甘油对冰冻解冻红细胞质量的影响观察

刘利俊

（内蒙古乌兰察布市中心血站成分科，内蒙古 乌兰察布 012000）

・基础研究・

甘油对冰冻解冻红细胞质量的影响观察

刘利俊

（内蒙古乌兰察布市中心血站成分科，内蒙古 乌兰察布 012000）

目的观察甘油对冰冻解冻红细胞质量的影响。方法 选取保存于2～6℃RH阴性去白细胞悬浮红细胞10袋，-80℃冰冻并予ACP215全自动血细胞处理仪解冻，根据不同方法分为实验组与对照组，前者5袋冰冻解冻去甘油，后者5袋不去甘油，观察冰冻解冻去甘油红细胞质量指标情况。结果两组冰冻解除去甘油红细胞中甘油残余量、游离血红蛋白浓度和血红蛋白含量对比；差异无统计学意义（P＞0.05）；质量控制标准为：甘油残余量≤10 g/L；游离血红蛋白浓度≤1 g/L；血红蛋白≥16 g/L。结论制备冰冻解冻去甘油红细胞与国家标准均符合，且可为临床抢救获取更多时间。

甘油；冰冻解冻红细胞质量；影响

随着近年来我国广泛开展成分输血，Rh（D）阴性血用量随之增长。超低温甘油化冰冻保存红细胞是血站贮备，若临床急需可及时予以解冻洗涤，很大程度上争取更多的抢救时间[1]。甘油化制备冰冻解冻红细胞为长时间保存Rh（D）阴性血理想方案，本研究予ACP215全自动血细胞处理仪对2种冰冻红细胞予以去甘油洗涤，且检测2种方案制备冰冻解冻去甘油红细胞质量，获取满意效果，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

冰冻解冻去甘油红细胞、一次性无菌空袋、9%Nacl、6%羟乙基淀粉溶液、0.9%Nacl一次性注射器、、一次性输血器、分浆夹、挂钩、止血钳。无菌接管机、电子秤、DL-6M离心机、脱色摇床、血液分浆夹、高频热合机。

1.2 方法

取6 d内红细胞悬液10袋，2500转/分离心10分钟，分离上清液并移到六珠袋内，加入甘油，每分钟振动60次，直至甘油加完排空袋内空气；甘油化细胞置入室温下半小时后，离心取100 mL上清液，冰冻保存于-80℃冰箱内，5袋甘油化红细胞不去甘油，另外5袋甘油化冰冻红细胞，切勿叠加放置。保存30 d后将冰冻红细胞取出置入37～40℃恒温水浴箱内熔化，血袋全部浸没于水，轻轻振动使其快速融化，不得用手搓捏未融化的红细胞，直至冰冻红细胞完全解冻；予ACP215全自动血细胞处理仪选取去甘油程序，将装有9%NaCl洗涤溶液袋用无菌接管机通过输液器与三珠袋相连，调整输液器滴速，注入9 %NaCl溶液80 mL，20分钟加完，平衡5分钟。再加入100 mL羟乙基淀粉溶液，先慢后快，10分钟加完，平衡5分钟。以2500转/分离心8分钟，去除上清。滴加100 mL羟乙基淀粉溶液，10分钟内加完，平衡5分钟。再加入0.9%NaCl溶液150 mL，30分钟加完。2500转/分，离心8分钟，去除上清。滴加0.9 %NaCl溶液150 mL，加至一半时，平衡5分钟。再调整滴速至90滴/分，20分钟加完，2500转/分，离心8分钟，去除上清。滴加0.9 %NaCl溶液100 mL，2500转/分，离心8分钟，去除上清。洗涤上清液应无明显溶血迹象，最后加入0.9 %NaCl 溶液100 mL，悬浮后供临床使用。最后予邻联甲苯胺法对游离血红蛋白进行检测，血红蛋白含量予血细胞计数仪检测，甘油残余量予过碘酸钠法检测，B-D细菌培养与检测系统予以细菌培养、检测。

1.3 观察指标与评定标准

观察并对比2组冰冻解除去甘油红细胞质量，包括甘油残余量、游离血红细胞含量、血红蛋白含量。分析质量控制标准，甘油残余量≤10 g/L，残余白细胞≤1*107/U，游离血红细胞≤1 g/L，血红蛋白16 g/L[2]。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以“s”表示，采用t检验；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 对比两组冰冻解除去甘油红细胞质量指标

