CD44、ALDH1在胃癌中的表达及与临床特征的相关性分析

张彩兰，杨艳梅

（定西市第二人民医院，甘肃 定西 743000）

CD44、ALDH1在胃癌中的表达及与临床特征的相关性分析

张彩兰，杨艳梅

（定西市第二人民医院，甘肃 定西 743000）

目的 探讨CD44、ALDH1在胃癌中的表达情况，并且分析CD44、ALDH1与胃癌临床特征之间的相关性。方法 采用免疫组化染色、免疫组化双重染色检测正常胃黏膜组织、慢性萎缩性胃炎II～III级胃黏膜组织及胃癌组织中CD44、ALDH1的表达情况，分析CD44、ALDH1表达与胃癌临床特征之间的关系。结果 CD44、ALDH1在胃癌组织中阳性表达的人数多于慢性萎缩性胃炎的胃黏膜组织及正常胃黏膜组织（P＜0．05）；胃癌组织中CD44、ALDH1的表达与肿瘤分级、有无淋巴结转移存在相关性（P＜0．05）。结论 胃癌组织中CD44、ALDH1的表达明显高于正常胃黏膜组织，与胃癌的发生、发展有密切相关性，可作为胃癌早期发现、浸润、转移、预后的重要指标。

胃癌；CD44；ALDH1；临床特征

胃癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，世界各地发病率有很大差异，日本、中国、智利、芬兰、冰岛等国家是胃癌的高发区，而美国、澳大利亚、新西兰等国胃癌的发病率则较低。中国胃癌的发病率占全世界的42%，并且胃癌死亡率占恶性肿瘤的第一位，全国平均胃癌死亡率高达20/10万，男性高于女性，男女比约为3∶1。目前胃癌的治疗主要以手术为主，辅以放疗和化疗等综合治疗方法，但手术治疗对晚期胃癌患者已失去了意义。找到一种能够早期发现胃癌，与胃癌的发现、发展、浸润、预后有关的指标，将为胃癌的治疗提供新的策略。目前研究发现，一些细胞表面分子标志物与恶性肿瘤的发现、发展及预后具有相关性。而CD44是研究比较广泛的肿瘤干细胞因子，它是一种细胞表面跨膜蛋白，主要表达于上皮细胞、淋巴细胞及巨噬细胞，主要作用是通过和透明质酸、纤维粘连蛋白及胶原结合，介导细胞和细胞外基质之间的特异性黏附，参与细胞对透明质酸的摄取及降解，与细胞骨架蛋白结合，参与细胞伪足的形成，从而促进细胞的迁移[1－2]。而ALDH1是乙醛脱氢酶（ALDH）家族成员之一，是催化细胞内乙醛氧化为乙酸的细胞溶质酶，在其与恶性肿瘤关系的研究中，最初发现与环磷酰胺（CTX）类药物耐药有关，这就进一步说明ALDH1阳性细胞能避免化疗药物的作用。进一步研究CD44、ALDH1的表达与胃癌临床特征的相关性，可为未来胃癌的发现、治疗提供新的线索及策略，现介绍如下。

1 病例与试剂

本研究中的48例胃癌患者的肿瘤组织（术前均未行放化疗）、18例慢性萎缩性胃炎II～III级患者的胃黏膜组织及16例正常人的胃黏膜组织均来自定西市第二人民医院病理科及内镜中心，均经病理学研究证实。胃癌患者中男26例，女22例；年龄 23～75岁，平均年龄 57．8岁；胃癌处于I、II级的20例，胃癌处于III、IV级的28例；淋巴结转移的 28例，无淋巴结转移的20例。

本次研究的浓缩性ALDH1兔抗人多克隆抗体购自武汉博士德生物技术有限公司，CD44鼠抗人单克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司，免疫组化染色试剂盒：UltraSensitveTMSP染色试剂盒、DouTMSP双染试剂盒（KIT－9999）均购自福州迈新生物科技有限公司。

2 方法

将不同组织包埋在石蜡块里，每个石蜡块切片4张，用于CD44、ALDH1单染及双染。经过处理的切片置于60℃～70℃烤箱中烘烤6小时，备用。免疫组化染色及免疫组化双重染色步骤均严格按说明书进行。

3 结果判定及统计学分析

免疫组化染色及免疫组化双重染色结果显示：CD44阳性，表达于细胞膜，呈棕黄色；ALDH1阳性，表达于细胞浆，呈棕黄色。阳性细胞计数参照TomomiIshida的计数标准[3]，选择肿瘤组织比较丰富的区域，在物镜下观察10个视野，每个视野计数100个细胞，计算所有阳性细胞数。采用半定量方法进行统计，无阳性细胞数为（－），阳性细胞数＜5%为（+），阳性细胞数5%～25%为（++），阳性细胞数＞25%为（+++），染色结果均由两位医生用双盲法进行评估。

