遏云茶中当归的质量研究

程庆兵，刘 静，汪海宣，苗仁华，叶红兵

（合肥市食品药品检验中心，安徽 合肥 230000）

遏云茶中当归的质量研究

程庆兵，刘 静，汪海宣，苗仁华，叶红兵

（合肥市食品药品检验中心，安徽 合肥 230000）

目的以当归对照药材和阿魏酸、蒿本内酯为指标，研究并完善处方中当归的质量标准。方法采用薄层色谱法（TLC）为定性鉴别方法；HPLC法测定其中阿魏酸含量。结果不同批次遏云茶中当归对照药材和阿魏酸、蒿本内酯斑点清晰，分离度好，结果一致。含量测定阿魏酸平均含量为40 ug·g-1，回收率为100.1%，RSD=1.8%。结论定量定性方法准确、专属性强、重复性好。

遏云茶；质量标准；薄层色谱；高效液相色谱

遏云茶主要作用为疏风清热，利喉开音，其中当归、生地等药材行血中之滞；去瘀生新之功效。中医认为当归主治咳逆上气。现已证明，当归成分正丁烯夫内酯和藁本内酯对气管平滑肌具有松弛作用；适用于咽部粘膜肥厚，咽后壁淋巴细胞滤泡增生[1]。遏云茶作为安徽省中医药大学第一附属医院制剂室生产的院内制剂，其质量的主要环节没有完整的理化和仪器检验，由生产者凭经验控制，增加了质量的不可控性。查阅相关文献和期刊，均没有这方面的记载和报道，故建立遏云茶的质量标准有非常重要的意义。

1 材 料

戴安U-3000高效液相色谱仪（DAD检测器，chrome leon7.2软件）；超声波清洗器（Fisherbrand FB15065）；XPE-205电子分析天平（Mettler Toledo）；CAMAG TLC VISUALIZER薄层成像系统（瑞士卡玛）；CAMAG LIONMAT5半自动点样仪（瑞士卡玛），IKA A11 basic中药打粉机，硅胶G薄层板（Merck、青岛海洋、烟台信德）。

阿魏酸对照品（中检院；110773-201614；含量为99.6%）；蒿本内酯对照品（中检院；111737-201507）；当归对照药材（中国药品生物制品检定院；批号：120927-201516）；遏云茶（批号：20150806，20151016，20150526等）；甲醇（GR）；乙腈（GR）；重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱[2]

2.1.1 制备对照药材溶液与对照品溶液

取当归（Chinese Angelica）对照药材0.5 g置于干燥锥形瓶中，加乙醚20 mL，超声10分钟，滤过，取续滤液置蒸发皿中，水浴锅上蒸干，残渣加乙醇1 mL使其溶解，即得对照药材溶液。

精密称取阿魏酸对照品10 mg置10 mL量瓶中，加适量甲醇溶解，并用甲醇稀释定容摇匀，制成浓度为1 mg/mL的溶液；取蒿本内酯对照品0.1 mL置50 mL量瓶中，精密加入甲醇30 mL，摇匀。取阿魏酸对照品溶液5 mL、蒿本内酯对照品溶液1 mL，混匀，作为混合对照品溶液。

2.1.2 制备供试品溶液

取遏云茶粉末（过药典四号筛）5 g置于干燥锥形瓶中，加乙醚20 mL，超声10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL使其溶解，作为供试品溶液1；另取遏云茶粉末（过药典四号筛）5 g置于离心管中，加入1%碳酸氢钠溶液50 mL，超声10分钟，离心，取上清液用稀盐酸调节pH值至2～3，倒入分液漏斗中，用乙醚20 mL分别振摇提取2次，合并乙醚液于蒸发皿中，置水浴锅上蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，即得供试品溶液2。

2.1.3 制备阴性供试品溶液

按遏云茶处方比例（除当归），制成阴性供试品，按2.1.2的方法来分别制备出阴性供试品溶液1和阴性供试品溶液2。

2.1.4 薄层色谱

照薄层色谱法（中国药典2015年版四部 通则0502）试验分别进行如下两个薄层试验。

①吸取当归对照药材溶液、供试品溶液1和阴性供试品溶液1各5 μL，点于同一硅胶G板（merk）上，以乙酸乙酯-正己烷（1：4）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。如图1所示，在与对照药材色谱相应的位置上，供试品显与之相同颜色的荧光斑点，而阴性供试品在相应的位置上却无相同颜色的荧光斑点，并且8批不同批号的遏云茶粉末与对照药材比较均能出现相同Rf值斑点。

