参威骨痹片的定性鉴别研究

余晓玲+袁小淋+李争艳+冮顺奎+李月亭+陈坤

摘要：目的建立参威骨痹片的定性鉴别方法。方法采用薄层色谱法对处方当归、威灵仙、川芎、白芍、独活进行定性鉴别。结果薄层鉴别色谱斑点清晰、专属性强，阴性对照无干扰。结论该方法专属性强、重现性好、操作简便，可用于参威骨痹片的定性鉴别。

关键词：参威骨痹片；薄层鉴别；当归；威灵仙；川芎；白芍；独活

中图分类号：R285.5文献标志码：A文章编号：1007-2349（2017）09-0062-03

【Abstract】Objective： To establish a qualitative method for identification of Shenwei Gibi Tablets. Methods： Thin layer chromatography was used to qualitatively identify Angelica， Radix Clematidis， Ligusticum， Paeoniae and Angelicae pubescentis. Results： In thin layer identification chromatography， the spots were clear， with strong specificity and negative control without interference. Conclusion： The method has strong specificity， good reproducibility and simple operation， and can be used for the qualitative identification of Shenwei Bibi Tablets.

【Key words】Shenwei Bibi tablet， thin layer identification， Angelica， Radix Clematidis， Ligusticum， Paeoniae， Angelicae pubescentis

参威骨痹片为昆明市中医医院生产，由云南省名中医冮顺奎经验方研制、用于治疗骨性关节炎的一种中药制剂，由小红参、威灵仙等组成，具有滋补肝肾，祛风除湿、活血止痛的功能，经多年临床使用证实对骨性关节炎有确切疗效，症状改善明显，并获持续性改进，有效率达82%[1]。为更好的对该制剂进行质量控制，本研究采用薄层色谱法，建立了参威骨痹片中当归、威灵仙、川芎、白芍、独活的薄层鉴别方法，为参威骨痹片的质量标准的完善、充实提供了依据。

1仪器与试药

超声波清洗仪（200W，40kHz）昆山市超声仪器有限公司）；FB124自动内校电子分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；双槽展开缸（20cm×10cm）；硅胶G高效板、硅胶GF254高效板（青岛海洋化工厂）；参威骨痹片（昆明市中医医院自制，批号150321，150403，150511）当归、威灵仙、川芎、独活对照药材（编号为：120927-200810、121181-200101、120918-200809、120940-200708），芍药苷对照品（编号为：110736-201136）以上对照品及对照药材均购自中国药品生物制品检定所。

2方法与结果

2.1当归薄层鉴别[2]取本品粉末5 g，加1%碳酸氫钠溶液50 mL，超声处理10 min，离心，取上清液用稀盐酸调节PH值至2～3，用石油醚振摇提取3次，每次20 mL，合并石油醚液，挥干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液[3]。另取当归对照药材，加同法制成当归对照药材溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙醚-乙酸乙酯-甲酸（10：50：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性样品无此斑点。色谱图见图1。

2.2威灵仙薄层鉴别取本品粉末5 g，加乙醇50 mL，加热回流2 h，浓缩至20 mL，加盐酸3 mL，加热回流1 h，放冷，用石油醚（60～90℃）振摇提取3次，每次20 mL，合并石油醚液，挥干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液[4]。另取威灵仙对照药材，加同法制成威灵仙对照药材溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20：3：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点，阴性样品无此斑点。色谱图见图2。

2.3川芎薄层鉴别[5]取本品粉末5 g，加乙醚30 mL，加热回流1h，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材，加同法制成川芎对照药材溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（3：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性样品无此斑点。色谱图见图3。

2.4白芍薄层鉴别取本品粉末约10 g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40 mL，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4 h，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10 mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次30 mL，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次50 mL，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水10 mL超声使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径为2 cm，柱高为20 cm），以水50 mL洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30 mL洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇100 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液[6]。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg溶液，作为对照品溶液。照《薄层色谱法检验标准操作程序》（附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点，阴性样品无此斑点。色谱图见图4。endprint

2.5独活薄层鉴别取本品粉末5 g，加0.1 mol/L氢氧化钠溶液50 mL，边加边搅拌，静置1 h，滤过，滤液用稀盐酸调节PH值至3～4，用石油醚振摇提取3次，每次30 mL，合并石油醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取独活对照药材，加同法制成独活对照药材溶液。照薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取上述溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（7：3）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视[7]。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性样品无此斑点。色谱图见图5。

3结果与讨论

本品由小红参、威灵仙、独活等14味药组成，成分较为复杂，本次实验中对小红参、威灵仙、茯苓、独活、秦艽、川芎、当归、白芍、桂枝、桑寄生、怀牛膝、防风、杜仲等TLC鉴别方法进行了研究，其中小红参、秦艽、桑寄生、防风未能找到合适的TLC鉴别方法，而茯苓、桂枝、怀牛膝、杜仲的TLC鉴别斑点不够清晰且重现性不好，因此，本实验对威灵仙、川芎、白芍、当归、独活五味药进行了TLC鉴别。结果重复性和专属性均良好、方法简便；在白芍薄层鉴别中，曾参考《中国药典》2010年版方法采用三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）为展开剂，结果供试品斑点不明显且不清晰。经摸索，用调整后的方法结果斑点清晰、重复性好。

参考文献：

[1]李律宇，杨春艳，侯敏，等.参威骨痹汤治疗肝肾亏虚、寒湿痹阻型骨关节炎103例临床观察.云南中医学院学报.2016，40（2）：67-69+84.

[2]肖霞，曹俊凯.人参当归颗粒的薄层鉴别.中国实用医药[J].2013，7（9）：249-250.

[3]谢仲德，方应权，李文烈，等.当归调经胶囊的薄层鉴别与阿魏酸、芍药苷的测定.中成药[J].2013，35（2）：427-430.

[4]曾聪彦，张瑜，高玉桥，等.骨科洗剂2号方中桂枝、独活、威灵仙的薄层色谱鉴别.山西中医学院学报[J].2006，7（4）：49-50.

[5]冯树倩，李映辉.舒胸片中红花及川芎的薄层鉴别.中国医药导报[J].2010，7（1）：60-61.

[6]張绍轩，张红岩，司云珊，等.痛经片中丹参、香附及白芍的薄层色谱鉴别.长春中医药大学学报.2009，25（6）：954-955.

[7]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].一部.北京：中国医药科技出版社.2010：246.endprint