高效液相色谱法测定槐枝合剂的防腐剂含量

商思阳，陈 娟 ，徐 冲，魏 琳

(1．重庆市中医院，重庆 400021； 2．重庆医科大学附属第一医院，重庆 400010)

高效液相色谱法测定槐枝合剂的防腐剂含量

商思阳1，陈 娟1，徐 冲1，魏 琳2

(1．重庆市中医院，重庆 400021； 2．重庆医科大学附属第一医院，重庆 400010)

目的建立有效控制医院制剂槐枝合剂中苯甲酸钠含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法色谱柱采用Agilent XDB－C18柱(150 mm×4．6 mm,5 μm)，流动相为 0．05 mol／L 磷酸二氢钠溶液(用磷酸调 pH 为 3．0)－ 乙腈(65 ∶35)，流速 1 mL ／min，检测波长 248 nm，柱温25℃。结果苯甲酸钠峰与其他峰能达到基线分离，并能排除辅料的干扰，线性回归方程为 Y＝3 531．4 X＋2．683(r＝0．999 9，n＝6)，苯甲酸钠质量浓度在 0．02～0．16 g／L范围内与峰面积积分值线性关系良好，平均回收率为98．43%，RSD为 1．42%（n＝6）。结论该方法可用于槐枝合剂的质量控制。

高效液相色谱法；防腐剂；苯甲酸钠；含量测定；槐枝合剂

槐枝合剂清热消炎是重庆市中医院的特色制剂，用于痔疮发炎、出血疼痛，疗效确切，临床应用广泛。中药提取成分含有油脂类、糖类、蛋白质等，久置易腐败，加入防腐剂苯甲酸钠(sodium benzoate)，但其过量摄入会对人体产生一定毒性[1－6]。2010 年版《中国药典(二部)》规定食品与口服药品中苯甲酸钠的含量不得超过0．3%[7]。本研究中参考文献[8－15]，采用高效液相色谱(HPLC)法测定槐枝合剂中苯甲酸钠的含量，并进行了方法学考察，操作简单，结果可靠，重复性好，可作为医院槐枝合剂中防腐剂苯甲酸钠的含量测定方法。现报道如下。

1 仪器与试药

1．1 仪器

Agilent 1260型高效液相色谱仪，配置G1312C型二元泵，G1314F型紫外检测器（美国安捷伦科技有限公司）；XA205DU型电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）。

1．2 试药

槐枝合剂（医院制剂，批号为20160301，20160801，20161201）；苯甲酸钠（镇江前进化工厂，批号为20150401，含量大于 99．0%）；水为超纯水，乙腈为色谱纯（Honeywell，批号为 AH015 － 4CH 100269），其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱：Agilent XDB －C18柱(150 mm ×4．6 mm，5 μm)；流动相：0．05 mol／L 磷酸二氢钠溶液(用磷酸调pH 为 3．0)－乙腈(65 ∶35)；流速：1 mL ／min；检测波长：248 nm；柱温：25℃。理论板数按苯甲酸钠峰计算不低于 6 000。

2．2 溶液制备

对照品溶液：取苯甲酸钠对照品，称取0．1252g，精密称定，置50 mL容量瓶中，加甲醇定容，取1 mL置25 mL容量瓶中，定容，作为对照品溶液。

供试品溶液：精密量取1 mL槐枝合剂（批号为20160301），置20 mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2．3 方法学考察

阴性干扰试验：按处方量配制不含苯甲酸钠的阴性对照品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。按拟订色谱条件分别对对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液进样10 μL，记录色谱图。结果阴性对照品溶液对苯甲酸钠的含量测定无干扰，色谱图见图1。

线性关系考察：精密量取苯甲酸钠对照品溶液(0．108 1 g／L)2，4，6，8，10，12 μL，按拟订色谱条件测定其峰面积。以峰面积积分值(A，Y)为纵坐标、质量浓度（C，X）为横坐标进行线性回归，得回归方程 Y＝3 531．4 X＋2．683，r＝0．999 9（n＝6），结果表明，苯甲酸质量浓度在0．02～0．16 g／L范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验：取 2．2项下对照品溶液，重复进样6次，测定其峰面积。结果的 RSD为 0．212%（n＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取样品(批号为20160301)，依法制备供试品溶液，分别于配制后 0，1，2，4，6，8 h 时各进样10 μL，测定峰面积。结果的 RSD 为 1．02%(n ＝6)，表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。

重复性试验：取同一批样品(批号为20160301)，依2．2项下方法制备供试品溶液6份，分别测定苯甲酸钠的含量。结果平均含量为 1．461 9 g／L，RSD 为 1．30%(n＝6)，表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的样品，精密加入苯甲酸钠对照品适量，依法制备供试品溶液，进样测定，并计算含量。结果见表1。

图1 高效液相色谱图

表1 苯甲酸钠加样回收试验结果（n＝6）

2．4 样品含量测定

取 3 批样品（批号为 20160301，20160801，20161201），按2．2项下方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，按外标法计算含量。结果3批样品的含量分别为1．461 9，1．395 3，1．582 7 g ／L。

