氟吗啉原药大鼠急性吸入毒性试验

吴宗澄

摘要：为测定氟吗啉原药对大鼠的急性吸入毒性，求出半数致死浓度（LC50），同时为亚慢性和其他毒理学研究中接触剂量的选择提供依据，参照《农药登记毒理学试验方法》，以中华人民共和国国家标准（GB15670-1995）为准则，用SD（Sprague Dawley）大鼠作为试验动物，对氟吗啉原药进行了急性吸入毒性试验。结果表明：氟吗啉原药对SD雌雄大鼠急性吸入毒性试验LC50均大于2093±30 mg/m3。 根据GB15670-1995《农药登记毒理学试验方法》大鼠急性吸入毒性分类标准，氟吗啉原药大鼠急性吸入毒性为低毒，该结论可为安全使用提供依据。

关键词：氟吗啉原药；大鼠；急性吸入毒性；LC50

中图分类号：X43

文献标识码：A文章编号：16749944（2017）18021902

1引言

氟吗啉原药是沈阳化工研究院自主研制的新型杀菌剂＼[1＼]。该杀菌剂是一种内吸型杀菌剂，主要用于防治霜霉和疫霉属病害，由卵菌纲病原菌引起的霜霉病、晚疫病等重要植物病害，尤其用于防治抗性病害＼[1，2＼]。氟吗啉是我国第一个真正实现工业化且具有自主知识产权的农药品种，也是第一个获得中国发明专利的农用杀菌剂＼[3＼]。氟吗啉原药杀菌活性高，抗菌谱广，与环境相容性优于国外同类产品烯酰吗啉＼[4＼]。但目前尚未见有关氟吗啉原药吸入毒性的报道。本实验参照《农药登记毒理学试验方法》，以中华人民共和国国家标准（GB15670-1995）为准则[5]，通过对SD大鼠的急性吸入毒性試验来检测氟吗啉原药的急性吸入毒性，了解其经呼吸道进入动物机体后对呼吸道及全身的损伤和危害程度，为该农药的毒理学安全评价提供资料。

2材料与方法

2.1受试物与仪器

氟吗啉原药为白色结晶固体，纯度为95%，由沈阳化工研究院有限公司提供。称取 95.0 g 受试样品，加入 5.0 g 白炭黑用行星式球磨仪进行粉碎和研磨，配成 95%的受试样待用。所用仪器有：HOPE-MED 8052H粉尘类动物口鼻多浓度动态暴露系统购自天津开发区合普工贸有限公司，赛多利斯BS124S电子天平购自杭州汇尔仪器设备有限公司，行星式高能球磨仪购自德国莱弛公司，TY-08C智能个体粉尘取样机购自盐城天悦仪器仪表有限公司，3321药物气溶胶粒径普仪系统购自美国TSI公司。

2.2动物来源与饲养环境

SPF级SD大鼠40只，雌雄各半，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供（许可证号：SCXK<京>2012-0001）。引入动物后进行适应检查，适应期每笼2只动物，适应时间12～13 d，引入当天进行健康检查，并称量体重。饲料为灭菌全价营养粉料，自由饮水，动物房温度为20.13～23.82 ℃，湿度为40.75%～69.89%，光周期自动控制，每天明暗各12 h。

2.3试验方法

2.3.1剂量设计

参 照 农 药 毒 理 学 试 验 方 法（GB15670 - 1995），设计2000 mg/m3、1000 mg/m3、500 mg/m3、200 mg/m3，根据体重采用随机分组法分为4组，每组10只动物，雌雄各半。分组时候组内动物的体重不超过平均体重的±20%。如果2000 mg/m3剂量组试验动物没有出现死亡，则判定急性吸入毒性试验LC50大于2000 mg/m3。

2.3.2染毒途径及方法

采用动式吸入染毒法，使用HOPE-MED 8052H固气类动物口鼻多浓度动态染毒控制装置对动物进行染毒。试验开始前，将雌雄各半10只动物分别放入固定器中，将固定器安装在染毒柜上，然后密封染毒柜。定量进样的供试品同空调过滤的压缩空气（0.04 m3）吸入室内混合，设置进样速度和混合气体流量，通过柜顶部的喷头连续向柜内发生气溶胶。通过柜底部连接的尾气吸收过滤装置进行尾气吸收。染毒柜内设置温度为22 ℃±3 ℃，染毒期间试验动物禁食禁水。动物给药前先对染毒柜内浓度进行调试，2次检测染毒柜内浓度波动小于±20%，进行正式试验，动物暴露染毒时间为2 h。染毒结束动物归鼠笼观察14 d，动物自由饮水和摄食。

2.3.3给药暴露参数检测

染毒过程中对动物呼吸带供试品实际浓度和粒径分布进行分析，对进气流量、进样流量、浓度测量、染毒柜温度、相对湿度、氧气浓度进行检测。

浓度测量：采样前称量滤膜重量为A1，采样结束后称量滤膜重量为A2，计算采样质量（M），M=A2-A1，气溶胶浓度为C（mg/m3）=采样质量（M）/采样体积（V）×1000 （L/m3）。

粒径测定：使用粒子空气动力学粒径谱分布仪3321进行粒径测定。主要测定3个指标，其一：可吸入部分的粒径数（<4μm），其二：粒子空气动力学直径质量中值（MMAD），其三：粒子空气动力学几何标准差（GSD）。

