Klotho基因多态性与老年高血压患者靶器官损害的相关性分析

张力辉，李冬梅，邹子扬

Klotho基因多态性与老年高血压患者靶器官损害的相关性分析

张力辉1，李冬梅1，邹子扬2

目的通过分析klotho G395A,F352V,C370S三个位点的等位基因与单核苷酸多态性（SNP）在老年性高血压人群中的分布情况，探究klotho基因对高血压患者造成靶器官损害的相关特性。方法选取2013年1月～2016年1月于河北港口集团有限公司港口医院神经内科老年高血压患者104例，其中男性54例，女性50例，平均年龄（67.32±7.32）岁。按是否合并冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病，CHD）分为两组，即高血压合并CHD组（n=57，男性30例，女性27例）和高血压未合并CHD组（n=47，男性24例，女性23例）。再按是否发生肾损害分为高血压合并肾损害组（n=66，男性35例，女性31例）和高血压未合并肾损害组（n=38，男性19例，女性19例），分别统计各组患者临床资料及klotho的等位基因的分布情况，分析其与心、肾靶器官损害的相关性。结果在合并CHD和未合并CHD两组患者中，合并CHD组患者年龄较高，而性别，糖尿病及血脂等方面，则无显著差异（P＞0.05）；对klotho基因G395A SNP的三个等位基因GG,GA,AA的比较中，合并CHD和未合并CHD两组中患者无显著差异；性别比较显示：男性患者AA基因型在合并CHD组中显著高于未合并CHD组，差异有统计学意义（P＜0.05）。klotho基因F352V SNP中，FV基因型的频率在高血压并发CHD组中较未并发CHD的患者更低，在男性分层中这一差距依然存在，差异有统计学意义（P＜0.05）；klotho基因SNP C370S的各个等位基因CC,CS,SS在两组中均无显著差异，按性别分层后仍无显著差异（P＞0.05）。结论男性高血压患者伴klotho基因G-395A SNP AA等位基因易并发CHD，而携带F352V FV等位基因的男性高血压患者患CHD的概率更低；高血压合并肾损害与klotho基因的相关性不明显。

等位基因；冠心病；klotho基因

高血压是临床常见的老年性疾病，发病率逐年上升，靶器官损害已成为危害患者生命的重要原因[1]。Klotho基因于1997年被发现，其与人类衰老有高度相关性，Klotho缺失小鼠可呈现衰老表现，如动脉硬化，骨质疏松，运动减少，皮肤皱缩等，将该基因导入基因缺失的小鼠体内，小鼠生长发育及外在表现均可出现明显改善[2]。研究发现klotho基因及其表达产物可在体内血管活性物质的协助下达到保护内皮，促进血管新生，预防动脉硬化的目的[3]。klotho基因存在较多位点及等位基因，且该基因在高血压患者的心、肾等靶器官损害中的作用尚不明确。本文选取104例老年性高血压患者，对其心、肾并发症及klotho等位基因分布情况进行分析，现分析如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取河北港口集团有限公司港口医院神经内科于2013年1月～2016年1月收治的老年高血压患者104例。根据是否并发冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病，CHD）分为高血压合并CHD组和高血压未合并CHD组。再根据是否伴肾损害分为高血压合并肾损害组和高血压未合并肾损害组。高血压诊断标准[4]：收缩压≥130 mmHg和（或）舒张压≥张压90 mmHg（1 mmHg=0.133 kpa），除外继发性高血压。

1.2 方法 患者于检测当日空腹抽取静脉血6 ml。2 ml应用EDTA抗凝，行klotho基因多样性检测，其余血样应用Hitachi7600生化分析仪检测。

1.3 观察指标 Klotho SNP信息检测根据文献[5]完成，所需引物及试剂均采购自大连宝生物公司。将采集的klotho等位基因利用pcr技术扩增并进行基因多态性电泳。

1.4 统计学指标 采用SSS 14.0统计学软件对数据进行统计学分析，计量资料用（±s）表示，组间比较采用t检验，计数资料进行 检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 klotho基因电泳图 对klotho F352V基因进行电泳分析，该点位包括FF，FV，VV三组，结果见图1。

