加味大承气汤对脓毒症急性肺损伤大鼠血清中Gc球蛋白和内毒素的影响*

蒋朱秀 蔡宛如 李敏静 陈 晔 江 劲 郑小伟 蔡月琴

1 浙江中医药大学附属第二医院 浙江 杭州 310005 2 浙江中医药大学 浙江 杭州 310053

加味大承气汤对脓毒症急性肺损伤大鼠血清中Gc球蛋白和内毒素的影响*

蒋朱秀1蔡宛如1李敏静1陈 晔1江 劲1郑小伟2蔡月琴2

1 浙江中医药大学附属第二医院 浙江 杭州 310005 2 浙江中医药大学 浙江 杭州 310053

脓毒症 急性肺损伤 加味大承气汤 Gc球蛋白 内毒素 大鼠

脓毒症多继发于严重感染、创伤、休克和大手术后，是临床上危重病中最常见的死亡原因[1]。中西医结合治疗脓毒症导致的急性肺损伤在临床有一定的疗效，但其机制不甚明确，本研究通过加味大承气汤对脓毒症急性肺损伤大鼠的Gc球蛋白和内毒素的影响进行探讨，从而阐明加味大承气汤治疗脓毒症急性肺损伤的机理。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组：清洁级雄性SD大鼠40只，体质量为200～220g，实验动物生产许可证号：SCXK(沪)2013-2016，动物合格证号：2008001665123，购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司，饲养于浙江中医药大学实验动物中心清洁级动物房。动物随机分为正常组、模型组、中药组、地塞米松组、中西医结合组，每组8只。

1.2 主要试剂：ELISA法测定Gc球蛋白试剂盒，批号：E20161227703和ET试剂盒，批号：E20161227704，均购于杭诚维生物科技有限公司。

1.3 实验药物：加味大承气汤由大黄、芒硝各10g，厚朴、枳实、麦冬、当归各12g，生黄芪20g组成。药物均购自浙江省中医药大学附属第二医院药房，自动煎药机煎出药液，再浓缩为含生药10g/ml。醋酸地塞米松片：浙江仙琚制药股份有限公司，批号1505121。

1.4 实验方法：分述如下。

1.4.1 脓毒症急性肺损伤模型的制备：动物购来后饲养7天，实验前禁食过夜，自由饮水。预留正常组后，其余均进行造模处理，以5%氯胺酮（0.2ml/100g体重）肌肉麻醉后固定、腹部脱毛、消毒、铺无菌洞巾。沿腹正中线作1.5cm切口，找到盲肠，仔细剥离肠系膜，在盲肠根部结扎盲肠，避免结扎回肠及盲肠系膜血管。用5ml塑料注射器针头穿刺盲肠3次，挤出少许肠内容物。之后，将盲肠还纳腹腔，逐层缝合腹壁切口，术毕。立即动物皮下注射生理盐水10ml抗休克。

1.4.2 动物分组和给药：动物无干预饲养后随机分为正常组、急性肺损伤模型组（模型组）、加味大承气汤（中药组）、地塞米松组、中药+地塞米松（中西医结合组），每组8只。造模后立即灌胃给药1次，以及造模后8h灌胃1次，各组给药治疗方案：加味大承气汤组分别以10ml/kg的剂量灌胃2次；地塞米松组分别以5mg/kg的剂量灌胃2次；中西医结合组2种药物同时灌胃，模型组和正常组以剂量10ml/kg的生理盐水灌胃。各组大鼠于造模结束后处死，收集标本进行检测。

1.5 标本采集与处理：各组大鼠麻醉后，分别留取左肺用10%甲醛固定备用，留取右肺迅速置入－80℃冰箱中冻存。

1.6 指标检测与观察：分述如下。

1.6.1 病理学观察：左侧肺组织，用10%甲醛固定，石蜡包埋，行苏木精伊红(HE)染色，镜下观察肺组织病理学改变。

1.6.2 血清Gc球蛋白和内毒素的检测：各组大鼠麻醉后，腹主动脉取血，离心，取上清，－20℃贮存备用，应用ELISA方法进行检测Gc球蛋白和内毒素的浓度。

2 结果

2.1 一般状态观察：正常组大鼠饮食毛发正常，活动灵敏，呼吸均匀平稳，大便正常；模型组大鼠部分死亡，精神萎靡，皮毛无光泽，呼吸频率加快，口鼻周围有分泌物，不思饮食；药物干预治疗组大鼠死亡率低，大鼠的活动性、反应性以及进食饮水状况明显优于模型组，其中中西结合治疗组大鼠存活情况最好，其进食、活动情况和反应性最佳。