采用SPSS13．0统计软件包进行统计分析，计数资料采用χ2检验。

4 结果

4.1 CD44、ALDH1在不同组织中的表达

在胃癌组织中，CD44阳性，表达于细胞膜，呈棕黄色；CD44在慢性萎缩性胃炎中局灶阳性表达；而在正常胃黏膜中几乎不表达。在胃癌组织中，ALDH1阳性，表达于细胞浆，呈棕黄色颗粒；在慢性萎缩性胃炎II～III级的胃黏膜组织中，ALDH1阳性表达率明显低于胃癌组织；在正常胃黏膜组织中，ALDH1无表达，见表1。

表1 CD44和ALDH1在不同组织中的表达

4.2 CD44和ALDH1的表达与临床特征的关系

在胃癌组织中，CD44、ALDH1的阳性表达与肿瘤分级、有无淋巴结转移相关（P＜0．05）；CD44、ALDH1 的表达与性别、肿瘤大小、年龄无明显相关性（P＞0．05），见表 2。

表2 CD44和ALDH1在胃癌中的表达与临床特征的关系

4.3 CD44+/ALDH1+在胃癌组织中的阳性表达及与临床特征的相关性

在胃癌组织中，CD44+/ALDH1+的阳性表达与有无淋巴结转移、肿瘤分级相关（P＜0．05）；随着肿瘤分级的升高、淋巴结的转移，CD44+/ALDH1+阳性表达的患者人数逐渐增多，见表3。

表3 CD44+/ALDH1+在胃癌中的表达及与临床特征的相关性

5 讨论

胃癌是消化道高发肿瘤，近年来发病年轻化，发病率和死亡率增加，晚期患者人数增加，好多患者错过手术时机。Mayer等[4]发现，正常胃黏膜无CD44阳性表达，慢性炎症有诱导良性胃黏膜表达CD44的作用，而ALDH1是ALDH超家族编码特定生命进程中的关键酶，与多种人类肿瘤的发生、发展有关，最初发现与环磷酰胺（CTX）类药物耐药有关，其表达增高提示对化疗药不敏感、预后差。恶性肿瘤的发生、发展一直是研究的热点，研究CD44、ALDH1这两种蛋白的表达，为胃癌的早期发现、预防及治疗提供线索。本研究结果显示，胃癌组织中CD44、ALDH1阳性表达的人数明显多于慢性萎缩性胃炎、正常胃黏膜组织（P＜0．05），慢性萎缩性胃炎的胃黏膜组织中，CD44、ALDH1阳性表达的人数多于正常胃黏膜组织（P＜0．05），进而说明CD44、ALDH1的阳性表达与胃癌及胃黏膜疾病有相关性。任何肿瘤的发生都是多阶段、多基因参与的过程，前期研究发现，CD44广泛参与胃癌细胞的黏附、归巢、侵袭及转移过程。

Harn等[5]在1996年就发现，在慢性萎缩性胃炎的胃黏膜组织中，CD44阳性表达的人数明显多于正常胃黏膜组织（P＜0．05），并认为它可作为检查胃癌前病变的有用工具。本次研究证实，CD44、ALDH1的表达与胃癌患者的年龄、性别及肿瘤大小无明显相关性（P＞0．05），而与肿瘤分级、有无淋巴结转移有明确相关性（P＜0．05），随着肿瘤分级的升高、淋巴结的转移，CD44、ALDH1阳性表达的人数明显增多，通过进一步的免疫组化双重染色结果显示，CD44+/ALDH1+的表达与肿瘤分级、有无淋巴结转移有相关性（P＜0．05）。Winder等[6]的研究证实，CD44是一种转移相关基因；谢建伟、Hirata、王军等[7－9]通过实验证实，CD44参与胃癌发展和淋巴结转移过程，发现CD44的表达与肿瘤分级、淋巴结转移有密切相关性（P＜0．05）。前期关于结直肠癌组织的研究证实，CD44、ALDH1、CD44+/ALDH1+的表达与结直肠癌的发生、发展及预后有相关性（P＜0．05）[10]，为靶向治疗提供靶点。

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[10]张彩兰，刘斌，杨艳丽，等．癌干细胞CD44+/ALDH+在结直肠癌中的表达及临床病理学意义[J]．世界华人消化杂志，2012（31）：3005－3009．

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1671－1246（2017）24－0150－03