正交试验优化复方胃炎胶囊中药材的水提工艺Δ

郑姣妮，刘玲，何道惠（1.重庆市急救医疗中心/重庆市第四人民医院药剂科，重庆400014；.四川省中医药研究院分析测试中心，成都610041）

正交试验优化复方胃炎胶囊中药材的水提工艺Δ

郑姣妮1＊，刘玲1#，何道惠2（1.重庆市急救医疗中心/重庆市第四人民医院药剂科，重庆400014；2.四川省中医药研究院分析测试中心，成都610041）

目的：优化复方胃炎胶囊中药材的水提工艺。方法：采用正交试验，以干膏中芍药苷含量、丹酚酸B含量与干膏质量的综合评分为评价指标，考察加水量、煎煮时间和煎煮次数对水提工艺的影响，并进行验证试验。结果：优化的水提工艺为煎煮3次、每次120 min、每次加10倍量水；验证试验中综合评分平均值为909.19（RSD＝1.84%，n＝3）。结论：优化的水提工艺稳定、可行，可用于复方胃炎胶囊中各药材的提取。

复方胃炎胶囊；正交试验；提取工艺；芍药苷；丹酚酸B

慢性胃炎是消化系统常见病、多发病[1]，根据病理组织学改变和胃的病变部位，再结合可能病因，一般将胃炎分成非萎缩性（以往称浅表性）、萎缩性和特殊类型3大类[2]。胃炎主要是胃黏膜上皮受到各种致病因子，如药物、微生物、毒素和胆汁反流等的经常、反复侵袭所致，其中幽门螺杆菌（HP）是胃炎的最主要病因，可造成慢性持续性的炎症性病变。各类型胃炎虽然病因不同，但病理过程基本相似[3-4]。

复方胃炎胶囊的处方来源于临床经验方，该方于2011年1月－2011年12月在重庆市急救医疗中心消化内科进行了前期的临床疗效观察。109例胃炎患者给予复方胃炎胶囊处方的汤剂治疗3个月后，92例治愈（治愈率达84.4%），15例好转，2例无明显疗效，总有效率达到98.2%（观察者为重庆市第四人民医院消化科临床医师曾庆贵、临床药师郑姣妮），提示该方对胃炎患者具有治疗作用。复方胃炎胶囊处方由白芍、党参、白术、茯苓、麦冬、丹参、香附、高良姜、甘草9味药材组成，由于组成药味较多，服用量大（每次需服用汤剂250 mL，每天需要服用3次），且患者感觉口感不佳，携带也不方便。

为解决上述不足，本课题组拟将该方制剂由汤剂改成胶囊。为制订科学、合理的药材提取工艺，笔者根据处方中各药材的药理作用及有效成分的理化性质，结合中医配伍原则及临床用药特点，以方中君药白芍、丹参的有效成分芍药苷和丹酚酸B[5]含量及干膏质量为评价指标，设计正交试验优化复方胃炎胶囊的水提工艺。

1 材料

1.1 仪器

1200高效液相色谱（HPLC）仪（美国Agilent公司）；AUW220D电子分析天平（日本岛津仪器制造所）；RE52CS旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；DA-2A真空干燥箱（天津泰斯特仪器有限公司）；HH-4数显恒温水浴锅（金坛市双洁实验仪器厂）。

1.2 药材、对照品与试剂

白芍、党参、白术、茯苓、麦冬、丹参、香附、高良姜、甘草（批号分别为：20130309、2013031、20130308、20130401、20130313、20130420、20130218、20130319、20130311）等9味药材饮片均购自四川省中药饮片公司，经四川省中医药研究院分析测试中心研究员何道惠鉴定为真品；芍药苷对照品（批号：110736-201136）、丹酚酸B对照品（批号：110719-201133）均来源于中国食品药品检定研究院，纯度均不低于98%；乙腈、磷酸为色谱纯，水为蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 干膏中芍药苷、丹酚酸B含量的测定

