米非司酮对子宫肌瘤组织中表皮生长因子及Cx43表达的影响

符吉芬，符泽美，王爱丽，李丽娟

(海口市中医院妇产科，海南 海口 570216)

米非司酮对子宫肌瘤组织中表皮生长因子及Cx43表达的影响

符吉芬，符泽美，王爱丽，李丽娟

(海口市中医院妇产科，海南 海口 570216)

目的探讨米非司酮对子宫肌瘤组织中表皮生长因子(EGF)及上调间隙连接蛋白Cx43表达的影响。方法从海口市中医院妇产科2015年1～12月收治的子宫肌瘤患者中选取符合入组条件的子宫肌瘤患者92例，按随机数表法分为对照组和观察组，每组46例。另选取同期在我院因卵巢肿瘤行手术治疗的40例正常子宫肌组织作为正常组。观察组于术前5 d开始予以米非司酮25 mg，2次/d，口服，连续服用5 d，停药后立即行手术治疗。正常组与对照组在确诊后立即行全子宫切除术。治疗结束后，比较三组受检者子宫肌瘤组织及正常子宫肌组织中EGF及Cx43的表达情况。结果①对照组在增生期子宫肌瘤组织的EGF mRNA为(0.31±0.27)，与正常组增生期的(0.27±0.14)比较差异无统计学意义(P＞0.05)；②对照组在分泌期子宫肌瘤组织的EGF mRNA为(1.45±0.43)，与正常组分泌期的(0.53±0.25)比较差异有统计学意义(P＜0.05)；③观察组在增生期子宫肌瘤组织的EGF mRNA为(0.26±0.11)，与对照组增生期的(0.31±0.27)、正常组增生期的(0.27±0.14)比较差异无统计学意义(P＞0.05)；而观察组在分泌期子宫肌瘤组织中EGF mRNA为(0.54±0.23)，与对照组分泌期的(1.45±0.43)比较，差异有统计学意义(P＜0.05)；④对照组增生期子宫肌瘤内Cx43蛋白表达与分泌期比较，差异具有统计学意义(P＜0.05)；正常组患者增生期子宫肌内Cx43蛋白表达与分泌期比较，差异无统计学意义(P＞0.05)；⑤观察组增生期子宫肌瘤Cx43蛋白表达与对照组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)；而分泌期观察组子宫肌瘤内Cx43蛋白表达与对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论米非司酮能够明显抑制子宫肌瘤的生长，对临床诊治具有指导意义。

米非司酮；子宫肌瘤；表皮生长因子；Cx43

子宫肌瘤(uterine myoma)是女性生殖器最常见的良性肿瘤，由平滑肌及结缔组织组成[1]。本病临床表现为月经量增多或者经期延长、下腹部包块、白带增多、肿瘤压迫膀胱或者直肠出现相应的压迫症状[2]。本病多发于中年妇女，据调查统计[3]，我国子宫肌瘤患者的发病率从2000年的14%上升至2013年的31%，并有逐年上升的趋势。子宫肌瘤与女性性激素有密切关系，肌瘤组织局部对雌激素的高敏感性是肌瘤发生的重要因素。此外相关研究证实，孕激素能够促进肌瘤的有丝分裂活动，刺激肌瘤的生长，这也为抗孕激素治疗子宫肌瘤奠定了基础[4]。本文通过观察表皮生长因子(EGF)及上调间隙连接蛋白Cx43的表达水平，探究米非司酮治疗子宫肌瘤的可能机理。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年1～12月海口市中医院妇产科收治的子宫肌瘤患者92例，按随机数表法分为对照组和观察组，每组46例。另选取同期在我院因卵巢肿瘤行手术治疗的40例正常子宫肌组织作为正常组。观察组患者中增生期和分泌期均23例，平均年龄(40.6±12.4)岁；对照组患者中增生期和分泌期均23例，平均年龄(41.2±11.7)岁。正常组中增生期和分泌期均为20例，平均年龄(41.1±10.7)岁。患者病程3个月～3年。三组患者的一般资料比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

1.2 子宫肌瘤诊断标准 月经量增多或者经期延长、下腹部包块、白带增多、肿瘤压迫膀胱或者直肠出现相应的压迫症状等为临床症状；妇科检查可扪及明显包块；彩超、宫腔镜、腹腔镜、影像等检查可明确诊断[5]。

