国产凝胶渗透色谱在测定猪肉农药残留中的应用

来福*

(1.北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心, 北京 100026;2.上海屹尧仪器科技发展有限公司，上海 201108)

国产凝胶渗透色谱在测定猪肉农药残留中的应用

刘鑫1云环1高峰1刘来福1*齐娜2陈向斌2金晓静2

(1.北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心, 北京 100026;2.上海屹尧仪器科技发展有限公司，上海 201108)

选择乙酸乙酯/环己烷(V/V 1/1)作为提取液，提取液经凝胶渗透色谱(Gel Permeation Chromatography，GPC)后，除去脂类、蛋白质和大部分大分子杂质，样品净化后使用GC/MS进行多种农药残留同时分析。针对猪肉样品进行了添加回收试验，回收率在82.21%-98.09%，0.05 μg/mL～1.0 μg/mL线性相关系数良好，相对标准偏差为3.72%～11.38%。本方法具有操作简便，自动化程度高，净化效果好、精密度好等优点，适用于猪肉中农药残留的日常检测工作。

凝胶渗透色谱 国产仪器 农药 猪肉

1 概述

由于长期大量的使用和滥用，农药已成为食品的重要污染物之一，特别是随着我国人民生活水平的提高，肉、水产品、蛋和乳类等动物源性食品在居民膳食结构中所占的比例越来越大。通过环境接触、食物链富集等进入动物体内的农药残留问题成为了关注的热点。近年来，我国在蔬果、茶叶等植物性食品及水体、土壤等环境中的农残检测上已取得了较大进展。但针对动物源性食品的农残检测，尤其是针对不同类型农药的多残留检测则较少研究，检测技术上的差距还导致我国出口动物源性食品遭遇欧美发达国家的技术性贸易壁垒。因此，提高我国动物源性食品农药多残留的检测水平，显得十分重要和紧迫。

动物源性食品中含有的大量油脂和蛋白质，其极性大小与常用的农药相似。目前常用的净化技术如固相萃取技术，液液萃取技术很难将农药从上述杂质中净化出来。而凝胶渗透色谱是一项成熟的农药残留净化技术，其利用不同体积的分子在凝胶色谱柱保留的时间差异来分离目标物。可以有效的去除油脂、蛋白质等大分子杂质的干扰。本实验利用GPC净化，结合GC-MS进行分析，建立了猪肉中7种农药残留的测定方法。

2 材料与方法

2.1 样品

将猪肉样品用绞肉机搅碎，充分混匀，用四分法缩分至少不少于500g，作为试样，装入清洁容器内，密封后于-18℃冷冻保存。

2.2 仪器与试剂

仪器型号：上海屹尧仪器科技发展有限公司FLEXI 全自动凝胶渗透色谱仪(配有400mm×25mm(内经)，内装BIO-Beads S-X3填料的净化柱)，用于样品中大分子杂质的净化；气相色谱-质谱仪，配有电子轰击离子源(EI)；分析天平，感量为0.0001g；离心机，最大转速为10000 r/min；环己烷：色谱纯；乙酸乙酯：色谱纯；乙酸乙酯+环己烷(1+1，体积比)；乙草胺、五氯硝基苯、地虫硫磷、西玛津、艾试剂、扑草净、毒死蜱单个标准储备液100mg/L；无水硫酸钠：分析纯(用之前在650℃灼烧4h，贮存于干燥器中，冷却后备用)；微孔过滤膜(尼龙)。

2.3 方法建立

准确称取10g试样(精确至0.01g)，放入50mL离心管中，并加10g无水硫酸钠，加25mL乙酸乙酯+环己烷(1+1，体积比)，超声提取15分钟，以3000r/min离心3min，上清液过装有无水硫酸钠的漏斗，收集于旋蒸瓶中，残渣再用35mL乙酸乙酯+环己烷(1+1)提取一次，合并提取液，并将提取液于40℃水浴蒸发浓缩至约5mL，将上述提取液转移至10 mL容量瓶中，用5 mL乙酸乙酯+环己烷(1+1)分两次洗涤梨形瓶，并转移至上述10 mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀。将样液过0.45 μm微孔滤膜滤入10 mL试管，供凝胶渗透色谱仪净化。

