RGS16蛋白在口腔鳞状细胞癌中表达意义的初探

宁毅 翟利琴 孙睿

1. 030012 太原, 山西医科大学口腔医学系； 2. 山西省人民医院病理科, 3. 口腔颌面外科

短篇报告

RGS16蛋白在口腔鳞状细胞癌中表达意义的初探

宁毅1翟利琴2孙睿3

1. 030012 太原, 山西医科大学口腔医学系； 2. 山西省人民医院病理科, 3. 口腔颌面外科

采用免疫组织化学染色法检测RGS16蛋白在84 例口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者癌组织中的表达情况，分析其与口腔鳞状细胞癌临床病理特征之间的关系。结果表明：78 例RGS16蛋白表达阳性，其表达强度与口腔鳞状细胞癌的临床分期有关(P<0.05)，与患者的年龄、性别、淋巴结转移以及分化程度无明显相关性(P>0.05)。

RGS16蛋白； 口腔鳞状细胞癌； 免疫组织化学染色

口腔鳞状细胞癌(OSCC)是头颈部恶性肿瘤中比较常见的恶性肿瘤之一。全世界每年约有50 万的新发病例，并且其发病率呈现逐年升高的趋势。而OSCC的发病是一个多因素、复杂的过程，包括：不良牙体刺激等物理因素，酒精、吸烟等化学刺激[1]，信号传导通路的激活，最终导致细胞增殖和存活机制的失调等。近年来，随着肿瘤细胞分子生物学研究的不断进展，人们在寻找更有效的评估口腔鳞癌指标，指导临床诊治。

G蛋白信号通路调节蛋白(regulator of G protein signaling,RGS)是一类负性调节G蛋白信号传导通路的蛋白分子，其基因家族包括30 多种同源蛋白。RGS16蛋白是RGS家族成员之一，最初发现是在人类T淋巴细胞内作为白介素-2激活的基因[2]。研究发现，该基因异常的表达与神经胶质瘤、乳腺癌和膀胱癌的发病过程有关系。但RGS16蛋白表达在OSCC中研究极少，因此，本实验将采用免疫组织化学染色的方法检测RGS16蛋白在OSCC中的表达情况，并探讨RGS16蛋白与OSCC临床病理特征之间的关系。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集2012～2015 年山西医科大学附属人民医院84 例病理诊断为口腔鳞状细胞癌的标本，年龄32～83 岁。标本于4%甲醛液中固定，石蜡包埋。对肿瘤标本的使用研究获得山西医科大学附属人民医院伦理委员会的批准和患者的知情同意。

1.2 主要试剂

鼠源单克隆抗体RGS16蛋白、Anti-RGS16 antibody(4E5)(ab119424,Abcam公司)。鼠超敏二步法免疫组化检测试剂(二抗)(北京中杉金桥生物有限公司)。

1.3 实验方法

1.3.1 免疫组化染色 石蜡标本切片(厚度4 μm)， 70 ℃烤片2 h；脱蜡、梯度乙醇水化；高压加热法修复抗原；孵一抗 RGS16蛋白(稀释度1∶150)，4 ℃过夜。孵二抗水浴箱37 ℃，20 min。PBS洗去后DAB显色约1 min，苏木素复染约30 s，无水乙醇脱水，封片。以PBS 代替一抗作为阴性对照。

1.3.2 免疫组化结果分析 由2 名病理科医师在双盲情况下对每张切片进行染色评价。按着色强度评分：无着色为0 分，轻度着色(浅黄色)为1 分，中度着色(棕黄色)为2 分，强染色(棕褐色)为3 分。按着色密度评分：阳性细胞百分率：≤5%为0 分，6%～25%为1 分，26%～50%为2 分，≥51%为3 分。将2 项相乘得到总评分：0～1 分为阴性(-)，2～3 分为弱阳性(+)，4～6 分为中等阳性(++)，6 分以上为强阳性(+++)。

1.4 统计学处理

采用SPSS 16.0 统计软件分析，运用Spearman秩相关或χ2检验(Fisher确切概率法)，P<0.05 认为差异有统计学意义。

2 结 果

染色结果显示：RGS16蛋白阳性表达于78 例OSCC中, 主要定位于细胞质(图 1)。统计结果显示：RGS16蛋白的表达与OSCC的临床分期有关，与患者的年龄、性别、淋巴结转移以及分化程度无明显相关性(表 1)。

表 1 RGS16蛋白的表达与临床病理特征的关系

注： ① RGS16蛋白在晚期OSCC的表达高于早期的口腔鳞状细胞癌,P<0.05

图 1 RGS16在OSCC中的表达(×400)

3 讨 论

RGS蛋白是一种鸟苷酸酶激活蛋白，迄今已发现30 余种6 个亚家族，能负性调控G蛋白信号转导，如：细胞分化、细胞增殖和胚胎发育等。在RGS 蛋白6 个亚家族中，RGS16蛋白是B/R4 亚家族成员，分子大小为202 个多肽链氨基酸残基数，在RSG 蛋白质家族中是分子较小和简单的一个成员。1998 年Snow等[3]在发现RGS16蛋白在人视网膜高表达后, 陆续有报道表明它在人脑、心脏、大肠、胎盘、睾丸等组织中表达。通过研究，RGS16蛋白的作用也是多方面的,如参与了炎症过敏反应和淋巴细胞的激活[4], 抑制了胰腺癌细胞的转移和入侵[5], p38通路活化和巨核细胞中趋化因子受体4的负向调节[6]等。对RGS16蛋白结构分析发现，基因突变将会影响最终的基因产物，其含量的变化与疾病的发生发展密切相关，如：RGS16蛋白转录上调可以抑制肿瘤细胞的增殖和细胞外信号调节激酶的磷酸化作用[7]，对有丝分裂的信号产生负性调节反应；RGS16蛋白的下调或丢失将会造成部分启动子的甲基化、染色体的断裂[8]、乳腺癌细胞的增殖扩散和蛋白激酶的磷酸化[9]。本次研究主要运用免疫组化染色分析RGS16蛋白在OSCC中的表达，结果表明: RGS16蛋白的表达与OSCC的临床分期有相关性。在临床分期越晚，RGS16蛋白表达越强。

综上所述，RGS16蛋白作为G 蛋白信号调节家族成员，可能参与了OSCC的发生发展过程，并对OSCC患者预后产生一定的影响，但从石蜡切片可以看出RGS16蛋白在癌旁正常口腔黏膜上皮组织中同样表达，只是表达强弱有差异，所以RGS16蛋白不能作为一种特异性诊断指标，而RGS16蛋白在OSCC进程中发挥的具体作用还不明确，有待进一步的研究来阐明。

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SignificanceofRGS16proteinexpressioninoralsquamouscellcarcinoma

NINGYi1,ZHAILiqin2,SUNRui3.

1. 030012Taiyuan,Collegeofstomatology,ShanxiMedicalUniversity,China; 2.DepartmenofPathology, 3.DepartmentofOralandMaxillofacialSurgery,ShanxiProvincialPeople'sHospital,Taiyuan

RGS16 protein expression in 84 cases of oral squamous cell carcinoma(OSCC) was examined by immunohistochemical staining method. RGS16 protein expression was positive in 78 out of the 84 cases. The expression was associated with the clinical stage of OSCC(P<0.05), but not with patient's age, gender, degree of differentiation and lymph node metastasis(P>0.05).

RGS16protein；Oralsquamouscellcarcinoma；Immunohistochemicalstaining

山西省自然科学基金(编号： 2011011037)

(收稿： 2017-01-18 修回： 2017-03-08)