肉猪用中药饲料添加剂的抑菌和毒理学试验

葛洪伟，张文明，韩 杰，陈玥秀，谭 珊，刘立强，杨素芳

（1.广西金诚双丰农牧科技有限公司，广西 南宁 530001；2.广西大学动物科学技术学院，南宁 530004；3.广西崇左市扶绥县动物疫病预防控制中心，崇左 532100；4.广西河池市南丹县水产畜牧兽医局，河池 547200）

肉猪用中药饲料添加剂的抑菌和毒理学试验

葛洪伟1，张文明1，韩 杰2，陈玥秀3，谭 珊4，刘立强1，杨素芳2

（1.广西金诚双丰农牧科技有限公司，广西 南宁 530001；2.广西大学动物科学技术学院，南宁 530004；3.广西崇左市扶绥县动物疫病预防控制中心，崇左 532100；4.广西河池市南丹县水产畜牧兽医局，河池 547200）

为研究中药饲料添加剂的抑菌和毒理学效果，设计两种肉猪专用的中药饲料添加剂提取液进行抑菌效果试验和毒理学试验。结果表明，大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的抑菌圈直径，试验A组分别比试验B组高2.1 mm、2.1 mm、0.7 mm和1.8 mm；大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的最小抑菌浓度，试验A组分别比试验B组低0.18 mg/mL、0.25 mg/mL、0.13 mg/mL和0.10 mg/mL；大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的最小杀菌浓度试验A组分别比试验B组低0.32 mg/mL、0.25 mg/mL、0.12 mg/mL和0.24 mg/mL。急性攻毒试验和蓄积毒性试验结果表明，两组肉猪中草药饲料添加剂是无毒类物质，说明本试验设计的两种中药组方在肉猪饲养过程中可以作为中药添加剂使用，且试验A组的抑菌效果强于试验B组。

中药饲料添加剂；抑菌试验；毒理学试验

AbstractThe test was conducted to evaluate the effect of Chinese herb feed additives on bacteriostatic efficacy and toxicity.Two Chinese medicine feed additive extract for pigs of bacteriostasis experiment and toxicological test experiment were designed.The results showed that test group A was more than 2.1 mm,2.1 mm,0.7 mm and 1.8 mm compared with the test group B in diameter of bacteriostatic circle of Escherichia coli,salmonella,pasteurella and haemophilus paragallinarum.Test group A was more than 0.18 mg/mL,0.25 mg/mL,0.13 mg/mL and 0.10 mg/mL compared with the test group B in minimal inhibitory concentration (MIC)of Escherichia coli,salmonella,pasteurella and haemophilus paragallinarum.Test group A was more than 0.32 mg/mL,0.25 mg/mL,0.12 mg/mL and 0.24 mg/mL compared with the test group B in minimum bactericidal concentration(MBC).The results of acute toxicity test and cumulative toxicity test showed that two Chinese medicine feed additive extract for pigs is non-toxic substances.Two kinds of traditional Chinese medicine in this experiment can be used as a traditional Chinese medicine additive in pig breeding process,and the bacteriostatic effect of the test group A is better than test group B.

Key wordsChinese medicine feed additive；bacteriostasis experiment；toxicological test experiment

随着饲料工业的快速发展，大量人工合成的抗生素及促生长剂在饲料中添加。这些添加剂的应用确实对畜牧业的发展起到了推动作用，但是由于这些添加剂大量使用，甚至滥用，导致细菌耐药性不断增强，同时药物残留也越来越严重，对环境的污染也日益加重，直接或间接地影响着人类的健康，这已经是世界性问题。因此寻求有效的抗生素替代品，是目前畜禽健康养殖领域的研究重点和热点[1-15]。近年来，中药以其独有的天然性、多功能性、低/无药残性、低/无抗药性等优点，越来越受到重用。本试验依据中药配伍的原理，配制两组肉猪专用中药添加剂的前期提取液，并对其进行抑菌试验和毒理试验研究，验证其作为肉猪用饲料添加剂的安全性。

1 材料与方法

1.1 中药饲料添加剂前期提取物制备

根据单味中药的抑菌效果和病原菌种类，以及复方中药的君臣佐使、七情配伍、十八反十九畏等中药配伍原则，对比筛选后的中药有效成分，配制出两组中药饲料添加剂前期提取液。

A组提取液组中药组方：黄精17份、生首乌16份、黄芪12份、当归10份、皂角刺9份、党参9份、漏芦9份、路路通7份、刺蒺藜5份、通草5份。

B组提取液组中药组方：黄精18份、筋骨草19份、党参15份、黄芪14份、苍术12份、板蓝根12份、穿心莲10份。

提取液由江苏乐普生物技术有限公司协助进行提取，步骤为：按照A组提取液和B组提取液的组方称取各自原药材，首次水提加水量为药材重量的10倍，提取时间为2 h，过滤，制得水提液；再次加入适量的水进行二次水提，提取时间为1 h，过滤，制得水提液；合并两次水提液，浓缩至相对密度1.18，即可得到A组提取液和B组提取液的原液，分别为试验A组中药提取液和试验B组中药提取液。

