UPLC-MS/MS 同时测定5种南药中药材中10种农药残留

郑培，王儒，周敏

(海南省食品药品检验所海口分所，海南 海口 570311)

UPLC-MS/MS 同时测定5种南药中药材中10种农药残留

郑培，王儒，周敏

(海南省食品药品检验所海口分所，海南 海口 570311)

目的建立同时测定广藿香、益智、巴戟天、肉豆蔻、丁香等5种南药中常见的10种农药残留的方法。方法采用安捷伦1290-6460超高效液相色谱质谱联用仪(UPLC-MS/MS)。色谱柱：安捷伦ZORBAX Eclipse Plus C18(2.1 mm×150 mm，1.8 μm)，柱温40℃，梯度洗脱，流速0.4 mL/min；采用电喷雾离子源(AJS ESI)，多反应离子监测(MRM)扫描方式。结果10种农药检测质量浓度线性范围为0.5～100 μg/kg(r＞0.998 6)，各被测物质的方法定量限(LOQ)为0.005～0.1 μg/kg，加样回收率范围为72.8%～108.8%。结论所建立的方法简单、快速、准确度及灵敏度高、专属性好，可用于5种南药中药材中常见的10种农药残留的测定。

超高效液相色谱-串联质谱；农药残留；广藿香；益智；巴戟天；肉豆蔻；丁香

广藿香、益智、巴戟天、肉豆蔻、丁香是主产于海南的5种重要中药材，但是由于在种植、生产过程中缺乏严密的质量控制标准和科学的检测手段，农残的污染已成为制约其走向国际草药市场的主要障碍[1-3]。目前超液相色谱-串联质谱(LC-MC/MS)联用技术已成为农药残留检测的主要检测技术，在食品、环境等领域的农药残留分析中已得到广泛应用，然而对中药材尤其是南药中农药残留的分析报道却相对较少。本研究采用UPLC-MS/MS色谱质谱联用技术，对5种南药中常见的10种农药残留进行了检测，旨在建立一种快速、有效的检测方法，以便对其种植、生产和流通中的质量进行控制，促进产业发展，保障公众用药安全[4-7]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器设备 安捷伦1290-6460超高效液相色谱质谱联用仪(UPLC-MS/MS)，安捷伦MassHunter工作站。PL-1001L型电子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司)，3-18K型高速离心机(德国西格玛公司，最高转速18 000 r/min，离心半径8.30 cm)，KQ-600TDE型超声波清洗机(超声频率80 KHz，超声功率700 W)，IKA T25 型均质器(速度范围[1/min]：6 500-24 000)，R-300型旋转蒸发仪(瑞士BUCHI公司)，MV5型全自动平行氮吹浓缩仪(美国LabTech公司)。

1.1.2 标准品、试剂与材料 (1)标准品：治螟磷(批号 201612)、乐果(批号 201612)、马拉硫磷(批号201612)、三唑磷(批号201612)、啶虫脒(批号201612)，均购自农业部环境保护科研检测所。三唑酮(批号201612)、辛硫磷(批号201612)、吡虫啉(批号201612)均购自农业部环境质量监督检验测试中心。灭多威(批号160551)、克百威(批号160929)购自北京坛墨质检科技有限公司。(2)试剂：甲醇、乙腈、甲苯、环己烷、异辛烷、(均为色谱纯，购自德国Merck公司)、氯化钠(分析纯)、无水硫酸钠(650℃灼烧4 h，贮于干燥器中，冷却后备用)，超纯水。(3)材料：Cleanert TPH固相萃取柱：10 mL 2.0 g。

1.1.3 样品 广藿香、益智、巴戟天、肉豆蔻、丁香样品均购自海南寿南山参业有限公司。

1.2 方法

1.2.1 液相色谱条件 色谱柱：安捷伦ZORBAX Eclipse Plus C18(2.1 mm×150 mm，1.8 μm)；进样量：4 μL；柱温：柱温40℃；流速：0.4 mL/min；流动相：A：0.1%甲酸+5 mM甲酸铵水溶液；B：0.1%甲酸+5 mM甲酸铵水甲醇溶液，梯度洗脱程序(见表1)。