2.2 各组大鼠腹腔和肺脏肉眼形态学观察：正常组大鼠腹腔中无明显渗液，各脏器供血良好，肺脏外观色泽粉红，无明显异常；模型组大鼠腹腔中可见大量混浊渗液，胃肠组织胀气充血，肺组织充血水肿胀大，呈黯红色。而中药组、地塞米松组和中西医结合汤组则腹腔渗液和肺组织水肿明显轻于模型组。2.3 加味大承气汤对脓毒症急性肺损伤大鼠模型支气管和肺组织形态学的影响：取左肺组织切片HE染色后Olympus显微镜观察并照相，见图1。正常组：肺组织基本正常，肺泡间隔无明显增宽，毛细血管内皮细胞无明显肿胀，无出血和纤维素渗出。模型组：肺间质和肺泡内明显水肿，伴有大量红细胞渗出和纤维素沉积，肺泡间隔毛细血管内皮细胞可见高度肿胀。地塞米松组：较模型组肺泡间隔有所变窄，毛细血管内皮细胞肿胀减轻，出血明显减少，纤维素渗出相对减少。加味大承气汤处理组：较模型组肺泡间隔亦有所变窄，毛细血管内皮细胞肿胀减轻，出血减少，纤维素渗出明显减少。中西医结合组：较模型组肺泡间隔变窄，毛细血管内皮细胞肿胀明显减轻，出血明显减轻，纤维素渗出明显减少，恢复程度最佳。

图1 各组大鼠支气管和肺组织形态比较

2.4 加味大承气汤对脓毒症急性肺损伤大鼠血清Gc球蛋白和内毒素的影响：见表1。

3 讨论

脓毒症是指感染引起的全身炎症反应，其发生和发展本是一个极其复杂且迅速的病理生理过程，Gc球蛋白通过部分去糖化，改变其化学结构及功能，转化成巨噬细胞激活因子（MAF），增强炎症反应，参与损伤的免疫应答。Gc球蛋白可作为脓毒症发生机制中的一个重要观察指标，反映机体的免疫炎症反应、细胞外肌动蛋白清除储备能力、细菌内毒素清除能力，有学者认为Gc球蛋白可以作为一个急性时相反应蛋白来判断急性或严重损伤性疾病的预后[2]。

表1 各组大鼠血清Gc球蛋白和ET比较（±s）

表1 各组大鼠血清Gc球蛋白和ET比较（±s）

注：与正常组比较，△△P＜0.01；与模型组比较，**P＜0.01。

组别正常组模型组中药组地塞米松组中西医结合组Gc球蛋白（mg/ml）236.41±6.35 163.82±9.29△△210.41±5.68**221.09±4.85**230.62±9.15**内毒素（EU/mL）0.32±0.08 0.62±0.05△△0.48±0.07**0.42±0.05**0.36±0.06**

脓毒症急性肺损伤是临床危重疾病，随着感染的发生，胃肠道黏膜屏障受损，菌群紊乱，内毒素入血，进一步加重炎症反应。而加味大承气汤由大黄、厚朴、枳实、芒硝、生黄芪、麦冬、当归组成，奏通腑泻热、清营活血之功。临床研究表明大承气汤具有降低肠腔压力、促进肠道蠕动，能够清除肠细菌和腐败物，避免肠功能衰竭所导致的细菌移位，减少全身性感染疾病的发生的作用[3]。中医学认为，肺与大肠相表里，若肺气被邪毒所遏，肺失宣肃，则可见喘促吸数，邪毒传入阳明与肠道糟粕缚结，肺气不通则浊气不降，扰乱了肺与大肠相表里的生理状态而出现喘促症，这与脓毒症急性肺损伤大鼠模型中的症象一致。而加味大承气汤方全方具有泻下热结，荡涤积滞，畅通腑气作用。本研究结果显示，加味大承气汤具有抗炎作用，脓毒症急性肺损伤模型中，内毒素水平上升，Gc球蛋白下降明显，而加味大承气汤可在一定程度上改善脓毒症急性肺损伤的肺泡炎症，我们认为加味大承气汤可能通过上调Gc球蛋白水平从而降低内毒素水平，减轻炎症反应相关，其具体的机制和作用靶点有必要进行深入研究。

[1]Sykes E,Cosgrove JF.Acute renal failure and the critically ill surgical patient[J].Ann R Col lSurg Engl,2007,89(1)：22-29.

[2]Almansa R,Wain J,Tamayo E,et al.Immunological monitoring to prevent and treat sepsis［J］.Crit Care,2013,17（1）：109-111.

[3]赵伯贤.大承气汤对重症急性胰腺炎患者血清 IL-6、TNF-α和 CRP的影响[J].浙江中医杂志，2016,51（10）：713-714.

浙江省中医药科技计划项目加味大承气汤对脓毒症急性肺损伤大鼠免疫系统以及PCT、Gc-globul in调控作用的研究，编号：2015ZA103

2017-05-31