素花党参多糖对乌鸡生长性能、免疫功能、血常规及肠道菌群的影响

李开菊，陈文倩，周霞，李璐洁，郝然，邹元锋

（四川农业大学动物医学院，四川 温江 611130）

素花党参多糖对乌鸡生长性能、免疫功能、血常规及肠道菌群的影响

李开菊，陈文倩，周霞，李璐洁，郝然，邹元锋*

（四川农业大学动物医学院，四川 温江 611130）

本试验旨在探讨不同水平素花党参多糖对乌鸡生长性能、免疫功能、血常规及肠道菌群的影响。选取120只1日龄乌鸡随机分为6组，空白组饲喂基础日粮，其余组添加200mg/L氟苯尼考造模，6d后，自然恢复组每日灌胃生理盐水，阳性对照组灌胃100mg/kg黄芪多糖溶液，给药组分别灌胃200mg/kg、100mg/kg和50mg/kg素花党参多糖粗提液，持续给药15d。综合对比结果表明，100mg/kg素花党参多糖对乌鸡具有一定的促进生长、调节肠道微生态平衡及提高免疫功能等作用。

素花党参多糖；氟苯尼考；生长性能；免疫功能；肠道微生物菌群

素花党参为党参中的优良品种，药理作用与党参相似。党参多糖为党参干燥根的水溶性多糖，具有调节机体免疫功能，清除自由基，降血糖，抗肿瘤，抗衰老和抑制中枢神经系统等多种药理作用[1]。党参多糖在体内可扶植肠道正常菌群生长，体外可促进双歧杆菌繁殖，能有效调节肠道微生态平衡[2]。本试验将素花党参多糖（WCP）以不同浓度灌胃经高剂量氟苯尼考制造的雏鸡肠道菌群失调模型，并与市售黄芪多糖进行比较，通过观测雏鸡生长性能、血常规、免疫器官指数以及肠道菌群的变化，为素花党参多糖在生产上的应用奠定理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物 本试验使用动物为四川高县本地杂种1日龄乌鸡，试验鸡自由采食、饮水，控制舍内光照、温度、湿度，适时通风，每天定时打扫鸡舍卫生并消毒，进行常规免疫接种，其他饲养管理均按肉鸡常规管理程序进行。

1.1.2 试验药物及试剂 本试验所用素花党参采自四川省九寨沟，黄芪多糖（APS）购自北京生泰尔生物科技有限公司，氟苯尼考购自江苏南农高科动物药业有限公司；选择培养基购自青岛海博生物技术有限公司，冰醋酸、PBS缓冲液等试剂均为国产分析纯。

1.1.3 WCP的提取分离 取素花党参药材200g，洗净、烘干，剪成小块状，以80%乙醇提取3次去除单糖、色素等杂质后，按照料液比1∶30热水浸提3次，每次1.5h，将水提滤液浓缩后加入无水乙醇至终浓度为80%，置于4℃冰箱中静置过夜，5000r/min离心20min，取沉淀抽滤干燥即为粗多糖粉末，通过苯酚硫酸法测得多糖含量为50.96%。

1.2 试验设计

1.2.1 给药方法 选取1日龄杂种乌鸡120只，预饲7d后随机分为6组，每组20只。6组分别为自然恢复组（模型对照组MCK）、阳性对照组（APS）、空白对照组（CK）以及素花党参多糖高、中、低剂量给药组（WCP-H、WCP-M、WCP-L），供试样品浓度分别为高剂量：200mg/kg，中剂量：100mg/kg，低剂量 50mg/kg，阳性对照组APS溶液浓度为100mg/kg。

预饲7d后在5组乌鸡的饮水中添加氟苯尼考200 mg/L（空白组除外），自由饮水，连续用药 6d，用于造模。停药后第1d（14日龄），MCK组每日灌胃0.5mL生理盐水，APS组灌胃APS溶液0.5mL，给药组灌胃WCP粗提液0.5mL。按照上述饲喂方法及给药方案进行试验，给药组连续饲喂至29日龄，即给药15d。

1.2.2 生长性能指标 分别在乌鸡14、21、28日龄时以重复为单位，定时空腹（可自由饮水）12h后称重，准确称量其日供料量、剩余料量及损失料量，计算出平均日采食量、平均日增重和料重比。

1.2.3 免疫功能检测 乌鸡放血处死后用湿法去毛，75%酒精浸泡消毒，剖开腹腔和胸腔，取出脾脏、法氏囊，用滤纸吸干表面血液，称重，计算免疫器官指数。免疫器官指数=免疫器官重量（mg）/体重（g）

