肉鸡安卡拉病与法氏囊混合感染的诊治*

张玉霞，袁小远，孟凯，李莉，亓丽红，艾武，王友令

（山东省农业科学院家禽研究所，山东济南250100）

肉鸡安卡拉病与法氏囊混合感染的诊治*

张玉霞，袁小远，孟凯，李莉，亓丽红，艾武，王友令**

（山东省农业科学院家禽研究所，山东济南250100）

2015年以来在北方肉鸡中流行一种以心包积液、肝脏肿大出血为特征的疾病，俗称安卡拉病，也称心包积液综合征，主要感染1～3周龄商品白羽肉鸡、817肉鸡、麻鸡，青年鸡和产蛋鸡感染后症状较轻，给当前家禽养殖业带来巨大危害。研究认为该病毒与包涵体肝炎同属于Ⅰ亚群禽腺病毒，目前认为血清2型、3型、4型、5型、8型等血清型是鸡包涵体肝炎的主要病原体，而该病毒为血清4型[1-3]。有报道称，传染性法氏囊病毒和鸡贫血因子病毒可强化腺病毒的毒力，腺病毒具有作为继发病原的作用[4]。

2016年7月，山东聊城某817肉鸡场约5000只3周龄鸡突然发病死亡，7d左右死亡率达到70%。我们对发病鸡群的临床症状、剖检变化及饲料成分等进行了详细的分析研究，结合分子生物学诊断最终确诊为鸡腺病毒Ⅰ群血清4型与传染性法氏囊病毒混合感染。

1 发病概况及剖检变化

发病初期，有些鸡出现精神沉郁、缩脖、畏冷、聚堆、嗜睡，羽毛脏乱无光泽，见图1。食欲降低，鸡群普遍腹泻，拉黄白色稀便等。发病鸡常在24～48h内死亡，病程约7d，死亡率可达70%。

剖检可见典型的肝脏肿胀、发黄、质脆，有坏死灶。心包内积有明显的心包积水，颜色淡黄色澄清，见图2，有的呈现胶冻样症状，部分鸡只腺胃与肌胃交界处出血，法氏囊黄色胶冻样水肿，有粘液，腿肌与胸肌出血。根据以上发病情况及剖检变化，怀疑为腺病毒与传染性法氏囊病毒混合感染。

图2 心包积液明显积水

2 实验室诊断

2.1 病毒分离按常规方法[5]，以无菌操作取具有典型症状的病鸡的肝脏、法氏囊研磨成匀浆，用无菌生理盐水按1：3稀释，反复冻融2～3次后以3000r/min离心10min，取上清液2ml，用45μm注射滤器过滤，按2000U/ml各加入青霉素、链霉素置4℃冰箱过夜作用。无菌检查合格后，分别用法氏囊单因子阳性血清、鸡腺病毒Ⅰ群血清4型单因子阳性血清与各1ml上清液在38℃下中和1h，尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚、卵黄囊接种7日龄SPF鸡胚各5枚，0.1ml/枚，于37℃温箱培养。每天照胚4次，观察并记录死亡情况，收获死亡鸡胚尿囊液做进一步鉴定（表1）。

表1 病毒分离鸡胚接种结果

结果显示，分别与两种不同单因子阳性血清中和过的病毒组鸡胚均出现不同程度的胚体病变和死亡。鸡腺病毒Ⅰ群血清4型单因子血清中和组死胚较早，于56～96h之间全部死亡，胚体发育停滞，水肿出血，绒膜尿囊膜水肿出血，较符合法氏囊病毒感染鸡胚后产生的病变。法氏囊单因子血清中和组鸡胚死亡出现较晚，鸡胚可见发育不良，普遍较正常日龄矮小，体表潮红，鸡胚肝脏肿大，可见黄白色坏死，与腺病毒接种症状较一致。

2.2 分子生物学诊断针对高度疑似腺病毒与法氏囊病毒混合感染的情况，根据参考文献[6-7]和GenBank发表的腺病毒序列和法氏囊病毒序列，设计了两种病毒的特异性引物，分别为腺病毒p1：5'-TTCGACCCCATGACGCGCCAGG-3';P2: 5'-GCGAAAGGCGTACGGAAGTAAGC-3'，预计扩增503bp大小的片段。法氏囊病毒A：RP1 5'-AGAGGGTGCCACGCTATT-3',RP3 5'-TCCAGCCACATGAACAC-3'，用于RT-CR法扩增453bp长度的特定基因片段；以常规方法试剂盒提取病毒DNA，建立扩增两种病毒的PCR和RT-PCR方法，最终获得了两种病毒预期的目的片段，因此该病例确诊为腺病毒与法氏囊病毒混合感染。

3 防治措施

3.1 传染性法氏囊病毒主要侵害鸡的中枢免疫器官法氏囊，传播迅速、发病率及死亡率均较高，病程短，病毒抵抗能力强，能在鸡舍内存活100d以上，对氯仿、乙醚、胰蛋白酶不敏感，耐紫外线。目前已知有两个血清型，即1型和2型。两型病毒抗原相关性小于10%，相互交叉保护作用低。对鸡有致病力的主要为1型。接种鸡胚一般在3～7d死亡，病变以发育停滞、水肿出血为主。本病的根本措施在于环境消毒，加强卫生管理，防范野毒感染，并根据本病的流行特点和管理条件，选择最佳时机进行免疫。一旦发生本病，采用高免卵黄抗体或血清进行紧急治疗，效果比较明显。