1.3 纳入与排除标准 (1)纳入标准：符合子宫肌瘤的诊断标准；年龄23～66岁；患者自愿参与本实验，并签署知情同意书；经所在单位伦理学相关机构的批准。(2)排除标准：心、肝、肾严重疾病；其他恶性肿瘤；患有艾滋病、肺结核病毒性肝炎等传染病患者；血液性疾病，神志异常以及近3个月来服用激素药物治疗的患者。

1.4 治疗方法 正常组与对照组诊断明确后，在全麻下行全子宫切除术；观察组于术前5 d开始予以米非司酮25 mg，2次/d，口服，连续服用5 d，停药后，在全麻下行全子宫切除术。术中子宫标本离体15 min内选取肌瘤组织，所有标本采集后立即保存在-70℃低温冰箱中。

1.5 观察指标及检测方法

1.5.1 EGF表达 采用RT-PCR法测定子宫肌瘤和正常子宫肌组织内EGF mRNA含量。一步法提取子宫肌瘤及子宫肌组织内总RNA，并以RNA为模板反转录合成cDNA，以cDNA为模板行体外扩增，以2.0%凝胶电泳一个小时后，于紫外线照射下观察，并用激光密度扫描仪计算吸光度值。并与β-action条带光密度值比较。目的基因引物序列如表1所示。

表1 目的基因的实时定量RT-PCR引物序列

1.5.2 Cx43表达 标本甲醛固定后，石蜡包埋制片，采用免疫组化法测定Cx43表达含量，试剂盒由赛驰生物公司提供，并且严格按照说明书操作。以浓度为2.5 μg/mL的兔抗Cx43(美国Zymed公司产)为一抗，切片使用苏木素复染色。空白对照用磷酸盐缓冲液(PBS)替代一抗。阳性细胞判定标准：阳性细胞＜5%时为阴性(-)；当阳性细胞5%～50%时为阳性(+)；当阳性细胞＞50%时为强阳性(++)。

1.6 统计学方法 应用SPSS19.0统计学软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用t检验，等级资料比较采用秩和检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 三组患者不同月经周期EGF mRNA含量比较 对照组在增殖期子宫肌瘤组织与正常组子宫肌中EGF mRNA的含量比较差异均无统计学意义(P＞0.05)；分泌期对照组子宫肌瘤组织中EGF mRNA较正常组明显增高，差异有统计学意义(P＜0.05)；观察组增生期子宫肌瘤组织中EGF mRNA与对照组、正常组EGF mRNA含量比较差异均无统计学意义(P＞0.05)；而分泌期观察组子宫肌瘤组织中EGF mRNA含量明显低于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2 三组患者不同月经周期EGF mRNA含量比较(±s)

表2 三组患者不同月经周期EGF mRNA含量比较(±s)

注：治疗后，与正常组同时间段比较，aP＜0.05(P=0.042，t=2.203)；治疗后，与对照组同时间段比较，bP＜0.05(P=0.038，t=2.213)。

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2.2 不同月经周期中子宫肌瘤与正常子宫肌Cx43蛋白表达比较 对照组增生期子宫肌瘤内Cx43蛋白表达明显高于分泌期，差异具有统计学意义(P＜0.05)；正常组患者增生期子宫肌内Cx43蛋白表达与分泌期比较差异无统计学意义(P＞0.05)，对照组和正常组的增生期子宫肌瘤内Cx43蛋白表达比较差异有统计学意义(P＜0.05)，且两组分泌期的差异亦有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

表3 不同月经周期中子宫肌瘤与正常子宫肌Cx43蛋白表达比较(例)

2.3 观察组与对照组患者子宫肌瘤内Cx43蛋白表达比较 经过米非司酮治疗后，观察组增生期子宫肌瘤Cx43蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)；而分泌期，经米非司酮治疗后的观察组子宫肌瘤内Cx43蛋白表达明显高于未用药物治疗的对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表4。

表4 观察组与对照组患者子宫肌瘤内Cx43蛋白表达比较(例)