1.2.4 血常规检测 无菌采集静脉血1mL于EDTA真空采血管中，送宜宾金贝宠物医院检测血常规指标。

1.2.5 肠道菌群结构检测 于29日龄上午8：00每组取肉鸡3只称重，采血后断颈处死，用5%新洁尔灭浸泡5min全身消毒，无菌条件下取出盲肠肠道，将两端结扎，转移至无菌操作台，采集盲肠内容物，称取一定量以灭菌PBS缓冲液稀释至10 mg/mL，再分别进行10倍系列稀释至10-6倍。各稀释度吸取10μL稀释液分别接种伊红美蓝（EMB）、亚硫酸铋（BS）、LBS和TPY琼脂选择培养基，分别进行大肠杆菌、沙门氏菌、乳酸杆菌和双歧杆菌的分离培养。每个稀释度重复3次，待菌液吸收后，置于37℃细菌恒温培养箱中培养，具体培养条件见表1。选菌落适中的稀释度，计数单个菌落数量，每组重复计数3次，得到平均菌落数x，代入以下公式得到肠道内容物细菌群落总数，结果以对数表示。

肠道菌落总数（CFU/g标本）=x×100×100×稀释倍数

表1 肠道微生物菌培养基及培养条件

1.3 统计方法 所有数据均用平均数±标准差（x±s）表示，采用软件SPSS17.0进行单因素方差分析，用Duncan法进行多重比较，P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 WCP对乌鸡生长性能的影响 称量并记录乌鸡采食量和体重变化，计算得到料重比，如表2所示。

表2 WCP对乌鸡生长性能的影响 g/d

分析可知，1～14日龄为雏鸡的预饲和造模期，各组间差异均很小（P＞0.05）。15～29日龄，MCK组相对于CK组采食量和增重有所降低，料重比升高（P＞0.05）；3个给药剂量组之间比较，WCP-M组的生长性能最好，MCK组生长性能最差（P＞0.05），表明中剂量WCP有提高乌鸡生长性能的趋势（P＞0.05）。

2.2 WCP对免疫功能的影响 采集雏鸡免疫器官称重，计算得到免疫器官指数，结果见表3。

表3 WCP对乌鸡免疫器官指数的影响

造模前，脾脏指数和法氏囊指数分别为1.03±0.90、1.46±0.40，造模结束后脾脏指数和法氏囊指数分别降为 0.42±0.26、1.24±0.36（P＞0.05）；给药后脾脏指数比造模结束时有所升高，法氏囊指数有所降低（P＞0.05）。MCK组的法氏囊指数均低于CK组（P＞0.05），WCP组的脾脏指数比APS组高或接近（P＞0.05）。给药后，WCP高、中、低剂量组的法氏囊指数与APS、CK组以及MCK组之间无显著差异，但MCK组的法氏囊指数最低（P＞0.05）；3个剂量在3个日龄段均为WCP-M组的法氏囊指数最高（P＞0.05）。

2.3 WCP对乌鸡血常规的影响 检测25～29日龄雏鸡的静脉血常规，结果显示：相对于CK组，MCK组的中性粒细胞比率、血红蛋白含量、红细胞总数、红细胞压积、血小板总数均有所降低（P＞0.05），WCP-M组的白细胞总数、淋巴细胞数、中性粒细胞比率有所升高（P＞0.05）；而相对于MCK组，WCP-M组的白细胞总数、淋巴细胞数、中性粒细胞比率、血红蛋白含量、红细胞总数、红细胞压积和血小板总数均有上升趋势（P＞0.05），且恢复效果大都优于APS组（P＞0.05）。

2.4 WCP对乌鸡肠道菌群的影响 使用选择培养基分离培养4种菌，结果见表4。

分析可知，相对于CK组，MCK组的大肠杆菌、乳酸杆菌数量有所升高（P＞0.05），双歧杆菌数量有所降低（P＞0.05），沙门氏菌数量显著升高（P＜0.05）。相对于MCK组，WCP-H组的双歧杆菌和大肠杆菌数量显著升高（P＜0.05），乳酸杆菌和沙门氏菌数量也有所升高，但不显著（P＞0.05）；WCP-M 组的双歧杆菌数量有所升高（P＞0.05），大肠杆菌和乳酸杆菌数量有所下降（P＞0.05），沙门氏菌数量显著降低（P＜0.05）；WCP-L组的大肠杆菌、双歧杆菌以及沙门氏菌数量有所升高（P＞0.05），乳酸杆菌数量显著降低（P＜0.05）。

表4 WCP对乌鸡肠道菌群的影响 lg CFU/g

3 分析与结论

3.1 WCP对乌鸡生长性能的影响 不同营养水平、饲养方式、氨基酸等因素对鸡的生长性能都有影响，添加抗生素的饲粮能在一定程度上影响鸡的肠道健康以及生长性能[3]。石轶男等[4]研究发现，于每千克饮水中添加党参多糖可溶性粉0.2g（中剂量）、0.4g（高剂量），结果发现21日龄和35日龄体重均明显高于CK组，但在7日龄时与CK组无显著差异。本试验1～14日龄为预饲和造模期，造模结束后，雏鸡生长性能与空白组无显著差异；而15～29日龄造模结束后灌喂素花党参多糖溶液，两周后高剂量、中剂量组的增重比MCK组和CK组高，中剂量组的料重比比CK组和MCK组低。综合可知，以100mg/kg WCP灌胃雏鸡，具有提高其生长性能的功效。

