舒木消郁汤对慢性肝损伤合抑郁大鼠下丘脑神经递质的影响*

郭英君，王海燕，郭 英，王 伟，魏海梁，李京涛，常占杰

1.宁夏回族自治区人民医院 (银川 750001)，2.陕西中医药大学附属医院 (咸阳712000)

舒木消郁汤对慢性肝损伤合抑郁大鼠下丘脑神经递质的影响*

郭英君1，王海燕1，郭 英1，王 伟1，魏海梁2△，李京涛2，常占杰2

1.宁夏回族自治区人民医院 (银川 750001)，2.陕西中医药大学附属医院 (咸阳712000)

目的： 研究舒木消郁汤对慢性肝损伤合并抑郁大鼠下丘脑神经递质的影响。方法：将SPF级大鼠随机分为空白组、模型组、中药1、2、3组、对照组，每组12只， CCL4腹腔注射和慢性温和不可预见性刺激造模，中药1、2、3组分别给予舒木消郁汤浓度为0.5 g/ml、1.0 g/ml、2.0 g/ml药液灌胃，对照组给予盐酸氟西汀灌胃，观察大鼠体重变化和刺激前后行为学和糖水消耗量、检测肝功能和神经递质去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、五羟色胺(5-HT)水平。结果： 舒木消郁汤可明显的增加慢性肝损伤合并抑郁大鼠的行为学指标水平和垂直运动、理毛次数和糖水消耗总量，减少中央区停留时间，降低ALT和AST、增加NE、DA、5-HT的表达。结论： 舒木消郁汤对缓解慢性肝损伤合并抑郁的治疗具有显著效果。

慢性肝炎患者常合并抑郁障碍，主要表现为心情低沉、对事物兴趣降低、自我怀疑和否定、焦虑、记忆力和认知能力下降，甚者有自杀倾向等。长期抑郁状态可影响患者免疫功能、激素和解毒代谢水平等，加重肝损伤[1-2]。我们长期以舒木消郁汤治疗慢性肝病伴有抑郁障碍的患者，疗效较好。本研究旨在探讨舒木消郁汤对慢性肝损伤合并抑郁大鼠模型下丘脑神经递质去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、五羟色胺(5-HT)的干预效果，结果如下。

材料和方法

1 药品制备与主要试剂 舒木消郁汤(黄芪、当归、柴胡、香附)，均由宁夏自治区人民医院药剂科统一购买和制备冻干粉，每克含生药5 g，密封保存于4 ℃冰箱，使用时100 ℃水溶解，配制0.5 g/ml、1.0 g/ml、2.0 g/ml低、中、高剂量溶液。盐酸氟西汀胶囊(批号：H20093454，江苏俞氏药业有限公司)，5-HT、DA和NE试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司。

2 模型制备 慢性肝损伤合并抑郁障碍大鼠模型：SPF级雄性大鼠，体重(180～200)g，常规饲养3 d进入实验，以40%浓度CCl4腹腔注射(1 ml/kg，2次/周)，连续进行12周；在第13 周将大鼠孤养，自由进饮食，予规律光照/黑暗时间，分别为12 h(光照为8∶00～20∶00)、背景噪音 (40± 10) db、温度(20 ± 3) ℃条件下饲养1周；第14周开始，连续28 d给予随机刺激，冰水( 4 ℃，5 min ) 、热水( 45 ℃，5 min) 、足底电击(电流10 mA，1次/min, 每次持续10 s，共30 次)、摇晃(1 次/s，15 min) 、夹尾1 min、禁食48 h 和昼夜颠倒，为避免产生适应性，每日刺激种类不同。