3 讨论

3．1 检测波长和流动相选择

苯甲酸钠对照品溶液用紫外检测器进行全波长检测，结果苯甲酸钠在248 nm波长处有最大吸收，且在此波长处干扰组分对测定无干扰。因此，选择248 nm作为检测波长。

曾试验用乙腈－1 mL／L磷酸溶液(30∶70)为流动相，发现各峰不能有效分离。后选择0．05 mol／L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调pH为3．0)－乙睛(65∶35)为流动相，结果各峰均能达到基线分离，且峰形对称，保留时间适宜，但是否适用于其他院内制剂（如固体制剂的防腐剂含量测定）仍有待进一步研究。

3．2 防腐剂发展趋势

目前以生物发酵而成的生物防腐剂将成为发展趋势，如纳他霉素是一种多烯烃大环内酯类物质，通过与真菌细胞膜里的固醇类化合物相互作用，改变细胞的渗透性，从而抑制和杀灭被作用的真菌。纳他霉素对几乎所有的霉菌和酵母都具有抑制作用，但对细菌却无效[16－17]。可食用、药用和草本植物提取的植物精油包含大量的次生代谢物，具有延缓或抑制细菌、酵母、霉菌生长的作用[18－19]。李超[20]在香肠防腐过程中，考察了不同质量浓度的白豆蔻挥发油微胶囊的防腐作用，发现3．2% 的白豆蔻挥发油微胶囊对香肠防腐效果最好。可见，天然生物防腐剂的应用很可能在未来将得到稳步增长，患者要求药品能长期储存，且减少不良反应。尽管生物防腐剂显示了在食品保藏中的巨大潜力，但要将生物防腐剂大规模推广应用到药物制剂中，还有许多问题需要解决。首先，大部分文献报道的抗菌数据来自模拟污染食品样品或实验室培养基。在实际药物制剂中，尤其对于中药制剂而言，由于成分复杂，且有效成分容易缺失等，使用生物防腐剂的水平可能比试验所需的水平高很多，而动植物药体内天然抗菌物质的含量一般极其微量，且相对分子质量小，分离纯化困难，提取步骤烦琐，得率低，以植物挥发油尤为明显。其次，生物防腐剂的抑菌活性一般较化学防腐剂低、抑菌谱也比较窄，因此天然防腐剂运用于院内制剂有待深入研究。

3．3 研究价值

2008年版《重庆市医疗机构制剂规范》的标准中只提出添加适量防腐剂，本研究中确立了医院槐枝合剂中苯甲酸钠的含量测定方法，建议进一步开展苯甲酸钠的准确用量试验，在保证不会变质的前提下，以减少用量或将处方中的苯甲酸钠改为更安全的防腐剂，减少防腐剂摄入过多带来的危害，提高合剂的质量稳定性。不同的院内合剂中苯甲酸钠用量差异较大，虽然从留样的微生物试验和性状观察结果来看，各批次样品均未发生酸败、霉变等现象，但有待进一步将此方法推广到这些院内合剂中。

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Content Determination of Preservative in Huaizhi Mixture

Shang Siyang1,Chen Juan1,Xu Chong1,Wei Lin2
(1．ChongqingTraditional Chinese Medicine Hospital,Chongqing,China 400021; 2．The First Affiliated Hospital of ChongqingMedical University,Chongqing,China 400010)

Objective To establish an HPLC method for effective control of the content of sodium benzoate in Huaizhi Mixture of hospital preparation．Methods The Agilent XDB － C18column(150 mm × 4．6 mm,5 μm)was adopted,the mobile phase was 0．05 mol／L sodium dihydrogen phosphate solution(pH ＝3．0 with phosphoric acid)－acetonitrile(65 ∶35),the flow rate was 1 mL ／min,the detection wave length was 248 nm and the column temperature was 25 ℃．Results The peak of sodium benzoate and other peaks in samples could be separated from baseline．The regression equation wasY＝ 3 531．4 X ＋ 2．683(r＝ 0．999 9,n ＝ 6),the sodium benzoate showed a good linear in the concentration range of 0．02 － 0．16 g ／L,the average recovery was 98．43%,and RSD was 1．42%(n ＝6)．Conclusion The method can be used for the quality control of sodium benzoate in Huaizhi Mixture．

HPLC;preservative;sodium benzoate;content determination;Huaizhi Mixture

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2017)19－0034－03

10．3969 ／j．issn．1006 － 4931．2017．19．009

重庆市社会民生科技创新专项重点项目[cstc2016shms－zd10001]。

商思阳（1986－），男，硕士研究生，药师，主要从事中药制剂生产与研发工作，（电子信箱）1551356105＠qq．com。

陈娟（1986－），女，硕士研究生，药师，主要从事中药制剂生产与研发工作，（电子信箱）394647255＠qq．com。

2017－05－09；

2017－06－27)