3.2 研究认为腺病毒在全世界家禽和野禽体内广泛存在，症状一般比较轻微或不表现感染症状，但出现并发感染时，该病毒可成为条件性病原[8]，因此要加强管理，减少其他疾病感染等诱因出现，1群禽腺病毒包括5个种12个血清型，其中心包积水-肝炎综合征一般由血清4型病毒导致。近年来在中国大陆地区发病报道有逐渐增加趋势，应引起高度重视。

3.3 由于传染性贫血因子与传染性法氏囊病毒会增强腺病毒的致病性，因此应控制或清除这两种病毒在鸡场的混合感染。腺病毒垂直传播能力强，在引种过程中，要避免从疫区引进种蛋和雏鸡，并加强检疫和防疫。另外也要防范水平传播的可能性，鸡场要重视养殖场的生物安全，养殖者必须做好隔离消毒工作，加强饲养管理，减少忽冷忽热、断喙、突然换料等可控的应激因素。选用有效消毒药搞好环境卫生的消毒，同时减少各种应激因素，使鸡群在良好的饲养条件下处于最佳的生长发育和生产状态，尽量降低损失，才能增加经济效益。在疫病流行严重的地区，采用本场发病鸡的肝脏制备自家苗加强免疫具有较好的防控效果。

[1]Saif Y M，编.苏敬良,高福,索勋,译.禽病学[M].北京:中国农业出版社，2005.

[2]何秀苗,张科,秦爱建,等.Ⅰ群禽腺病毒江苏分离株(FAVⅠ-JS)的分离鉴定[J].中国预防兽医学报, 2005,27(1):42-45.

[3]张玉霞,袁小远,王友令.鸡腺病毒Ⅰ群血清4型的分离鉴定与防治[J].家禽科学,2016(10）:29-30.

[4]牛登云,沈元,王蕊,等.2015年我国Ⅰ群禽腺病毒分子流行病学调查[J].中国家禽,2016,38(9):65-68.

[5]殷震,刘景华.动物病毒学[M].北京:科技出版社, 1997.

[6]于可响,黄兵,凌红丽,等.山东省血清4型禽腺病毒的分离鉴定[J].中国动物传染病学报,2016(5):1-5.

[7]荣俊,余龙江.鸡传染性法氏囊病的RT-PCR诊断方法的研究[J].华中科技大学学报(自然科学版), 2001,29(s1):61-64.

[8]刁有祥.Ⅰ群禽腺病毒感染的流行情况与防控[J].北方牧业,2016(10):21-21.

华南生物禽流感病毒H5亚型灭活疫苗(D7株+rD8株)获批

2017年8月14日，由华南农业大学、中国兽医药品监察所、广州市华南农大生物药品有限公司(以下简称“华南生物”)共同研发的禽流感病毒H5亚型灭活疫苗(D7株+rD8株)通过农业部兽药产品批准文号的审批，喜获得农业部核发的兽药产品批准文号——兽药生字190912293；商品名禽流感病毒H5亚型灭活疫苗(D7株+rD8株)“禽盾”适用于水禽和家禽，是针对多分支的H5亚型禽流感的二价灭活疫苗，于2017年3月获得农业部新兽药注册证书[(2017)新兽药证字10号]。该产品选用D7株和rD8株作为疫苗毒株，其中D7株是华南农业大学廖明教授团队于2007年广东发病鸭群分离，为H5和H9天然重组而产生的天然野毒株，对不同时期的Clade2.3.2均有良好的保护力，对水禽保护效果良好；rD8株为重组病毒，是以D7株为骨架，选用目前流行的H5N1亚型禽流感病毒CG1株(Clade 2.3.4.4)作为HA基因供体利用反向遗传技术获得，为全禽源禽流感病毒，具有高效的鸡胚增殖能力，以及良好的家禽免疫良性。针对目前国内流行的Clade 2.3.4.4和Clade 2.3.2.1分支的H5亚型禽流感病毒，产品的抗原性可以实现全覆盖，具有良好的交叉保护作用，对鸡和水禽均有良好的安全性和免疫效力。经过多次临床试验证明，禽流感病毒H5亚型灭活疫苗(D7株+rD8株)可有效预防家禽感染H5亚型禽流感。

禽流感病毒H5亚型灭活疫苗(D7株+rD8株)“禽盾”具备全禽源通用、针对性更强、免疫原性好、抗体水平高、一针免疫广谱保护的五大特点及其良好的临床试验效果，并且结合多项工艺的优化及生产质量的严格把控，使该产品更具有安全可靠、质量稳定等优势。

“禽盾”批准文号的获批，完善了公司禽流感疫苗产品结构，也将会给广大养殖企业带来新活力与新希望。华南生物公司也将始终秉承着“至臻至忱，至新至用”的经营理念，严把产品质量关，力争不断提供优质高效的禽流感疫苗，为养殖户提供更多优质的产品与服务，为动物健康保驾护航。

S858.31

C

1673-1085（2017）09-0029-03

2017-08-19

1.山东省重点研发计划项目（2016GNC110009）；2.山东省2017年度农业重大应用技术创新项目“肉鸡呼吸道疾病的监测和防控技术集成与示范”；3.山东省农业科学院农业科技创新工程“主要畜禽疫病监测和预警”，项目编号：CXGC2016A10。

**通讯作者：王友令，博士，副研究员，主要从事家禽疫病及分子流行病学的研究。Email：Wangyouling71@163.com。