3 讨 论

子宫肌瘤是最常见的一种生殖器激素依赖性良性肿瘤,主要发生于30～50岁中年妇女。据统计，至少有20%的育龄妇女有子宫肌瘤[6]。子宫肌瘤早期无明显症状，当肌瘤逐渐增大时可有肿瘤压迫症状、或月经、白带异常等临床表现。子宫肌瘤生长的主要原因是雌激素受体和孕激素受体的增多和过度表达[7]。相关研究证实，孕激素在子宫肌瘤发生的机制中起着重要的作用[8]。

本研究显示，对照组在增殖期子宫肌瘤组织与正常组子宫肌中EGF mRNA的含量差异无统计学意义(P＞0.05)；分泌期对照组子宫肌瘤组织中EGF mRNA较正常组明显增高(P＜0.05))；观察组增生期子宫肌瘤组织中EGF mRNA与对照组、正常组EGF mRNA含量差异无统计学意义(P＞0.05)；而分泌期观察组子宫肌瘤组织中EGF mRNA含量明显低于对照组(P＜0.05)。月经周期增生期中主要是雌激素起主导作用，进入分泌期时，雌激素和孕激素共同发挥作用。本实验结果中，处于增生期的子宫肌瘤患者中的EGF mRNA含量无明显差异，而处于分泌期的子宫肌瘤组织中的EGF mRNA含量对照组明显高于正常组，推断在EGF表达中孕激素具有主要的调控作用。米非司酮是孕激素受体拮抗剂，能够抑制孕激素受体基因的表达，使转录活化因子不能被激活，基因不能表达，无法发挥孕酮作用，从而抑制EGF表达，因此米非司酮治疗后分泌期患者子宫肌瘤组织中EGF mRNA含量明显低于未使用药物治疗的对照组[10-12]。

本研究还显示，对照组增生期子宫肌瘤内治疗Cx43蛋白表达与分泌期比较差异有统计学意义(P＜0.05)；正常组患者增生期子宫肌内Cx43蛋白表达与分泌期比较差异无统计学意义(P＞0.05)；观察组经过米非司酮治疗后，观察组增生期子宫肌瘤Cx43蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)；而分泌期，观察组子宫肌瘤内Cx43蛋白表达与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。子宫的协调收缩需要间隙连接蛋白的表达，Cx43是间隙连接蛋白的最重要的成员，对细胞的代谢、增殖、分化和凋亡起到重要的调控作用。雌激素是促进肌瘤生长的主要因素，高雌激素状态可通过雌激素受体上调子宫肌瘤组织中的Cx43 mRNA和蛋白的表达，形成间隙连接。增生期Cx43蛋白表达增强，能够有效的抑制细胞有丝分裂，组织细胞恶化[13]。孕激素能够通过孕激素受体直接抑制Cx43蛋白表达，分泌期一定水平孕激素亦能抑制雌激素受体的表达，间接抑制Cx43蛋白表达下调，导致肌瘤有丝分裂增强，促进肌瘤增长[14]。米非司酮能够直接抑制孕激素受体基因表达或者对抗孕酮活性，削弱孕激素对Cx43蛋白表达影响，增强间隙连接蛋白的表达[15]。

综上所述，米非司酮能够抑制分泌期孕激素受体基因的表达，抑制孕酮活性，从而下调子宫肌瘤组织中表皮生长因子的表达；并能够通过上调间隙连接蛋白Cx43表达，增强细胞间接接触的生长作用，抑制肌瘤细胞的有丝分裂活动，最终抑制子宫肌瘤的生长。

[1]许学岚,张娟娟,曾秀华,等.米非司酮对子宫肌瘤血管内皮生长因子(VEGF)的影响[J].中国妇幼保健,2007,22(4):513-514.

[2]蔡云朗,沈扬,任慕兰,等.米非司酮对子宫肌瘤组织中雌、孕激素受体及表皮生长因子受体的影响[J].现代医学,2007,35(4):299-303.

[3]黄晓军,张晓薇,陈国勤.表皮生长因子在子宫肌瘤组织中表达和米非司酮的干预作用[J].中国妇幼保健,2006,21(22):3129-3132.

[4]丁莉,顾海燕,陈玲英,等.米非司酮对子宫肌瘤及子宫肌层组织Caspase-3与Survivin表达的影响[J].中国妇幼保健,2012,27(3):346-347.

[5]朱丽红,肖艳.大黄与虫对药含药血清对胰岛素样生长因子-I和表皮生长因子促进人子宫肌瘤细胞增殖的影响[J].中华中医药杂志,2012,27(5):1390-1393.