图1 F352V基因电泳图

2.2 高血压合并CHD与klotho基因间的相关性分析 高血压合并CHD与未合并CHD组的患者基本资料对比，合并CHD组患者年龄显著高于未合并CHD组，差异有统计学意义（P＜0.05）。其余参数无统计学差异（P＞0.05），见表1。对klotho基因G395A SNP的三个等位基因GG，GA，AA的比较中，两组无显著差异。不同性别比较可知：男性患者AA基因型在合并CHD组中的比例显著高于未合并CHD组，差异有统计学意义（P＜0.05）。klotho基因F352V SNP中，FV基因型的频率在高血压合并CHD组中较未合并CHD的患者更低，在男性分层中这一差距依然存在，且差异有统计学意义（P＜0.05）；klotho基因SNP C370S的各个等位基因CC,CS,SS在两组中均无显著差异，按照性别分层后仍无显著差异（P＞0.05），表2。

表1 高血压合并CHD与未合并CHD两组患者的基本资料对比

表2 高血压合并CHD与未合并CHD两组患者klotho基因的统计

2.3 高血压患者klotho基因与肾损害的相关性

伴肾损害的高血压患者在年龄，血尿素氮（BUN），血肌酐（Cr），血尿酸（UA）及BMI指数方面均较无肾损害的患者有显著差异，其差异有统计学意义（P＜0.05），见表3；而klotho基因全部等位基因在两组患者中的分布均无显著差异，在不同性别分层的患者中亦无显著差异，均无统计学意义（P＞0.05），表4。

表3 高血压并发肾损害与未并发肾损害两组患者的基本资料对比

3 讨论

研究显示，klotho基因的表型与其表达蛋白对血管内皮状态、脂代谢及心血管疾病等密切相关，可以此为突破口进行相关疾病的研究[6]。G395AA基因已被证实与老年性高血压的发生密切相关[7]。本次对klotho等位基因的研究发现，老年男性高血压患者如伴CHD，其G395AAA等位基因的频率显著较无CHD的男性患者更高，在女性分层中则无此现象，提示其对于血压影响受性别因素调控，在男性患者中影响更大。该结果与尤宁等[8]研究结果一致。

关于klotho F352V相关等位基因在高血压患者中的表达，有研究发现VV基因型的人群高血压发生率更高，而FF基因型则抑制可能发生的肾脏损害[9]。肾素-血管紧张素系统失调是高血压形成的原因之一，而血管紧张素Ⅱ的大量输注可显著减弱klotho基因在肾脏中的表达。提示klotho基因的表达对于高血压病程延缓进展，预防肾损伤具有积极意义。

klotho基因对于高血压的调控机理为：klotho基因表达出klotho蛋白，该蛋白含量与体内一氧化氮（NO）含量呈正相关。klotho表达增多可促进NO的大量生成。后者直接调控血管的收缩与舒张。推断klotho基因通过调控NO的水平进而控制高血压进展。上述研究提示，高血压，CHD等疾病与klotho基因3个位点G395A，F352V与C370S的SNP联系紧密。

综上所述，本研究中klotho基因中FV型在高血压患者的CHD控制中起到积极效果，使该基因型患者的CHD发病率降低；而AA基因型的男性患者则有更高可能罹患CHD，因为该基因表达受性别影响较大。蒋宜等[10]报道称，其可能与该基因F352V表达时苯丙氨酸被缬氨酸所替代并引起基因突变有关，仍需进一步研究证实。

表4 高血压合并肾损害与未并发肾损害两组患者的klotho基因统计

[1]李湘民,周巧玲. 缬沙坦对自发性高血压大鼠脑超微结构和Klotho基因表达的影响[J]. 中南大学学报（医学报）,2010,35(3):254-61.

[2]赖家春,柯媛媛,杨希立,等. Klotho与心血管相关性疾病的研究进展[J]. 医学综述,2013,19(6):997-1000.

[3]张欢欢,韩冰,廉银珠,等. 不同水平高血压患者血清Klotho蛋白、NO、ET-1的表达水平及相关性[J]. 中国老年学杂志,2015,35(3):596-9.