3.2 WCP对乌鸡免疫功能的影响 本试验造模结束后脾脏指数和法氏囊指数均降低，可能是饲喂抗生素氟苯尼考后导致肠道菌群紊乱，进而影响免疫功能所致。以100mg/kg WCP给药后，雏鸡脾脏指数相比MCK组有所提高，且给药10～15d效果最佳，超过正常水平。WCP给药组的法氏囊指数均比MCK组高，说明WCP起到了一定的增强机体免疫功能的作用，其中100mg/kg给药组的法氏囊指数超过正常水平，随着时间的推移，作用效果亦高于黄芪多糖（APS）。故WCP-M（100mg/kg）组对肠道菌群失调雏鸡具有增强机体免疫功能的作用。

3.3 WCP对乌鸡血常规的影响 血液学指标是反映机体健康与否的重要指标。本试验血常规结果显示，WCP可以改善因服用抗生素造成的中性粒细胞比例、血红蛋白含量、红细胞总数、红细胞压积以及血小板总数偏低的情况，且高剂量、中剂量的效果相差不大。总的来看，100mg/kg剂量组对上述生理指数恢复作用较好，尤其对中性粒细胞和血小板总数的恢复能力最好，已经超过正常水平。

3.4 WCP对乌鸡肠道菌群的影响 现代研究发现，党参多糖可以促进双歧杆菌、乳酸杆菌等益生菌的生长，对大肠杆菌的生长没有促进或抑制作用，而对沙门氏菌有抑制作用，具有基本益生能力，适合作为益生元[5]。本试验首次研究WCP对氟苯尼考造成的雏鸡肠道菌群失调的调节作用，结果表明，造模结束后双歧杆菌数量降低，大肠杆菌和乳酸杆菌升高，沙门氏菌显著升高。给药后，相比MCK组，WCP-H组的4种细菌均有所增加，尤以双歧杆菌增加显著；WCP-M组双歧杆菌数量增加，其余3种菌数量降低；WCP-L组双歧杆菌亦升高，乳酸杆菌有所降低，而沙门氏菌和大肠杆菌有所升高。综合分析，WCP-H组双歧杆菌数量虽然升高显著，但致病菌数量也有所升高，无法起到维持肠道菌群平衡的作用；WCP-L组可能由于剂量过低，双歧杆菌增加不显著，无法将紊乱的肠道菌群调节到正常水平；而WCP-M组虽然双歧杆菌升高不显著，但其余致病菌有降低的趋势，有助于肠道稳态的恢复。故以100mg/kg WCP饲喂雏鸡对肠道菌群的恢复最适宜。

[1]朱斌，曾淼，刘林，等.党参中水溶性多糖研究进展[J].安徽农业科学，2016，44（19）：109-110.

[2]王广.党参多糖对肠道菌群失调小鼠的调整作用机制的初步研究[D].佳木斯：佳木斯大学，2010.

[3]Miles R D.Effect of antibiotic growth promoters on broilerperformance， intestinalgrowth parameters，and quantitative morphology [J].Poultry Science，2006，85（3）：476-485.

[4]石轶男，杨绒娟，扆妍妍，等.党参多糖可溶性粉对肉仔鸡血清ND抗体水平、IgG及肠道SIgA含量的影响[J].中国兽药杂志，2016，50（9）：47-52.

[5]白子霞，王宏军，龙元桃.党参提取物抗菌活性研究[J].辽宁中医杂志，2015，42（7）：1290-1291.

Effects of Codonopsis Pilosula Polysaccharides on the Production Performance，Immune Function，Routine Blood Indexes and Intestinal Microflora of Black-bone Chicken

Li Kaiju，Chen Wenqian，Zou Yuanfeng*，et al.
（College of Veterinary Medicine，Sichuan Agricultural University，Sichuan Wenjiang 611130，China）

The aim of this study was to research the effects of polysaccharides from codonopsis pilosula Nannf.var.modesta（Nannf.）L.T.Shen（WCP）with different levels on the production performance，immune function，routine blood indexes and intestinal microflora of black-bone chicken.One hundred and twenty black-bone chickens were divided into 6 groups randomly，then 200mg/L florfenicol was added to five groups for 6 days，but the blank group was fed with the basic diets.The treatment lasted for 15 days by the method of intragastric administration with normal saline in the spontaneous recovery group，the positive control group was given 100mg/kg astragalus polysaccharides（APS），and the medication groups were given 200mg/kg，100 mg/kg and 50 mg/kg WCP.The results of the comprehensive comparison showed that 100 mg/kg WCP had good effect on growth-promoting，intestinal micro flora regulating and immunity enhancement.

Codonopsis pilosula polysaccharides；Florfenicol；Production performance；Immune function；Intestinal microflora

S853.74

B

1001-8964（2017）10-0032-04

2017-06-02

中国博士后科学基金（2016M602704）；四川省创新性实验计划项目（201610626060）

李开菊（1994-），女，重庆梁平人，在读本科生，主要从事天然药物研究。

*通讯作者：邹元锋，副教授，博士，硕士生导师，主要从事天然药物研究。