2.3.4动物观察与体重称量

染毒结束后对动物进行观察，24 h以后每天观察1次至第14 d。记录各动物中毒症状及其发生和缓解、消失的时间。仔细观察和记录被毛、眼睛和粘膜、呼吸系统、生殖泌尿系统、神经消化系统，特别注意观察供试品对呼吸系统的影响，如呼吸道刺激反应，呼吸节律的变化，以及呼吸和呼吸模式的改变。

体重称量：染毒前称量动物体重，染毒后7 d和14 d各称量1次动物体重。

2.3.5大体解剖检查

试验期末对全部存活动物CO2麻醉，放血进行大体解剖。解剖时候对动物进行全面的仔细的肉眼观察，特别关注肺部及上呼吸道的刺激及局部毒性反应，同时检查颅腔、胸腔、腹腔、各个天然孔道及其内容物，详细记录每只动物的大体解剖改变。

2.3.6数据处理和结果评价

统计各组死亡率与存活率，体重结果以均值加减标准差形式体现，如果最高剂量组（2000 mg/m3剂量组）试验动物没有出现死亡，则判定急性吸入毒性试验LC50大于2000 mg/m3剂量组剂量均值加减标准差。然后按照表1进行毒性分级。endprint

3.2粒徑分布

使用粒子空气动力学粒径谱分布仪3321管理软件进行采集和测定，主要测定三个指标，其一：可吸入部分的粒径数（<4 μm），其二：粒子空气动力学直径质量中值（MMAD），其三：粒子空气动力学几何标准差（GSD），结果见表3。

3.4死亡结果及观察

2093 mg/m3浓度组动物染毒期间及染毒后14 d观察期间，所有受试动物没有发生死亡，观察均也没见异常。

3.5体重称量结果

2093 mg/m3浓度组动物体重在试验期间呈现增长趋势，结果见表5。

3.6解剖与组织学观察结果

观察结束，所有受试动物的解剖与组织学检查均未见异常。

4结论与讨论

如前所述，如果2000 mg/m3剂量组试验动物没有出现死亡，则判定急性吸入毒性试验LC50大于2000 mg/m3。根据试验结果氟吗啉原药对雌雄大鼠半数致死浓度（LC50，2 h）分别如下：雄性大鼠：>2093±30 mg/m3，雌性大鼠：>2093±30 mg/m3。根据GB15670-1995《农药登记毒理学试验方法》大鼠急性吸入毒性分类标准＼[5＼]，氟吗啉原药急性吸入毒性为低毒。

随着农业发展水平的提高，我过创新农药越来越多，农药的安全性问题也越来越得到广泛的关注，氟吗啉杀菌活性高，抗菌谱广，与环境相容性好，具有较高的市场开发潜力。近年来，关于氟吗啉急性吸入毒性尚未见报道，本实验通过对SD大鼠的急性吸入毒性试验来检测氟吗啉原药的急性吸入毒性，结果表明，氟吗啉毒性为低毒，若制成有效的喷雾剂，不仅提高了药物的吸收速度，而且避免了其他给药途径带来的不良反应，极大地提升了用药的安全性。

参考文献：

[1]

刘武成，刘长令. 新型高效杀菌剂氟吗啉 ＼[J＼]. 农药，2002（1）：8～11.

＼[2＼]李凤珍，王捷，姚宝玉，等. 氟吗啉原药大鼠慢性毒性与致癌试验＼[J＼].农药，2005（1）.

＼[3＼]高贻轩. 氟吗啉和唑菌酯在人参上的残留动态及最大残留限量标准的制定 ＼[D＼]. 长春：吉林农业大学，2016.

＼[4＼]HUA Chenlei，KOTS K，KETELAAR T，et al. Effect of Flumorph on F-Actin Dynamics in the Potato Late Blight Pathogen Phytophthora infestans ＼[J＼]. Phytopathology，2015，105（4）： 419-423.

＼[5＼]中华人民共和国农业部.GBI5670-1995.农药登记毒理学试验方法＼[S＼].北京：中国标准出版社，1995.

Acute Inhalation Toxicity Test of Flumorph Technical on Rat

Wu Zongcheng

（Safety Evaluation Center of Shenyang Research Institute of Chemical Industry Ltd.， Shenyang 110021， China）

Abstract： ＼[Aims＼] To determine acute inhalation toxicity test of Flumorph Technical on rat， this paper obtained the median lethal concentration （LC50） and provided evidence for the selection of exposure dose for sub-chronical study. ＼[Methods＼] The method was designed to meet the pesticide registration toxicology test method from the national standard of the Peoples Republic of China （GB15670-1995）. The study was performed to assess the potential for acute inhalation toxicity of the Flumorph Technical in SD rats. ＼[Results＼]The acute inhalation LC50of SD male and female rats for Flumorph Technical was more than 2093±80 mg/m3. ＼[Conclusions＼] According to GB15670-1995 pesticide registration toxicological test methods of Rat Acute Inhalation Toxicity Classification Standards， Fluorine morpholine reversed-phased rat acute inhalation toxicity is low toxicity. The conclusions provide the basis for safe use.

Key words： Flumorph Technical； rat； acute inhalation toxicity； LC50endprint