凝胶渗透色谱净化条件，见表1、表2。

表1 全自动凝胶净化方法进样程序表

进样流速：5mL/min

表2 全自动凝胶净化方法收集程序表

收集液于40℃水浴旋转蒸发至约5mL，将浓缩液转移至15mL离心管中，氮吹浓缩至近干，加入1 mL的正己烷溶解残渣，混匀，供气相色谱-质谱测定。

气相色谱-质谱条件如下：

色谱柱：DB-5MS 30m × 0.25mm × 0.25μm。柱温(程序升温)：70℃保持3min，15℃每分钟升到180℃，保持2min，10℃每分钟升到280℃，保持10min。

进样口温度：250 ℃。进样口压力：77 kPa。流速：1.0 mL/min。分流比：不分流。进样量：1.0 μL。

2.4 线性关系

5 mg/L混合标准溶液配制如下：

分别从浓度为100mg/L的乙草胺、五氯硝基苯、地虫硫磷、西玛津、艾试剂、扑草净、毒死蜱标准储备液中，各移取0.5mL标准液于10mL容量瓶中，使用正己烷定容至刻度，配制成浓度为5mg/L的10种农药混合标准溶液，避光，0～4℃保存。

基质混合标准工作溶液配制如下：

用空白样品基质溶液配制成浓度分别为0.05、0.1、0.2、0.5、0.8、1.0mg/L的混合标准工作溶液，用于标准工作曲线的绘制，线性方程见表3。

表3 8种农药线性方程

2.5 加标回收率

在猪肉样品中加入0.5 μg的混合标准溶液，重复进样7次，采用基质标准曲线定量，检测数据及RSD见表4。

3 结论

建立了凝胶净化-气相色谱-质谱法检测猪肉中农药残留的方法。该方法具有自动化程度高，萃取效率高、净化效果好、精密度好，分析快速等优点，适用于猪肉中农药残留的日常检测工作。

表4 8种农药测定结果

[1] 高雪，王翠芬，刘萍，刘晓慧，齐雅薇.凝胶渗透色谱-气相色谱法测定猪肉中11种有机磷农药残留[J].食品安全质量检测学报，2014 (6) :1782-1786.

[2]刘润珠，王松，崔鹤，高建国.张靖坤牛肉和猪肉基质中多农药残留GCMS分析方法[J].食品研究与开发，2013，34 (22) :25-28.

[3]国家质量监督检验检疫总局，国家标准化管理委员会.GB/T 19650-2006 动物肌肉中478种农药及相关化学品残留量的测定 气相色谱-质谱法[S]：1-68.

Purificationofpesticideresiduesinporkbydomesticgelpermeationchromatography.

LiuXin1,YunHuan1,GaoFeng1,LiuLaifu1*,QiNa2,ChenXiangbin2,JinXiaojing2

(1.BeijingEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau,Beijing100026,China; 2.PreeKemScientificInstrumentsCo.,Ltd.,Shanghai201108,China)

The seven kinds of pesticide residues in pork were determined by gel permeation chromatography (GPC) combined with gas chromatography hyphened mass (GC-MS). With the extraction solvent of ethyl acetate-cyclohexane (V/V 1/1), the extract was purified by GPC, then lipids, proteins and most of the macromolecular impurities were removed from the sample matrix,followed by GC/MS analysis. The spiked recovery was 82.21%—98.09% with relative standard deviation (RSD) of 3.72%—11.38%. The method ranged from 0.05 μg/mL to 1.0 μg/mL with good linearity. In conclusion, the method was simple and accurate with high automation and extraction efficiency. It was suitable for routine detection of the pesticide residues in pork.

gel permeation chromatography; domestic instrument; pesticide residues; pork

北京市科技计划课题《国产分析仪器验证与综合评价市场化推广研究与实践》(Z161100003016006)资助。

10.3969/j.issn.1001-232x.2017.06.028

2017-10-04

刘鑫，高级工程师，liuxin@bjciq gov cn。