表1 梯度洗脱程序

1.2.2 质谱条件 安捷伦1290-6460超高效液相色谱-质谱联用仪(UPLC-MS/MS)，电喷雾离子化方式(AJS ESI)，多反应监测离子扫描模式(动态MRM)，Agilent Mass Hunter软件用于定性和定量分析。干燥气和雾化器均为氮气，干燥气温度300℃，干燥气流量9 L/min，雾化器压力35 psi，鞘流气温度350℃，鞘流气流量12 L/min，毛细管电压4 000 V(+)，3 500 V(-)，喷嘴电压 0 V。MRM 参数见表 2，TIC及MRM色谱图见图1和图2。

表2 10种被测物质的MRM质谱分析参数

图1 MRM色谱图

图2 TIC色谱图

1.2.3 溶液的制备

1.2.3.1 混合标准品溶液的制备 取治螟磷、乐果、马拉硫磷、三唑酮、三唑磷、灭多威、克百威、啶虫脒、辛硫磷、吡虫啉标准品适量，用甲醇配成浓度均为1.0 μg/mL的混合对照品溶液，-20℃保存，备用。

1.2.3.2 供试品溶液的制备 (1)提取：分别称取广藿香、益智、巴戟天、肉豆蔻、丁香试样2g(精确至0.01 g)于50 mL离心管中，加入15 mL乙腈，15 000 r/min匀浆提取1 min，加入2 g氯化钠，再匀浆提取1 min，1 0 000 r/min离心5 min，取全部上清液于150 mL鸡心瓶中，在离心管中再加入15 mL乙腈，重复匀浆提取1 min，10 000 r/min离心5 min，取全部上清液与之前的提取液合并，于40℃水浴旋转蒸发至2 mL。(2)净化：将溶液转移至Cleanert TPH固相萃取柱(柱上加入约2 cm高无水硫酸钠，先用10 mL乙腈-甲苯(3+1)溶液预洗柱)，容器用2 mL乙腈-甲苯溶液(3+1)洗涤2次，合并洗液置于Cleanert TPH固相萃取柱上，用25 mL乙腈-甲苯溶液(3+1)洗脱并用鸡心瓶接收洗脱液，洗脱液于40℃水浴中旋转浓缩至2 mL，将浓缩液置于全自动平行氮吹浓缩仪上吹干，加入1 mL的乙腈-水溶液，混匀，0.2µm滤膜过滤。

2 结 果

2.1 线性关系与定量限 精密量取1.2.3项下的混合标准品溶液适量，逐倍稀释，依次得到0.5 ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/mL等6个系列浓度的混合对照溶液，按2.1项下的条件测定，得到各被测物质的线性范围及回归方程相关系数，同时将0.5 ng/mL的混合标准品溶液不断稀释后测定，以信噪比为10确定各被测物质的定量限(LOQ)，见表3。结果表明，10种被测物质的线性范围为0.5～100 ng/mL，相关系数r值为0.998 6～0.999 9，定量限为 0.005～0.1 μg/mL，各成分在线性范围内均具有良好的线性关系，线性范围和定量限满足检测的要求。

表3 10个化合物的线性回归方程、线性范围及定量限(LOQ)

2.2 稳定性试验 取浓度为10 ng/mL的混合标准溶液，分别于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、24 h进样，测得治螟磷、乐果、马拉硫磷、三唑酮、三唑磷、灭多威、克百威、啶虫脒、辛硫磷、吡虫啉面积的相对标准偏差(RSD值)分别为1.3%、1.9%、1.6%、1.1%、1.4%、0.8%、1.2%、0.9%、1.5%、2.0%。结果表明，供试品溶液在24 h内稳定。

2.3 准确度与精密度试验 取5种中药材各6份，分别精密加入低、高两个质量浓度的混合标准品(4.0 μg/kg、40.0 μg/kg)，按 1.2.3.2 项下方法制备供试品溶液，测定。计算各成分的加标回收率和相对标准偏差，见表4。结果表明：10种被测物质的平均回收率为72.8%～108.8%，相对标准偏差为0.6%～4.8%，符合试验要求。