②吸取混合对照品溶液1 μL、阴性供试品溶液2和供试品溶液2各5 μL，分别点于同一硅胶G板（merk）上，以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（4：1：1：0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。如图2所示，供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性供试品则在相应的位置上无相同颜色的荧光斑点，8批不同批号的遏云茶与对照品比较均能出现相同Rf值斑点。

图1 遏云茶薄层鉴别1

图2 遏云茶薄层鉴别2

注：9、10为同一批

2.2 阿魏酸含量测定

2.2.1 波长的选择[2]

参考中国药典2015年版一部中当归的含量测定方法以及其他相关文献资料，本次试验选择316 nm作为液相色谱的检测波长。

2.2.2 色谱条件

流动相：乙腈-0.1%磷酸（17：83）；波长316 nm；WatersSunfier柱；柱温设为30℃；流速1.0 ml/min；进样量10 μL；理论塔板数按阿魏酸素峰计算应不低于5000。见下图1：

图1 高效液相色谱图

A：溶剂 B：对照品 C：阴性对照 D：样品

2.2.3 对照品溶液的制备

精密称取阿魏酸对照品47.24 mg，加甲醇溶解制成对照品储备液（941.021 μg·mL-1）。

2.2.4 供试品溶液的制备[3]

精密称取遏云茶细粉5 g置于烧瓶中，精密加入20 mL 70%乙醇，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，并用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，用滤纸滤过取续滤液，精密量取10 mL置蒸发皿中，蒸干，残渣加水20 mL使溶解，并用盐酸调节pH值至2，倾入分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取4次（20，20，15，15 mL），合并提取液，蒸干，用甲醇溶解并定容至5 mL量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.5 线性关系分析

精密量取对照品储备液分别制成浓度为4.705、9.410、18.820、37.640、94.102μg·mL-1的系列浓度。按色谱条件方法进行检测，求得线形回归方程：A=0.05469C-0.52266，相关系数r=0.9999。结果表明浓度在4.705 μg·mL-1～94.102 μg·mL-1，范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.2.6 重复性试验

取批号20150106的样品，同供试品溶液的制备方法处理，测定阿魏酸峰面积A。重复性良好。

2.2.7 稳定性试验

精密量取阿魏酸对照品储备液（941.021 μg·mL-1）1 mL置50 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，于室温下分时段测定，结果显示阿魏酸对照品溶液在8小时内较稳定。

2.2.8 计算加样回收率

取样品（批号为20150106），取9份，分别精密加入3个梯度量的对照品，再同2.3.2方法处理。结果：平均回收率为100.1%，RSD为1.73%（n=9），此结果表明使用本方法具有较高的准确性。

2.2.9 样品含量测定

取本品，按2.3.4方法处理，作为供试品溶液。按测定出的阿魏酸峰面积A，计算样品中阿魏酸的含量，结果见表1。

表1 样品含量测定结果

3 讨 论

3.1 本方法采用了不同厂家，不同批次的硅胶G板，采用上述两种展开剂，国产普通硅胶G板和进口Merk板在紫外光灯（365 nm）下检视均斑点清晰明显，阴性对照没有干扰，且分离效果更好。选用薄层色谱法对遏云茶中当归进行薄层定性鉴别，方法可行，斑点清晰，分离效果好，不失为遏云茶中当归的有效定性鉴别方法。

3.2 本文阿魏酸的含量测定，采用乙醇提取直接进样，干扰成分多，计算出的阿魏酸含量偏低。可能是由于阿魏酸为有机酸类，而中药提取液的WM值多偏酸性，使其不易与其他化学成分产生作用而影响其提取转移率。故采用调节pH值至酸性，再用乙醚提取，从而减少干扰，提高转移率。

3.3 由于复方中药成分多样，而我们分析技术有限，在本文中我们仅对阿魏酸这个单一的成分进行分析，并不能对复方的整体质量进行综合评价，具有相当的片面性。如果想把中药整体的研究更加的科学合理，还必须结合处方中的其他味药材以及药理试验、临床试验等进行综合性的评定。

本文建立了遏云茶中当归的质量控制方法，得出最优色谱条件。本法样品处理简单、分析周期短、重现性好、准确性高。

[1] 程树玲，曾 莉，尹宏怡.利咽开咽茶与遏云茶治疗声音嘶哑251例报告[J].安徽中医临床杂志，2004，2(6):8-9.

[2] 中国药典2015年版[s].一部，2015:133-134.

[3] 王淑美.冯素香，郭亚健，等.脑络通不同提取工艺中阿魏酸含量变化的研究含量[J].《中药新药与临床药理》，2007，18(3):238-240.

R284.1

B

ISSN.2095-8242.2017.060.11866.03

本文编辑：刘帅帅