中国药典》赤芍药材含量测定用流动相（甲醇－0．05 mol／L磷酸二氢钾溶液）和《中国药典》白芍药材含量测定用流动相（乙腈－0．1%磷酸溶液），结果赤芍药材中芍药苷色谱峰均达到基线分离，峰形良好，但乙腈－0．1% 磷酸溶液（14 ∶86）组成简单，不含缓冲盐，利于色谱柱和仪器系统的保护，故选定为流动相。

供试品溶液制备方法的考察：减少赤芍药材的取样量，制备溶剂由甲醇改为稀乙醇（降低毒性），经过对提取时间进行考察发现，样品经超声提取30min，已将样品中芍药苷提取完全。

采用改进后的方法测定3批赤芍药材中芍药苷的含量，结果与《中国药典》方法测定结果一致，色谱峰经二级管阵列检测器（DAD）检测，样品中芍药苷色谱峰与芍药苷对照品色谱峰紫外光（UV）光谱一致。

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[M]．北京：中国医药科技出版社，2015：158．

[2]黄卫娟，何秀云，刘 杰，等．HPLC法测定八珍丸（浓缩丸）中芍药苷的含量[J]．中国药房，2016，27（15）：2126．

[3]于红艳，张 宾．反相高效液相色谱法测定降酶丸中芍药苷的含量[J]．中医学报，2014，29（4）：546－547．

[4]杨慈海，范常龙．高效液相色谱法测定斑秃丸中芍药苷的含量[J]．海峡药学，2014，26 （3）：45．

[5]赵 剑，陈玉兰，蒲清荣，等．茵陈四苓颗粒质量标准研究[J]．中成药，2014，36（4）：763．

[6]国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[M]．北京：中国医药科技出版社，2010：419．

[7]毕映燕，李秀文，刘效栓，等．HPLC法测定复方赤芍颗粒中芍药苷含量[J]．中国中医药信息杂志，2014，21（4）：78．

[8]白雪媛，常桂娟，杨吉平，等．HPLC法测定血复生片中芍药苷的含量[J]．中药新药与临床药理，2014，25 （2）：216．

[9]李 静，钱 江．高效液相色谱法同时测定复方黄连素片中芍药苷和盐酸小檗碱含量[J]．中国药业，2016，25（7）：61．

[10]高鸿彬，傅 ，王晓君，等．HPLC法测定养阴清肺口服液中芍药苷的含量[J]．西北药学杂志，2016，31（3）：254．

[11]赵 剑，李 静，蒲清荣，等．高效液相色谱法同时测定利胆宽肠颗粒中栀子苷和芍药苷含量[J]．中国药业，2016，25（7）：54．

[12]李喜香，刘效栓，毕映燕，等．补脑软胶囊质量标准的研究[J]．中成药，2016，38（2）：321．

[13]程艳芹，纪松岗，马 燕，等．内消颗粒的质量标准研究[J]．解放军药学学报，2016，32（1）：35．

[14]杨仕林，王 雨．反相高效液相色谱法同时测定正柴胡饮合剂中橙皮苷和芍药苷含量[J]．中国药业，2015，24（21）：121．

Improvement of the Determination Method of Paeoniflorin in Radix Paeoniae Rubra

Zhang Yan1， Shen Lisha1， Yang Fan2，3， Wang Zhenxu2，3， Deng Kaiying2，3
（1．Chongqing Academy of Chinese Materia Medica， Chongqing， China 400061； 2．Chongqing Institute for Food and Drug Control， Chongqing，China 401121； 3．Chongqing Engineering Center for Pharmaceutical Process and Quality Control，Chongqing，China 401121）

Objective To improve the HPLC method for the content determination of paeoniflorin in Radix Paeoniae rubra．Methods The Waters SunFire C18column（150 mm ×4．6 mm，5 μm） was adopted with the mobile phase of acetonitrile－0．1% phosphoric acid（14 ∶86），the flow rate was 2．0 m L ／min，and the detection wavelength was 230 nm．Results The linear range of paeoniflorin was 0．06104－1．2208 μg（r＝0．9999），the average recovery was 97．65% ，the RSD was 1．47% （n ＝ 6）．Conclusion The method is simple，rapid and accurate，which can be used for the quality control of Radix Paeoniae rubra．

Radix Paeoniae rubra；paeoniflorin；HPLC；content determination

R284．1;R282．6

A

1006－4931(2017)24－0028－03

10．3969 ／j．issn．1006－4931．2017．24．009

张艳，女，副研究员，研究方向为中药材规范化种植、组织培养、基地建设规划、中药质量控制等，（电子信箱）cqzy01＠163．com。

邓开英，女，主任药师，研究方向为药品质量控制，（电子信箱）dengkaiying6811＠sina．com。

2017－08－11)