1.2 试验时间、地点及试验动物

试验于2017年3月3日至4月16日在广西大学动物科学技术学院预防兽医学实验室进行，试验全期45 d。试验动物为体重16～18 g的成年小白鼠。

1.3 试验仪器

培养皿、低速台式水平离心机、低温冰箱、牛津杯、电热恒温水浴箱、显微镜等。

1.4 抑菌试验方法

1.4.1 药敏性试验 将培养皿灭菌后分成6个扇区，将琼脂培养基和鲜血琼脂培养基倒入培养皿，在每个培养皿内均匀加入0.5 mL已制备的病原菌稀释菌液。将牛津杯内加入100 μL药液按顺序放入6个扇区中央，37℃下培养24 h，测量抑菌圈直径。

1.4.2 最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）的测定 根据水提物的抑菌结果，采用10倍稀释法及2倍稀释法，测定最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。具体测定方法参考黄亚东2005年公布的方法进行[16]。

1.5 毒理学试验方法

1.5.1 急性毒性试验（LD50的测定） 设10000mg/kg、20 000 mg/kg、40 000 mg/kg、80 000 mg/kg 4 个剂量组和1个空白对照组，两个试验组的每个剂量组有10只小白鼠，空白对照组不给药，试验A组和试验B组的4个剂量组按设定剂量连续给药1周，每天观察小白鼠精神状态、食欲和饮水情况、中毒情况，并记录小白鼠的死亡数目[17-18]。

1.5.2 蓄积毒性试验 设1 000 mg/kg、2 000 mg/kg、4 000 mg/kg、8 000 mg/kg 4个剂量组和1个空白对照组，对照组有12只小白鼠，分3个重复，每个重复4只。试验A组和试验B组的每个剂量组有12只小白鼠，每个剂量组再分3个重复，每个重复4只小白鼠。空白对照组不给药，试验A组和试验B组的4个剂量组按设定剂量进行灌胃给药，连续给药3周，在给药期间每天观察小白鼠精神状态、食欲和饮水情况、体重情况以及中毒情况，并记录小白鼠的死亡数目。在给药停止后观察1周内小白鼠的死亡情况[19]。1.6 统计分析

试验结果用SPSS 10.0软件整理，采用One Way ANOVA进行统计分析，并用Duncan法进行多重比较，结果用平均数±标准误表示。

2 试验结果

2.1 抑菌试验效果

2.1.1 抑菌圈直径 试验A组和试验B组的大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的抑菌试验各有2个样本数，试验完成后，测定每组每个菌种的抑菌圈直径取平均值。由表1可知，两组肉猪用中药饲料添加剂的前期提取液均有一定的抑菌作用，试验A组大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌抑菌圈直径分别比试验B组高2.1 mm、2.1 mm、0.7 mm和1.8 mm，说明试验A组的抑菌效果强于试验B组。

表1 抑菌圈直径 mm

2.1.2 最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）试验A组和试验B组的大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的最小抑菌浓度（MIC）试验和最小杀菌浓度（MBC）试验各有2个样本数，试验完成后，测定每组每个菌种的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）取平均值。由表2可知，两组中药提取液的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）都较为理想，但是相比较而言，试验A组的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度较试验B组更为理想。大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的最小抑菌浓度试验A组分别比试验B组低0.18 mg/mL、0.25 mg/mL、0.13 mg/mL 和 0.10 mg/mL；大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的最小杀菌浓度试验A组分别比试验B组低0.32 mg/mL、0.25 mg/mL、0.12 mg/mL 和 0.24 mg/mL。

表2 最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）浓度 mg/mL

2.2 毒理学试验

2.2.1 急性攻毒试验 试验A组、试验B组和空白对照组试验小白鼠在急性攻毒后1周，两个试验组小白鼠与对照组相比无异常表现，急性攻毒的小白鼠在食欲状况、精神状态、饮水采食等情况均表现正常。在分别灌服A组和B组的中药提取液80 000 mg/kg后，两组急性攻毒的小白鼠均没有出现中毒死亡。按毒理学评价标准，无需测定半数致死量，即LD50＞80 000 mg/kg。急性攻毒试验结果表明，本试验所设计的肉猪中药饲料添加剂是无毒类物质。

2.2.2 蓄积毒性试验 试验A组和试验B组在给药3周后，两组小白鼠的食欲、精神、饮水等均表现正常，也未出现死亡情况，停止给药1周后，小白鼠表现正常。由表3可知，给药3周后，两个试验组与空白对照组相比，在试验初始重、结束重和平均增重方面无明显差异。

