抗体滴度与更换吸头的相关性报告

文│吕艳秋 黄东风 姚学军 邱海莲 刘洁 高晓波 张亦驰（北京市昌平区动物疫病预防控制中心）

抗体滴度与更换吸头的相关性报告

文│吕艳秋 黄东风 姚学军 邱海莲 刘洁 高晓波 张亦驰（北京市昌平区动物疫病预防控制中心）

目前，基层兽医实验室主要采用血凝抑制（HI）试验（微量）方法检测新城疫免疫抗体滴度。此方法过程：用微量移液器在96孔V型微量反应板的1～11孔加入0.025毫升等渗磷酸盐缓冲液（PBS），第12孔加入0.05毫升PBS；吸取0.025毫升血清加入第1孔内，充分混匀后吸取0.025毫升于第2孔，依次对倍稀释至第10孔，从第10孔吸取0.025毫升弃去，第11孔为阳性对照，第12孔为PBS对照；1～11孔均加入含4个血凝单位（4HAU）混匀的病毒抗原液0.025毫升，室温（约20℃）静置至少30分钟；每孔加入0.025毫升体积分数为1%的红细胞悬液混匀，微量振荡器震荡1分钟，静置约40分钟（室温20℃）。当PBS对照孔红细胞呈明显纽扣状沉于孔底时，即可判定。

试验中我们发现，移液器吸头吸出血清样本时，吸头外壁会粘黏上血清。如果利用同一个吸头将血清样本加入96孔V型微量反应板，再将混合液依次倍比稀释，那么在吸头外壁上粘黏的血清将与PBS液混合，这样就导致血清样本与PBS液的体积不一致。但是，如果将血清样品加入96孔V型微量反应板时不与PBS液面接触，血清样本的体积与PBS液的体积是等量的。针对这一问题，笔者进行了一项对比试验。以期检验出血凝抑制试验微量法检验过程中更换吸头，是否会影响HI抗体效价（滴度）。

一、材料与方法

1.样本。被检鸡血清来自北京市昌平区3家养殖户。随机抽检49只健康成年鸡的血清。

2.检测分组。

（1）试验一组。用移液器将吸头伸入血清样本储存管中吸出0.025毫升血清，再将血清加入96孔V型微量反应板后，使用同一个吸头参与混匀血清和PBS液，并依次倍比稀释血清样本。

（2）试验二组。用移液器将吸头伸入血清样本管中吸出0.025毫升血清，打入96孔V型微量反应板后（吸头不接触液面），弃去吸头，另取一支新的吸头在96孔V型微量反应板中混匀血清和PBS液，并按照操作步骤依次倍比稀释血清样本。

表1 鸡血清NDV-HI试验抗体滴度检测结果统计

表2 鸡血清NDV-HI试验抗体检测结果方差分析

以上两个试验组检测的血清样本相同。

3.检测试剂。

新城疫（NDV）抗原批号：20150201，新城疫（NDV）阳性血清批号：20151003。以上试剂均购自哈尔滨维科生物技术开发公司。

4.检测方法。

室温条件下，将采集的鸡血液离心，分离血清，血凝抑制（HI）试验法测定抗体效价，具体操作参照GB/T 16550-2008 新城疫诊断技术中6血凝抑制试验进行。

5.检测结果判定。

以完全抑制4个HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。

二、检测结果

试验一组和试验二组均采用血凝抑制试验方法检测抗体滴度，采用方差分析，结果统计分析见表1～2。

三、结果与分析

从试验分析结果可以看出，采用NDV-HI试验检测鸡血清抗体，从血清管内吸出血清和混合稀释过程使用同一支吸头与稀释前更换吸头检测抗体效价，经t检验，P值为0.46 （P＞0.05）。方差分析结果，鸡血清采样在吸出血清和稀释过程使用同一支吸头和更换吸头的抗体效价两组差异不显著。因此，实验室利用血凝抑制试验（微量法）检测鸡血清样品在稀释前，不更换吸头，不会影响新城疫抗体效价结果。