[4]李龙,李莉,崔天祥,等. Klotho基因多态性与高血压左室肥厚的关系[J]. 中国老年学杂志,2013,33(11):2501-3.

[5]刘晓林,马厚勋,田小春,等. KL基因单核苷酸多态性及其组合与老年高血压的相关性研究[J]. 重庆医科大学学报,2011,36(4):389-93.

[6]李湘民,周巧玲. 高血压脑损害患者血清KLOTHO蛋白水平测定及相关危险因素分析[J]. 第三军医大学学报,2010,32(8):839-41.

[7]许明昭,李莉,张广东. Klotho基因多态性与高血压及其早期肾损害的关系[J]. 世界最新医学信息文摘,2012,52(9):73-4.

[8]尤宁,刘晓林,田小春,等. Klotho基因3个位点单核苷酸多态性与冠心病相关性研究[J]. 重庆医科大学学报,2012,37(7):575-84.

[9]唐荣,周巧玲,刘志纯,等. 福辛普利、氯沙坦对自发性高血压大鼠Klotho表达及氧化应激的影响[J]. 中南大学学报（医学版）,2011,36(1):27-33.

[10]蒋宜,罗玉梅,邓明洪,等. 老年高血压患者klotho基因多态性与其心肾靶器官损害的相关性[J]. 中国老年学杂志,2015,35(12):3278-81.

Correlation between polymorphism of Klotho gene and target organ injury in elderly patients with hypertension

Zhang Lihui*, Li Dongmei, ZOU Ziyang.
*Department of Neurology, Port Hospital, Hebei Port Group Co, LTD, Qinhuangdao 066000, China.
Corresponding author: Zhang Lihui, E-mail: 13703237177@163.com

ObjectiveTo investigate the correlation between Klotho gene and target organ injury through analyzing the distribution of alleles at 3 locus (G395A, F352V, C370S) of Klotho gene and single nucleotide polymorphism (SNP) in elderly patients with hypertension.MethodsThe patients (n=104, male 54, female 50 and average age=67.32±5.85) were chosen from the Department of Neurology of Port Hospital of Hebei Port Group Co., LTD from Jan. 2013 to Jan. 2016. All patients were divided, according to whether or not with complicated coronary heart disease (CHD), into hypertension+CHD group (n=57, male 30 and female 27) and hypertension without CHD group (n=47, male 24 and female 23). The patients were again divided, according to whether or not with renal damage, into hypertension+renal damage group (n=66, male 35 and female 31) and hypertension without renal damage group (n=38, male 19 and female 19). The clinical materials were collected from all groups. The distribution of alleles of Klotho gene was respectively counted and the correlation between the alleles and target organs (heart and kidney) was analyzed.ResultsThe age was elder in hypertension+CHD group than that in hypertension without CHD group, and sex, diabetes and blood sugar had no significant difference between 2 groups(P＞0.05). The comparison in 3 alleles (GG, GA, AA) of G395A SNP of Klotho gene had no significant difference between 2 groups. The comparison in sex showed that AA genotype in male patients were significantly higher in hypertension+CHD group than that in hypertension without CHD group (P＜0.05). The frequency of FV genotype of F352V SNP of Klotho gene was lower in hypertension+CHD group than that in hypertension without CHD group,and the difference existed in male hierarchy (P＜0.05). The alleles (CC, CS, SS) of SNP C370S of Klotho gene had no significant difference between 2 groups and also in sex hierarchy (P＞0.05).ConclusionMale patients with hypertension carrying AA allele of G-395A SNP of Klotho gene are commonly complicated by CHD, and those carrying FV allele of F352V of Klotho gene have a lower probability of CHD. The correlation between hypertension complicated by kidney damage and Klotho gene is not significant.

Allele; Coronary heart disease; Klotho gene

1066000 秦皇岛,河北港口集团有限公司港口医院神经内科;2063000 唐山,解放军第二五五医院心内科

张力辉,E-mail:13703237177@163.com

10.3969/j.issn.1674-4055.2017.11.26

R541.4

A

1674-4055(2017)11-1381-03

孙竹