2.1.1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱：Phenomenex C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸盐缓冲溶液，梯度洗脱；检测波长：230 nm（芍药苷）、286 nm（丹酚酸B）[6-9]；检测温度：室温；进样量：10 μL。梯度洗脱程序见表1。

表1 梯度洗脱程序Tab1 Gradient elution procedure

在上述色谱条件下，取“2.1.2”项下混合对照品溶液、供试品溶液（正交试验9号样品）和阴性对照溶液进样分析。结果丹酚酸B和芍药苷之间以及二者与相邻峰之间的分离度均大于1.5。在阴性对照溶液的色谱图中，在丹酚酸B和芍药苷相对应的位置上未见相应的色谱峰。色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图Fig1 HPLC chromatograms

2.1.2 溶液的制备（1）混合对照品溶液：取芍药苷、丹酚酸B对照品适量，精密称定，加水制备成质量浓度分别为50、55 μg/mL的溶液，即得[7-9]。（2）供试品溶液：取“2.2.1”项下水提干膏5 g，精密称定，置于50 mL量瓶中，加水35 mL，超声处理（功率：240 W，频率：45 kHz）15 min[10]，放冷，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。（3）缺丹参或白芍的阴性对照溶液：按处方量称取除丹参或白芍之外的其他药材进行提取，按“（2）”项下方法制备，即得。

2.1.3 检测限与定量限按信噪比为3计算，本法测得芍药苷、丹酚酸B的检测限分别为0.3、0.4µg/mL；按信噪比为10计算，本法测得芍药苷、丹酚酸B的定量限分别为1.0、1.2µg/mL。

2.1.4 标准曲线的制备精密吸取混合对照品溶液各1、3、5、7、10、15、20 μL进样分析，测定峰面积。以对照品质量浓度为横坐标（x）、峰面积为纵坐标（y）进行线性回归，得芍药苷、丹酚酸B的回归方程分别为：y＝1 415.5x－0.16（r＝0.999 0）、y＝1 215.2x+1.06（r＝0.998 0）。结果表明，芍药苷、丹酚酸B检测质量浓度线性范围分别为4.01～81.03、5.14～102.76µg/mL。

2.1.5 精密度试验精密吸取混合对照溶液适量，重复进样测定5次。结果，芍药苷、丹酚酸B峰面积的RSD分别为1.31%、1.23%（n＝5），表明仪器精密度良好。

2.1.6 稳定性试验取供试品溶液适量，分别于制备后0、2、4、6、8、24 h时进样测定。结果，芍药苷、丹酚酸B峰面积的RSD分别为1.33%、1.21%（n＝6），表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.1.7 重复性试验取同一批干膏（正交试验9号样品）适量，按“2.1.2”项下方法制备成6份供试品溶液，进样测定。结果，芍药苷、丹酚酸B含量的RSD分别为1.00%、1.05%（n＝6），表明方法重复性好。

2.1.8 准确度试验精密称取已知芍药苷（4.78 mg/g）、丹酚酸B（6.21 mg/g）含量的干膏样品5 g，共9份，精密加入相当于样品中各成分质量分数为80%、100%、120%的芍药苷、丹酚酸B对照品，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，进样测定，计算芍药苷、丹酚酸B含量及加样回收率。结果，丹酚酸B、芍药苷的平均加样回收率分别为99.78%、99.91%，RSD分别为1.28%、0.51%（n＝9），表明方法准确度较好。

2.2 正交试验优化水提工艺

2.2.1 因素、水平与指标的确定根据前期试验结果，选择煎煮次数（A）、煎煮时间（B）、加水倍数（C）为试验因素[10-11]，每个因素选取3个水平；以干膏中芍药苷含量、丹酚酸B含量、干膏质量的综合评分为指标，设计L9（34）正交试验筛选水提工艺条件[12-14]。中药有效成分是中药复方发挥治疗作用的物质基础，而干膏质量可影响制剂的稳定性[15]。故将干膏中芍药苷含量、丹酚酸B含量的权重系数各设为0.4，干膏质量权重系数设为0.2，计算综合评分[芍药苷含量（mg）×40%+丹酚酸B含量（mg）×40%+干膏质量×20%，其中各成分的含量指53 g生药提取后所得干膏中各成分的含量]，因素与水平见表2。