[6]王立群,赵静,张丽芬.子宫肌瘤中表皮细胞生长因子受体变化及其与雌激素和孕激素受体的关系[J].中国全科医学,2010,13(21):2391-2393.

[7]时燕萍,陈琳,钱菁,等.子宫肌瘤表皮生长因子及其受体临床观察分析[J].中华中医药学刊,2010,28(11):2320-2321.

[8]曾艳.不同方法治疗子宫肌瘤的效果分析[J].中国当代医药,2013,20(36):184-185,187.

[9]贾喜菲,宋静慧,萨日娜.子宫肌瘤、子宫肌瘤合并子宫腺肌病结合带的超微结构变化及Cx43表达[J].中华临床医师杂志(电子版),2013,7(19):8688-8695.

[10]王艳,李刚.雌激素受体、孕激素受体、血管内皮生长因子及其受体在子宫肌瘤中的表达和临床研究[J].中国妇幼保健,2014,29(8):1194-1195.

[11]王惠群,靳家玉.米非司酮对子宫肌瘤及子宫肌层组织雌、孕激素受体的影响[J].中华妇产科杂志,2000,35(2):14-16+64.

[12]罗洁梅,徐碧红,邹玉森.米非司酮对子宫肌瘤患者血TGF-β1和性激素水平的影响[J].中国妇幼保健,2013,28(24):4050-4052.

[13]石岩蓉,朱颖军,林琬君,等.表皮生长因子对子宫肌瘤细胞MAPK信号通路的活化作用[J].现代妇产科进展,2013,22(11):892-896.

[14]朱欣,张怡.米非司酮对子宫肌瘤间隙连接蛋白43表达的影响[J].现代妇产科进展,2004,13(3):204-206.

[15]何美娟.子宫肌瘤患者子宫不同部位ER、PR、EGFR的表达及其意义[J].中国现代医生,2011,49(20):48-49,53.

Effect of mifepristone on expression of epidermal growth factor and Cx43 in uterine fibroids.

FU Ji-fen,FU
Ze-mei,WANG Ai-li,LI Li-juan.Department of Obstetrics and Gynecology,Haikou Hospital of Traditional Chinese Medicine,Haikou 570216,Hainan,CHINA

ObjectiveTo investigate the effect of mifepristone on epidermal growth factor(EGF)and up-regulation of connexin43(Cx43)in uterine fibroids.MethodsNinety-two patients with uterine fibroids in Department of Obstetrics and Gynecology in our hospital from January 2015 to December 2015 were randomly divided into control group and observation group,with 46 cases in each group.Forty patients undergoing surgical treatment for ovarian tumor were selected as the normal group.The observation group

mifepristone 25 mg for 5 consecutive days before surgery,two times per day.The control group and the normal group received hysterectomy immediately after confirmed diagnosis.After treatment,the expression of EGF and Cx43 in uterine fibroids and normal uterine muscle were compared between the three groups.Results①There was no significant difference in the level of EGF mRNA in the proliferative phase between the control group and the normal group,(0.31±0.27)vs(0.27±0.14),P＞0.05.② The EGF mRNA level in progestational stage was(1.45±0.43)in the control group,versus(0.53±0.25)in normal group(P＜0.05).③ The level of EGF mRNA in proliferative stage in the observation group was(0.26±0.11),versus(0.31±0.27)in the control group and(0.27±0.14)in normal group(P＞0.05);the EGF mRNA level in progestational stage was(0.54±0.23)in the observation group,significantly lower than(1.45±0.43)in the control group(P＜0.05).④ The difference in Cx43 between in proliferative stage and in progestational stage was significant in the control group(P＜0.05),but not significant in normal group(P＞0.05).⑤ The level of Cx43 protein in proliferative stage in the observation group showed no significant difference with that in the control group(P＞0.05),but the level in progestational stage showed statistically significant difference between the two groups(P＜0.05).ConclusionMifepristone can significantly inhibit the growth of uterine fibroids.

Mifepristone;Uterine fibroids;Epidermal growth factor;Connexin43(Cx43)

R737.33

A

1003—6350（2017）20—3297—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.20.010

符泽美。E-mail：hainan007004@126.com

2017-02-20)