妊娠合并糖尿病与母胎缺氧诱导因子HIF-1α的关系

连亚婉吴青颜建英

1.福建省惠安县医院妇产科 362100；2.福建省立医院妇产科 350001；3.福建省妇幼保健院妇产科 350001

妊娠合并糖尿病与母胎缺氧诱导因子HIF-1α的关系

连亚婉1吴青2颜建英3*

1.福建省惠安县医院妇产科 362100；2.福建省立医院妇产科 350001；3.福建省妇幼保健院妇产科 350001

目的：探讨母血清HIF-1α、胎盘HIF-1α mRNA与妊娠合并糖尿病血糖控制情况的关系。方法：收集37¯40周孕产妇共75人，其中糖尿病合并妊娠组（n=15人），妊娠期糖尿病组（n=30人）和正常妊娠孕妇（n=30人），ELISA方法测定母血清HIF-1 α，RT-PCR法检测胎盘HIF-1α mRNA水平。结果：3组患者年龄、孕周的比较无统计学差异。糖尿病合并妊娠组血清HIF-1α、胎盘HIF-1α mRNA为78.42±11.85pg/L、0.43±0.12，明显大于妊娠期糖尿病组（58.68±18.10 pg/L，P=0.000、0.23±0.06，P=0.000）和正常糖耐量组（47.96±12.79 pg/L，P=0.000、0.19±0.08，P=0.000）。妊娠期糖尿病组血清HIF-1α、胎盘HIF-1α mRNA大于正常妊娠组，P值分别为0.01、0.021，差异有统计学意义。结论：糖尿病合并妊娠组血糖控制差，血清HIF-1α、胎盘HIF-1α mRNA最高，母血清HIF-1α能反映妊娠合并糖尿病的严重程度。

糖尿病合并妊娠；妊娠期糖尿病；缺氧诱导因子

妊娠合并糖尿病，包括糖尿病合并妊娠（Pregestational diabetes mellitus，PGDM）和妊娠期糖尿病（Gestational diabetes mellitus，GDM），前者为已有糖尿病的患者妊娠，而妊娠期糖尿病是指在妊娠期首次发生或发现的对葡萄糖的不耐受，其特征为高血糖，对母儿的危害程度与血糖水平密切相关[1]。

高血糖导致葡萄糖氧化及氧耗增加，进而导致胎儿体内血氧消耗过度而缺氧[2]。缺氧诱导因子（hypoxia inducible factor，HIF）是统属bHLH.PAS家族，分为HIF-1、HIF-2、HIF-3，HIF-1是当前唯一发现在特异性缺氧状态下发挥活性的敏感的转录因子，它与靶基因结合，如促红细胞生成素、血管内皮生长因子、血红素加氧酶-1等基因，通过促进靶基因转录，参与机体对缺氧的反应，引起多种病理生理反应[3，4]。

本文旨在研究母血清HIF-1α、胎盘HIF-1α mRNA与妊娠合并糖尿病血糖控制情况的关系，初探母血清HIF-1α能否反映妊娠合并糖尿病的严重程度，并为妊娠合并糖尿病的机制研究做铺垫。

1.资料与方法

1.1 收集2014年6月至2015年3月到惠安县医院妇产科、福建

省立医院妇产科就诊的 37～40周孕产妇。所有研究对象孕周计算无误。分组如下：

A组：糖尿病合并妊娠组（n=15人），孕前或早孕期诊断糖尿病，孕期未监控血糖者或者血糖控制不良者。

B组：妊娠期糖尿病组（n=30人），孕24-28周，糖耐量试验诊断妊娠期糖尿病的患者；孕期严格监控血糖，血糖控制良好者。C组：正常妊娠孕妇（n=30人），正常糖耐量组。

1.2 纳入标准和排除标准

①全部对象都是单胎自然妊娠。

②妊娠期糖尿病、糖尿病合并妊娠的诊断必须符合标准。糖尿病合并妊娠的诊断：早孕期或孕前行FPG检查，禁食8-12小时，最后查空腹血糖如FPG≥7.0 mmol/L，或HbA1C≥6.5，或任意血糖≥11.1mmol/L，且有糖尿病症状。妊娠期糖尿病的诊断：孕24-28周，禁食8-12小时，次日晨在5分钟内口服75 g葡萄糖，OGTT诊断界值为空腹、服糖后1h和2h的血糖值分别为5.1mmol/L，10.0mmol/L和8.5mmol/L。

③入院患者签署知情同意书，遵循知情和自愿的原则。

④排除孕妇同时存在妊娠期或分娩期的并发症，例如前置胎盘、胎盘早剥、胎儿窘迫等疾病。

⑤排除孕妇同时合并有外科的或内科其他疾病，如原发性高血压、心脏病、肾炎、肝炎、贫血等。

1.3 血糖控制的评价

①血糖控制良好标准：孕28周以后监测血糖轮廓（三餐后2小时、睡前），血糖正常次数达 80%以上血糖控制标准：餐前血糖＜5.6mmol/L，餐后2小时血糖＜6.7mmol/L。

②血糖控制不良标准：在孕28周以后每周血糖轮廓（三餐后2小时、睡前）正常次数少于 80%；或孕期未监测血糖，入院时查监测血糖正常次数少于80%。

1.4 实验方法

①血清 HIF-1α检测 所有患者均于清晨空腹抽取外周静脉血5ml，3000r/min，离心5min，取上层血清于试管中，-70℃保存。采用ELISA方法测定母血清 HIF-1α，试剂盒购自北京中杉金桥生物工程有限公司，严格按操作说明书测定。

