江苏莲藕主产区黄瓜花叶病毒病发生分布调查

董婷婷，刘娴，朱延达，吴伟文，贺振，李良俊

（扬州大学园艺与植物保护学院，江苏，225009）

江苏莲藕主产区黄瓜花叶病毒病发生分布调查

董婷婷，刘娴，朱延达，吴伟文，贺振，李良俊

（扬州大学园艺与植物保护学院，江苏，225009）

由黄瓜花叶病毒（Cucumbermosaic virus，CMV）等引起的病毒病害是限制莲藕产量和品质的重要因素之一。采用酶联免疫吸附法（ELISA），调查了江苏省莲藕主产区CMV的发生分布状况。调查结果表明，43份莲藕样品中共检测到28份阳性样品，侵染率达65.12%，其中扬州宝应、邗江及苏州吴中地区的检出率依次为75%、58.6%和100%；表现黄化、花叶及皱缩花叶症状的莲藕叶片中CMV的检出率达100%，黄斑、皱缩、斑驳以及无症莲藕叶片中也均有检出，表明CMV在江苏莲藕上发生普遍，且可能产生多种症状类型。

莲藕；黄瓜花叶病毒；酶联免疫吸附法；分布

莲藕（Nelumbo nucifera Gaertn.）是睡莲科莲属多年生水生草本植物，以膨大的根状茎和莲籽为主要食用器官，主要分为藕莲、子莲和花莲3种类型[1，2]。莲藕原产于亚洲南部，主要分布在中国、日本和东南亚地区，在我国有3 000多a栽培历史，栽培面积近33.3万hm2[1]。莲藕在我国南北各地均有种植，长江流域以南栽培较多，除水田外，还广泛利用低洼田、池塘和湖荡种植，是我国重要的水生蔬菜[1]。莲藕上常见病害有腐败病、褐斑病、炭疽病和病毒病等20多种类型[3]。目前，有关莲藕病毒病的报道较少。1985年，日本山下修一等[4]首次报道了莲藕条斑病毒（Lotus streak virus）；2011 年，丁自立等[5]发现在莲藕生育期中，存在部分植株矮小、叶片包卷不易展开、叶面局部褪色、皱缩等疑似黄瓜花叶病毒（Cucumbermosaic virus，CMV）侵染的症状；2015年，Yu等[6]在表现花叶症状的莲藕上，首次检测到芋花叶病毒（Dasheen mosaic virus，DsMV）。

CMV是雀麦花叶病毒科（Bromoviridae）黄瓜花叶病毒属（Cucumovirus）的典型成员，为单链、正义RNA（+ssRNA）病毒，寄主范围广泛[7]。 1916年 CMV作为黄瓜花叶病的病原，首次被报道出来，此后，国内外大量学者相继对其展开研究[8，9]，并报道了该病毒在不同寄主上的为害。CMV可侵染1 000多种单子叶和双子叶植物，是多种农作物和观赏植物的重要致病病原之一[10]。尽管丁自立等[5]依据症状描述了莲藕上疑似存在CMV的发生，但并没有确切的检测鉴定结果，该病毒在莲藕上的发生分布状况、症状间的相互关系亦不清晰。故此，本研究以江苏省莲藕主产区的莲藕为试验材料，研究CMV在莲藕上的发生分布情况，以期为莲藕病毒病害的防控提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 样品采集

2015-2016年，在江苏莲藕主产区的扬州宝应（苏北）、邗江（苏中）及苏州吴中（苏南）地区共采集43份样品（图1），其中包括无症、叶片斑驳、黄化、花叶、黄斑等多种不同症状（图2）。将采集到的样品置于-80℃冰箱中保存备用。

1.2 ELISA检测

①从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

②设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。

③样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

④除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔各加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱中温育60min。

图1 江苏省莲藕样品采集地分布

⑤弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1 min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（可用洗板机洗板）。

⑥每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

⑦每孔加入终止液50μL，15 min内，450 nm波长处测定各孔的OD值。

图2 莲藕叶片的不同症状

表1 江苏莲藕主产区CMV的ELISA检测结果

2 结果与分析

2.1 江苏莲藕主产区CMV的发生分布

在供试的43份莲藕样品中，有28份检测成阳性，检出率为65.12%（表1），可见CMV在江苏莲藕主产区田间发生普遍。其中，扬州宝应地区阳性样品有9份，占宝应地区总样品的75%；邗江地区阳性样品有17份，占邗江地区总样品的58.6%；苏州吴中地区阳性样品有2份，占吴中地区总样品的100%（图3）。

图3 江苏莲藕主产区CMV检出率

2.2 莲藕病斑症状与CMV侵染的关系

在江苏莲藕产区采集的43份样品中，莲藕叶片分别表现黄斑、皱缩、脉明、黄化、花叶、斑驳等症状。经检测发现，黄化、花叶、皱缩花叶症状样品的CMV阳性率为100%；黄斑症状样品的CMV阳性率为85.7%；无症样品的阳性率为59.3%；皱缩、斑驳症状样品的CMV阳性率为50%；脉明症状样品的CMV检测结果均为阴性（图4）。数据表明，CMV侵染莲藕后，在叶片上可能产生多种症状。