3 分组及给药方法 将72只SPF级大鼠分为六组：空白组，模型组，中药1、2、3组(舒木消郁汤低、中、高剂量组)，对照组，每组为12只。实验周期为18周。空白组：于实验第5 周以生理盐水灌胃(10 ml/kg，1次/d)；模型组：以40%浓度CCl4腹腔注射(1 ml/kg，2次/周)，连续12周；第 14 周开始随机给予不同刺激；中药组：各组肝损伤模型及随机应激及操作同模型组，中药1、2和3组分别给予0.5 g/ml、1.0 g/ml、2.0 g/ml浓度的舒木消郁汤灌胃(1次/d)直到实验结束；对照组：以盐酸氟西汀药液1.8 mg /(kg·d)灌胃。

4 观察项目

4.1体重监测:分别在4个时间点称量并记录大鼠实验开始前、刺激前1 d、刺激后14 d、28 d体重变化。

4.2敞箱实验和糖水消耗实验:以长、宽、高分别为100 cm、100 cm、50 cm木质敞箱，将其划分为100个格子(10 cm×10 cm)，中央上方安置摄像头，木箱里层刷黑。实验时，将大鼠放置箱子中央格，记录3 min内停留时间，水平运动(穿越格数)、垂直运动(双前肢离地次数)、理毛次数。打扫后再进行下次实验；实验后给予1% 蔗糖水、纯水各150 ml，观察并记录24 h饮用量。

4.3肝功能及下丘脑神经递质检测:10%水合氯醛(0.3 ml/100g)腹腔注射麻醉，心脏取血，全自动生化仪检测血清ALT、AST水平；大鼠断头并于冰上快速分离下丘脑，ELISA法检测下丘脑组织中5-HT、DA和NE的水平，严格按照说明书进行操作。

5 统计学方法 采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析。计量资料采用均数±标准差表示；组间比较采用单因素方差分析；计数资料采用2检验，P<0.05表示差异具有统计学意义。

结 果

1 大鼠体重和行为学改变 大鼠的体重变化：与空白组比较，模型组、中药1、2组体重增加幅度慢(P<0.05)，而中药3组和对照组差异不明显(P>0.05)；与模型组比较，中药3组和对照组体重增长明显(P<0.05)；大鼠行为学、糖水消耗量：与空白组比较，模型组在刺激后7 d、14 d、28 d中央格停留时间增加，水平、垂直运动，理毛次数、糖水消耗量均明显减低(P<0.05)；与模型组比较，中药2组大鼠水平和垂直运动、理毛次数增加，中央区停留时间减少，糖水消耗量增加(P<0.05)，中药3组在刺激7 d、14 d、28 d后各项监测指标改善更明显(P<0.01)；与中药3组比较，对照组在刺激7 d、14 d、28 d后行为学各项指标及糖水消耗总量均有所改善且存在显著统计学意义(P<0.05)。

2 肝功能 见表1，与模型组比较，中药各组和对照组ALT和AST水平不同程度下降，且中药各组随着药物浓度的增加ALT、AST含量下降作用更明显(P<0.05，P<0.01)；与对照组比较，中药3组ALT和AST差异不显著(P>0.05)。

表1 舒木消郁汤药对大鼠肝功能的影响(U/L)

注：与空白组比较，▲P<0.05，＊P<0.01；与模型组比较，P<0.05，P<0.01；与对照组比较，#P<0.05，▼P<0.01

3 下丘脑神经递质 见表2，与模型组比较，中药2、3组和对照组的5-HT水平有显著差异(P<0.01)；中药3组和对照组的DA和NE水平有显著差异(P<0.01)；与对照组比较，中药3组的5-HT和DA水平差异不明显(P>0.05)。

表2 舒木消郁汤药对大鼠5-HT、DA和NE水平的影响

注：与空白组比较，▲P<0.05，＊P<0.01；与模型组比较，P<0.01；与对照组比较，#P<0.05，▼P<0.01

讨 论

抑郁障碍是指患者心境持续处于低落状态，并且多伴有睡眠障碍、身体不适、记忆减退、焦虑等症状，该病常常呈现隐性发病，不易被识别和发觉[3]。慢性肝炎患者，常因其病程长、治愈难、花费高、病情进展易形成肝硬化或肝癌的风险，故大多患者均存在多种包括抑郁、焦虑等复杂心理状态，且有时可相伴发生，但其以抑郁障碍表现最为突出[4]。