表2 因素与水平Tab2 Factors and levels

2.2.2 试验设计与结果按处方比例称取药材53 g，按表2各水平进行煎煮试验，得滤液，滤液浓缩蒸干，70℃减压干燥，称质量，得干膏质量；按“2.1”项下方法测定干膏中芍药苷、丹酚酸B的含量，计算综合评分。试验设计与结果见表3，方差分析结果见表4。

表3 试验设计与结果Tab3 Test design and results

表4 方差分析结果Tab4 Results of variance analysis

由表3、表4可知，各因素对提取效果的影响大小顺序为A＞B＞C，煎煮次数有显著影响。从生产实际及节约成本等出发，确定最优工艺为A3B2C2，即最优方案为煎煮3次、每次120 min、每次加水10倍。

2.3 工艺验证试验

按处方比例称取各药材共530 g，平行3份，按上述优化条件煎煮提取，滤过，合并滤液，浓缩蒸干，称量；测定芍药苷含量、丹酚酸B含量和干膏质量，并计算综合评分。结果，综合评分均值为909.19（RSD＝1.84%），表明优化的工艺稳定、可行。验证试验结果见表5。

表5 验证试验结果Tab5 Results of verification test

3 讨论

本处方中白芍和丹参为君药。白芍有效成分主要有芍药苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷等，2015年版《中国药典》（一部）将芍药苷作为白芍质量控制指标。芍药苷属于单萜苷类，溶于水，具有抗炎、免疫调节、抗病毒等作用[14]。丹参中有效成分主要有酚酸类和脂溶性二萜类，其中酚酸类主要包括丹酚酸A、B和丹参素，均为水溶性，其中丹酚酸B含量高且检测方法较成熟[15-16]，具有抗炎、抗氧化、抗癌等作用[17]。芍药苷和丹酚酸B两者都有抗炎作用，因此本研究以芍药苷和丹酚酸B的含量为主要评价指标。

将本方开发成胶囊剂时，还需进一步对提取后的干膏进行纯化处理，尤其是水溶性成分提取得到的干膏量较大，故应进一步采用醇沉处理等方法以去除水不溶性杂质。另外，本研究在实验室中完成，还需进行中试和大生产验证，并依据生产实际条件进一步优化研究，以满足生产要求。

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Optimization of Water Extraction Technology for the Medicinal Materials in Compound Gastritis Capsule by Orthogonal Test

ZHENG Jiaoni1，LIU Ling1，HE Daohui2（1.Dept.of Pharmacy，Chongqing Emergency Medical Center/the Forth People’s Hospital of Chongqing，Chongqing 400014，China；2.Analysis and Test Center，Sichuan Research Institute for TCM，Chengdu 610041，China）

OBJECTIVE：To optimize the water extraction technology for the medicinal materials in Compound gastritis capsule.METHODS：Orthogonal test was adopted.Using the comprehensive score of contents of paeoniflorin，salvianolic acid B and weight of dry extract as evaluation index，effects of adding water amount，decoction time and times on water extraction technology were investigated，and verification test was conducted.RESULTS：Optimized water extraction technology was as follows as decocting for 3 times，120 min each time and adding 10-fold water each time.In verification test，average comprehensive score was 909.19（RSD＝1.84%，n＝3）.CONCLUSIONS：Optimized water extraction technology is stable and feasible，and can be used for the water extraction for each medicinal material in Compound gastritis capsule.

Compound gastritis capsule；Orthogonal test；Extraction technology；Paeoniflorin；Salvianolic acid B

R284.2

A

1001-0408（2017）31-4438-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2017.31.30

重庆市卫生局中医药科研计划项目（No.2012-2-31）

＊主管药师。研究方向：药物治疗学、新药研发。电话：023-63692203。E-mail：zhengjiaoni123@163.com

#通信作者：主任药师。研究方向：医院药学、新药研发。电话：023-63692203。E-mail：nini842@163.com

2017-03-27

2017-07-31）

（编辑：刘萍）