②胎盘 HIF-1α mRNA检测 从胎盘母体面脐带对侧取约100mg胎盘组织，采用RNA抽提及逆转录试剂盒（Invitrogen，USA），并且检测RNA的完整性及纯度。构建荧光PCR反应体系25μL，含2×Power SYBR® Green PCR Master Mix 12.5μL、上游引物 F（10pmol/ μL）0.5μL、下游引物 R（10pmol/μL）0.5μL（和HIF-1α引物：5 ’ CCATTAGAAAGCAGTTCCGC3 ’ ， 5 ’TGGGTAGGAGATGGAGATGC3’；产物194bp；β-actin引物：5’TTCCAGCCTTCCTTCCTGG3’，5’TTGCGCTCAGGAGGAGCAAT3’产物224 bp）（引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成）、cDNA模板2μL、ddH2O 9.5μL。反应条件为：95℃3分钟，然后 94℃50秒，55℃45 秒，72℃1分钟共 45 循环。采用BIO-RAD全定量PCR仪检测。以β-actin基因作为内参照，分析各反应的荧光强度得出CT值，并绘制β-actin 基因的标准曲线，参照标准曲线，得出目的基因的相对反应起始拷贝数。阴性对照以蒸馏水加入扩增体系，以β-actin基因作为内参照进行 PCR，用分析各反应的荧光强度得出CT值，并绘制 β-actin基因的标准曲线，得出目的基因的相对反应起始拷贝数。

1.5 统计学方法

应用 SPSS统计软件，正态分布数据以 x ± s表示，糖尿病合并妊娠组、妊娠期糖尿病组和正常糖耐量组两两比较用两独立样本的t检验，P ＜ 0.05为差异有统计学意义

2.结果

3组患者年龄、孕周的比较无统计学差异，P＞0.05。糖尿病合并妊娠组血清HIF-1α、胎盘HIF-1α mRNA为78.42±11.85pg/L、0.43±0.12，明显大于妊娠期糖尿病组（58.68±18.10 pg/L，P=0.000、0.23±0.06，P=0.000）和正常糖耐量组（47.96±12.79 pg/L，P=0.000、0.19±0.08，P=0.000）。妊娠期糖尿病组血清 HIF-1α、胎盘 HIF-1 α mRNA大于正常糖耐量组，P值分别为0.01、0.021，差异有统计学意义。见表1。

表1 3组一般资料及血清HIF-1α、胎盘HIF-1α mRNA的比较

3.讨论

妊娠期糖尿病孕妇发生死胎风险是正常孕妇的 4-6倍，新生儿死亡的风险是正常孕妇的 2-4倍。大多数围生儿死亡的原因不明，临床及实验研究均认为高胰岛素、高血糖导致胎儿宫内缺氧，可能是妊娠期糖尿病不良围生结局的原因[5，6]。

对于宫内缺氧状况的评估有多种方法，胎盘组织缺氧病理改变、EPO、HIF-1α，VEGF等均被认为是胎盘胎儿宫内缺氧的标志物或方法，但是没有统一的金标准。缺氧诱导因子（hypoxia inducible factor，HIF）是统属 bHLH.PAS家族，根据不同的亚单位结构分为HIF-1、HIF-2、HIF-3，目前 HIF-1是国内外研究的热点。HIF-1是当前唯一发现在特异性缺氧状态下发挥活性的敏感的转录因子，因此其较EPO具有更高的研究价值；其广泛表达于哺乳动物及人体各种组织细胞，妊娠期滋养细胞和胎盘也存在 HIF-1表达和分泌。HIF-1由α亚基和β亚基组成，HIF-1α是主要活性调节因子，它与靶基因结合，如促红细胞生成素（EPO）、血管内皮生长因子（VEGF）、血红素加氧酶（HO）-1等基因，通过促进靶基因转录，参与机体对缺氧的反应，引起多种病理生理反应[3，4]。

HIF-1作为转录因子，调控多种基因的表达，进而参与多项生理过程包括EPO的生成、铁转运、血管生成（VEGF的表达）和糖代谢等等，HIF是胚胎发育的重要调控因子。妊娠期母体高血糖状态导致氧耗增加，胎儿高血糖、高胰岛素状态，使葡萄糖氧化代谢增多，ROS相应增多，进而触发HIF的产生[7，8]。所以，高血糖、高胰岛素血症导致缺氧状态，进而对胎儿产生一系列围生期的多脏器影响，而HIF可能是这些病理生理改变的重要路径。

本实验糖尿病合并妊娠组血清 HIF-1α、胎盘 HIF-1α mRNA为明显大于妊娠期糖尿病组和正常糖耐量组。妊娠期糖尿病组血清HIF-1α、胎盘 HIF-1α mRNA大于正常糖耐量组，且差异有统计学意义。可见糖尿病合并妊娠组血糖控制最差，其血清HIF-1α、胎盘HIF-1α mRNA最高，母血清HIF-1α能反映妊娠合并糖尿病的严重程度，且与胎盘HIF-1α mRNA具有较好的一致性。

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1672-5018（2017）02-017-2