抑郁障碍可归属于中医“郁证”范畴。《灵枢·本神》有“肝藏血，血舍魂”、“随神往来者谓之魂”之说；意指人体气血充盈，肝脏血液储存功能正常，人体的精神活动就有了充足的物质保障，则神魂有所主，精神乃佳。因此，我们自拟舒木消郁汤治疗慢性肝炎合并抑郁患者取得了较好疗效，其中柴胡为疏肝解郁之要药，当归以补血虚之本，可充养肝血，为肝所用；黄芪补脾胃之气而不滞气，后天得养，气血得充，气机升降自如，故而气调血充，郁证得解[5]；有报道[6]黄芪制剂还具有抗肝纤维化的作用；柴胡、黄芪、香附三者配合共奏调理肝气，黄芪和当归则可养血活血，从而四味药相互配伍养血疏肝，使郁证得解。

现代研究发现抑郁障碍的发生主要归因于神经递质的水平的变化，其认为5-HT、DA、NE含量的减低或者功能的不足是导致抑郁障碍发生的直接原因。本实验所采用的不可预知刺激制造抑郁模型，广泛地应用于抑郁症治疗的研究，能够更好的模拟临床抑郁症的发生[7-8]；大鼠行为学评价和糖水偏好实验显示，模型组大鼠在给予刺激后，其水平和垂直运动、理毛次数和糖水消耗量均明显减少，而在中央格停留的时间变长，大鼠的肝功能下降、神经递质5-HT、DA、NE量逐渐减少；当给予舒木消郁汤后大鼠的抑郁样行为、肝功能、神经递质的水平均明显好转，较氟西汀效果相当，且表现出一定的浓度依赖性。综上所述，舒木消郁汤对于慢性肝损伤伴抑郁患者具有一定的缓解或者逆转作用。

[1] 许 萌. 住院乙型肝炎肝硬化患者发生抑郁的危险因素及心理护理干预的效果研究[J]. 中华全科医学, 2017, 15(4):715-717.

[2] 刘宝咸, 张燕萍, 李宏燕,等. 干扰素治疗慢性丙型肝炎患者致抑郁障碍的特点及干预[J]. 陕西医学杂志, 2014，43(10)：1396-1398.

[3] 宋 潇, 谷陟欣, 李 伟,等. 中成药治疗抑郁的现代研究近况[J]. 云南中医中药杂志, 2016, 37(4):63-65.

[4] 李京涛, 郭 师, 席 奇,等. 益脾养肝方联合肝动脉化疗栓塞术治疗原发性肝癌的疗效观察[J]. 陕西中医, 2015，36(8):944-945.

[5] 黄世敬, 张永超, 张 颖. 黄芪治疗抑郁症应用与研究[J]. 世界中医药, 2014，(5): 665-668.

[6] 郭丽英. 柔肝化纤方联合马洛替酯对慢性乙肝纤维化患者的治疗效果分析[J]. 陕西中医, 2015，36(10):1340-1341.

[7] 傅锦华, 刘 勇. 舒肝解郁胶囊对抑郁模型大鼠脑内5-HT、DA及其代谢产物水平的影响[J]. 湖南中医药大学学报, 2016, 36(6):47-51.

[8] 刘 硕, 张趁丽, 林方瑜,等. 疏肝解郁植物提取物抗抑郁作用的实验研究[J]. 中国中医药科技, 2016, 23(4):410-412.

*陕西省教育厅课题(2013JK0837) 咸阳市科技局课题 (2015K04-16)

△通讯作者

抑郁症/中医药疗法 肝疾病 @舒木消郁汤 动物实验 大鼠

R749.41

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2017.11.060

(收稿：2017-16-11)