两组冰冻解除去甘油红细胞中甘油残余量、游离血红蛋白浓度、血红蛋白含量对比；差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 对比两组冰冻解除去甘油红细胞质量指标（s，g/L）

表1 对比两组冰冻解除去甘油红细胞质量指标（s，g/L）

组别（n=袋数） 甘油残余量 游离血红蛋白浓度 血红蛋白含量实验组（n=5） 6.57±1.41 0.33±0.12 16.52±0.48对照组（n=5） 6.35±1.27 0.34±0.14 16.71±0.52

2.2 质量控制标准

甘油残余量：≤10 g/L；游离血红蛋白浓度：≤1 g/L；血红蛋白：≥16 g/L。

3 讨 论

冷冻保存RH阴性血为保存稀有血液唯一途径，经大量临床研究均获得认可，但制备冰冻解冻去甘油红细胞的环节较为复杂[3，4]。作为采供血机构，于单位或者街头开展血液收集与献血招募时，因为受到时间、环境等外部因素的制约，针对献血者RH血型不予以检测，仅当血液收集至血站后再采取相关仪器设备予以检测，最终确定献血者血型是否为RH型[5]。因为临床通常较少使用RH阴性血液，故若血站6℃保存RH阴性血液比较多的时候，且可能存在A、B、O血型等不同情况，从而极易导致血液过期报废[6]。红细胞冰冻技术发明、应用，可有效解决上述问题，不仅避免采集RH阴性血液因临床未及时使用而导致过期报废情况的发生，而且可确保临床需要RH阴性血液时及时供应。红细胞保存于-80℃冰冻可延长保存时间，并提高保存效果，为目前临床最有效的一种长期保存红细胞方案，同时属于稀有血型自身输血重要手段。本研究采取的ACP215全自动细胞处理仪已有效代替以往手工制备法，不仅避免消耗时间过长，而且减小污染风险。ACP215全自动处理仪制备冰冻解冻去甘油红细胞为全封闭式，其制备时间比较短，仅耗时60 min，可有效缩短患者抢救等待时间，降低血液污染率与劳动强度，进而实现血站规范化、标准化及自动化制备模式。经研究结果发现：2组冰冻解除去甘油红细胞中甘油残余量、游离血红蛋白浓度、血红蛋白含量对比均无统计学意义；质量控制标准为甘油残余量：≤10 g/L；游离血红蛋白浓度：≤1 g/L；血红蛋白：≥16 g/L提示冰冻解冻去甘油与不去甘油均与国家标准相符合，但冰冻解冻去甘油红细胞可为临床抢救获取更多时间。分析原因可能为：甘油是红细胞内低温保护剂，能够有效降低红细胞于冷冻时电解质浓度下降，避免细胞膜脂蛋白复合物发生变性，以及类脂质丢失，进而防止发生溶血情况。

总结上文，冰冻红细胞冰冻前不去甘油与去除甘油，制备冰冻解冻去甘油红细胞与国家标准均符合，但后者能够为临床抢救获取更多时间。

[1] 袁文声,林惠燕.冻存前滤除白细胞对解冻红细胞质量影响的研究分析[J].国际检验医学杂志,2015,36(09):1246-1249.

[2] 张雅莉,张 贝,靳朝霞,等.冰冻解冻去甘油红细胞制备过程质量控制方法[J].临床输血与检验,2014,16(01):68-70.

[3] 王 凯,陈 新,张网兰,等.应用MAP在4℃条件下保存冰冻解冻去甘油红细胞的质量变化[J].临床输血与检验,2015,17(01):74-75.

[4] 时卉丽,赵 倩,杨凤霞,等.国产智能红细胞洗涤机及配套耗材制备冰冻解冻去甘油红细胞的质量观察[J].临床合理用药,2016,9(8A):168-169.

[5] 陈 新,王 凯,袁 飞,等.延长解冻去甘油红细胞4℃保存期的质量观察[J].临床输血与检验,2014,16(04):432-433.

[6] 谭 菲.手工法和机器法制备冰冻解冻去甘油红细胞的质量分析临床输血与检验,2015,17(06):563-564.

R457.1

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ISSN.2095-8242.2017.069.13474.02

本文编辑：赵小龙