图4 莲藕不同病症叶片CMV的检出率

3 讨论与结论

CMV寄主范围广，可侵染1 000多种单子叶和双子叶植物，能使大部分寄主表现各种典型病毒病害症状，例如绿斑型、花叶型、皱缩型及黄化型等[11]。此外，不同作物、同一作物不同的生育期以及不同生长环境，CMV侵染表现的症状有较大的差异[12]。本研究中，ELISA检测出的阳性样品中，叶片症状各有不同，这个结果与CMV侵染其他作物时表现一致。当然，莲藕叶片上的病部症状是否由该病毒直接或间接导致，尚需要进一步研究。本研究共采集了江苏莲藕3个主产区的样品，扬州宝应和邗江的检出率分别达到75%和58.6%，苏州吴中地区检出率达100%，虽然在苏州吴中地区的采样数偏少，可能导致该地区的CMV检出率值偏高，但仍然能反映CMV在江苏省莲藕主产区广泛发生。

CMV在自然界主要通过寄主植物种子、繁殖材料及昆虫传播。而莲藕主要以根状茎进行无性繁殖，CMV的侵染和逐年积累可能加剧莲藕种性退化，引起莲藕产量和品质降低。本研究中单纯采用ELISA法检测，样品集中在江苏省莲藕主产区的部分采样点，可能存在一定的局限性，后续试验中需要扩展样品采集地点，加大采样量，并通过ELISA和RT-PCR相结合的方法，来确定CMV在我国莲藕上的发生分布情况，为进一步开展莲藕上CMV的发生流行、致病机制及科学防控提供理论依据。

[1]刘义满，柯卫东.关于提高莲产业效益的建议[J].长江蔬菜，2012（16）：134-137.

[2]李效尊，尹静静，杜绍印，等.水生蔬菜营养及药用价值研究进展[J].长江蔬菜，2015（22）：25-30.

[3]刘义满，吴仁锋，杨绍丽.24种莲病害名录[J].长江蔬菜，2015（22）：213-217.

[4]山下修一，土居養二，與良清，等.ハスで見出されたラブドウイルス；ハス条斑ウイルス（lotus streak virus，LSV)について[J].日本植物病理學會報，1985（51）：627-631.

[5]丁自立，吴金平，刁英，等.莲藕主要病害及其综合防治[J].湖北农业科学，2011（15）：3 078-3 079.

[6]Yu X,Sheng JJ,Zheng XW,et al.First report of Dasheen mosaic virus infecting lotus(Nelumbo nucifera)in China[J].Plant Disease,2015,99(10)：1 449.

[7]张华荣.侵染半夏的黄瓜花叶病毒研究[D].杭州：浙江大学，2006.

[8]Doolittle SP.A new infectious mosaic disease of cucumber[J].Phytopathology,1916,6(2)：142-144.

[9]Jagger IC.Experiments with the cucumber mosaic disease[J].Phytopathology,1916,6(2)：149-151.

[10]Edwardson JR,Christie R G.CRC handbook of viruses infecting legumes[M].CRCPress,1991：293-319.

[11]王达新，郭刚，殷晓敏，等.黄瓜花叶病毒研究进展[J].现代农业科技，2013（3）：121-123.

[12]都彦伶，宿烽，赵新涛.黄瓜花叶病毒病的研究和防治策略[J].安徽农学通报，2015（Z1）：87-89.

Investigation on Occurrence and Distribution of Cucumber Mosaic Virus in Main Producing Areas of Lotus Root in Jiangsu

DONG Tingting,LIU Xian,ZHU Yanda,WUWeiwen,HE Zhen,LILiangjun
(School of Horticulture and Plant Protection,Yangzhou University,225009)

Virus disease caused by cucumber mosaic virus (CMV)is one of the important factors limit the yield and quality of lotus root.In this study,The occurrence and distribution of CMV in the main producing areas of lotus root in Jiangsu province was investigated by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).The results showed that 28 positive samples were detected in 43 lotus samples,and the infection rate was 65.12%,while the infection rates of Baoying and Hanjiang in Yangzhou and Wuzhong region in Suzhou were 75%,58.6%and 100%,respectively.The detection rate of CMV in lotus leaves of yellow,mosaic and shredded mosaic was 100%,which was also detected in the leaves of chlorotic,symptom less,shrinking and mild mottle.All these indicated that CMV was common in lotus root of Jiangsu Province,and was likely to produce various types of symptom.

Lotus root;Cucumbermosaic virus;Enzyme-linked immunosorbent assay;Distribution

S645.1；S463.45

A

1001-3547（2017）18-0144-04

10.3865/j.issn.1001-3547.2017.18.045

江苏省农业科技自主创新资金项目[CX（16）1011]董婷婷（1997-），女，在校本科生，园艺专业，E-mail：912768255@qq.com

李良俊（1969-），男，通讯作者，教授，博导，长期从事水生蔬菜栽培研究，E-mail：ljli@yzu.edu.cn

2017-08-16