表4 回收率考察结果(n=6)

3 讨 论

近年来，由于缺乏严密的质量控制标准和科学检测手段，在中药材种植过程中超范围超剂量使用农药的现象呈上升的趋势，随着更加严格的国际农残标准出台，我国出口的中药产品农残超标的事件时有发生，甚至被检测出了克百威、三唑磷等剧毒、高毒的农药，不仅造成了巨大的经济损失，还严重影响了我国中药产品的声誉，中药材中农药残留的问题已经引起了国内外的普遍关注[8-10]。

本实验建立了超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS/MS)方法，可在短时间内同时检测5种南药中药材中的10种农药残留量。研究结果表明，该方法简便，灵敏度够高，分析速度快，精密度、稳定性好，适用于中药材中的多种农药残留检测，为南药的种植和生产提供了质量控制的技术方法和科学研究的依据，也为其农药残留标准的制定提供了参考。

[1]符乃光,张俊清,赖伟勇,等.海南广藿香等四种南药的有机氯农药残留含量现状研究[J].时珍国医国药,2005,16(8):730-731.

[2]张俊清,符乃光,赖伟勇,等.海南槟榔等4种南药农残含量现状研究[J].中国药学杂志,2005,40(6):460-462.

[3]楼步青,徐鸿华.南药规范化种植调研及发展策略[J].时珍国医国药,2011,22(8):1999-2000.

[4]苏靖,戴荣继.液质联用技术在中药研究中的应用[J].生命科学仪器,2014,12(1):38-42.

[5]罗芬.液-质联用技术在中药分析中的应用[J].亚太传统医药,2014,10(11):52-54.

[6]郭兴杰,安芳,林丽娜.液质联用技术与中药现代化[J].世界科学技术-中医药现代化,2009,11(1):142-146.

[7]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会,国家食品药品监督管理总局.GB 23200.11-2016桑枝、金银花、枸杞子和荷叶中413种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-质谱法[S].北京:中国标准出版社,2016.

[8]绿色和平组织.药中药——中药材农药污染调查报告[R/OL].[2015-08-18].

[9]康传志,郭兰萍,周涛,等.中药材农残研究现状的探讨[J].中国中药杂志,2016,41(2):155-159.

[10]钱韵旭.国外新农残标准对中药出口的影响及对策研究[D].沈阳:沈阳药科大学,2014.

Simultaneous determination of ten pesticide residues in five Chinese medicinal materials by UPLC-MS/MS.

ZHENG Pei,WANG Ru,ZHOU Min.Haikou Branch of Hainan Provincial Institute for Drug and Food Control,Haikou 570311,Hainan,CHINA

ObjectiveTo establish a method for simultaneous determination of 10 pesticide residues in five Chinese medicinal materials(Pogostemon cablin,Alpinia oxyphylla,Morinda officinalis,Myristica fragrans,Syzygium aromaticum).MethodsThe Agilent 1 290-6 460 ultra performance liquid chromatography-mass spectrometry analysis of enzymatic assays(UPLC-MS/MS),Agilent Jet Stream electrospray ionization(AJS ESI),multiple reaction monitoring(MRM),Agilent MassHunter software were used to peform qualitative and quantitative analysis.ResultsThe linear ranges of 10 pesticide residues was 0.5-100 μg/kg(r＞0.9986),and the limit of quantity(LOQ)was 0.005-0.1 μg/kg,while the recovery rate was 72.8%-108.8%.ConclusionUPLC-MS/MS method is simple,sensitive,and accurate,which can be used for the determination of 10 pesticide residues in Pogostemon cablin,Alpinia oxyphylla,Morinda officinalis,Myristica fragrans,Syzygium aromaticum.

Ultra performance liquid chromatography-mass spectrometry analysis of enzymatic assays(UPLC-MS/MS);Pesticide residues;Pogostemon cablin;Alpinia oxyphylla;Morinda officinalis;Myristica fragrans;Syzygium aromaticum

R28

A

1003—6350（2017）20—3352—05

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.20.028

郑培。E-mail：12123089@qq.com

2017-07-18)