表3 蓄积毒性试验 g

3 讨论

3.1 中药的抑菌效果

唐艳等以金银花为主药和其他中药材配伍，研究所配中药的抑菌效果，结果表明，所配中药对大肠杆菌、葡萄球菌、沙门氏菌有较好的抑菌效果，尤其是设计的中药能够破坏大肠埃希氏菌细胞结构，导致细胞内容物外泄，细胞死亡[20]。宫锡坤等研究了黄连、黄芩、大黄、黄柏、苦参5种中药抑菌效果，结果表明，5味中药提取液均有较好的抑菌效果[21]。本试验结果表明，两组中药饲料添加剂前期提取液的抑菌效果和杀菌效果都较好，其中A组提取液的抑菌效果和杀菌效果要好于B组。

3.2 中药的毒理学效果

张建清等对5种中药材的急性毒性、致突变性及生殖毒性进行了毒理学试验研究，结果表明，灵芝、冬虫夏草、红芪、锁阳、杜仲这5种中药是无毒类物质[22]。吴永魁等对抗疲劳中药复方制剂进行了安全性毒理学试验，结果表明，抗疲劳中药复方制剂属于实际无毒类、无致突变性的中药制剂[23]。本试验结果表明，两组中药饲料添加剂前期提取液属于实际无毒类中药制剂，可以安全使用。

4 结论

本试验设计的提取液具有较好的抑菌杀菌作用，无毒副作用，在肉猪饲养过程中可以作为中药添加剂使用。

[1] 葛洪伟，顾文松，陈文峰，等.中国家禽[J] ，2009，31（4）：24-26.

[2] 顾文松，葛洪伟，陈文峰，等.中国家禽[J] ，2009，31（12）：64-65.

[3] 张霞，孙爱东.中国食物与营养[J] ，2009（9）：23-25.

[4] 潘宁，严仲铠，牛志多.中国中药杂志[J] ，1992，17（3）：166.

[5] 陈志歆，李萍，金怡.黑龙江医药[J] ，1996，9（1）：26.

[6] 刘晓庚，陈梅梅.粮食与食品工业[J] ，2003（3）：25-29.

[7] 陆海英，葛洪伟，唐燕飞，等.饲料博览[J] ，2014（9）：45-47.

[8] 王珏，李升和，王群，等.中国农学通报[J] ，2009，21（5）：63-66.

[9] 熊春梅，郭爱伟，吴培福，等.江西农业大学学报[J] ，2011，33（6）：949-954.

[10] 李庆明，莫开菊.湘南民族学报[J] ，2008，26（2）：212-216.

[11] 陈长武，昌友权，曲红光，等.食品科学[J] ，2005，26（9）：465-467.

[12] 曾明，李守汉，郭层城，等.中国体育科技[J] ，2005，41（2）：117-119.

[13] 郑晓珂，王小兰，冯卫生.中国药理与临床[J] ，2008，24（3）：81-82.

[14] 王春梅，王海莉，李贺.北华大学学报[J] ，2007，8（2）：121-123.

[15] 吴艳梅，顾文松，顾娟.北方牧业[J] ，2011（5）：29-30.

[16] 黄亚东，王仁雷，孔庆新，等.中国乳品工业[J] ，2005，33（11）：27-29.

[17] 杨猛，王仁雷，黄亚东.江苏农业科学[J] ，2010（2）：227-228.

[18] 关立增，鞠玉琳.黑龙江畜牧兽医[J] ，2005（2）：68.

[19] 潘玉善，苑丽，胡功政，等.江苏农业科学[J] ，2010（2）：225-227.

[20] 唐艳，张宾，霍健聪，等.浙江海洋学报（自然科学版）[J] ，2012，31（2）：147-149.

[21] 宫锡坤，陈星灿，张蓬.中国消毒学杂志[J] ，1998，15（2）：106-108.

[22] 张建清，苏诚玉，权玉玲，等.甘肃医药[J] ，1997（5）：244-246.

[23] 吴永魁，李乾学，张祚新，等.吉林农业大学学报[J] ，2008，30（1）：93-97.

（编辑：富春妮）

Bacteriostasis Experiment and Toxicological Test Experiment of Chinese Herb Feed Additive for Pig

GE Hongwei1,ZHANG Wenming1,HAN Jie2,CHEN Yuexiu3,TAN Shan4,LIU Liqiang1,YANG Sufang2
(1.Guangxi Jinchengshuangfeng Agriculture and Animal Husbandry Science and Technology Co.,Ltd.,Nanning 530001,China;2.College of Animal Science and Technology,Guangxi University,Nanning 530004,China;3.Animal Disease Control and Prevention Center of Fusui in Guangxi,Chongzuo 532100,China;4.Bureau of Animal Husbandry of Nandan County Hechi City,Hechi 547200,China)

S816.7

A

1002-1957(2017)05-0017-03

2017-08-11

广西南宁市兴宁区2017年度科学研究与技术开发项目[南兴科发通（2017）8号]

葛洪伟（1978-），男，江苏丹阳人，畜牧师，硕士，研究方向为畜禽遗传育种和标准化健康养殖.E-mail:ghwxyl@163.com

杨素芳（1972-），女，广西全州人，教授，博士，研究方向为畜禽遗传育种和标准化健康养殖.E-mail:ysfang3511@qq.com