长春新碱对人舌癌Tca8113细胞生物学行为的影响

明智慧 单 笑 韩昕彤

(吉林大学第一医院口腔科，吉林 长春 130021)

长春新碱对人舌癌Tca8113细胞生物学行为的影响

明智慧 单 笑1韩昕彤1

(吉林大学第一医院口腔科，吉林 长春 130021)

目的探讨外源性长春新碱(VCR)对人舌癌细胞株Tca8113的生物学行为。方法应用细胞培养技术观察不同浓度的VCR对Tca8113细胞的增殖抑制作用，MTT法检测Tca8113细胞的增殖抑制率，流式细胞仪检测不同浓度的VCR对Tca8113细胞增殖周期进程的影响，电子显微镜观察 Tca8113细胞亚细胞结构改变。结果不同浓度的VCR对Tca8113细胞增殖均有抑制作用，其细胞增殖数量显著低于对照组，抑制率呈明显的剂量依赖性。流式细胞仪结果显示VCR主要作用于细胞周期的M期，从而使细胞有丝分裂停止于细胞中期，促进细胞凋亡，电子显微镜下可见VCR作用后的Tca8113细胞线粒体、纺锤体、微管等结构改变，可见凋亡小体。结论VCR抗肿瘤效能主要取决于自身的药物浓度及作用时间、给药途径等，以提高其VCR的生物利用度。

Tca8113细胞；长春新碱；细胞周期；凋亡

舌癌是口腔恶性肿瘤最常见的类型，发病率呈逐年上升趋势，且有年轻化倾向〔1〕。随着医疗技术的提升，越来越多的靶向药物投入到临床实验中，肿瘤的治疗不再墨守成规，取而代之的是有针对性的个性化治疗方案。在肿瘤细胞学的发展过程中，越来越多的学者从细胞水平对治疗方案有效性进行评估，这将成为日后评价疗效的重要模式〔2〕。本研究探讨长春新碱(VCR)体外对Tca8113细胞增殖抑制率、细胞周期进程及凋亡率。

1 材料与方法

1.1细胞及试剂 人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株购于中国科学院上海细胞库，噻唑蓝(MTT)试剂、RPMI1640培养基购于美国Sigma公司，VCR由我院药剂科提供(北京四环制药有限公司)。

1.2MTT比色法 参照文献〔3〕进行，略加改进。

1.3流式细胞术 细胞培养及分组同1.2，本处操作用25 ml培养瓶替代96孔塑料培养板。

1.4透射电子显微镜技术 细胞培养及分组同1.3，完成上述操作后，分别收集不同浓度的VCR作用后的Tca8113细胞悬液于锥形离心管内，离心沉淀1 000 r/10 min，弃去上清，将细胞沉淀物经2.5%戊二醛前固定，1%锇酸后固定，梯度酒精脱水，环氧树脂包埋，超薄切片，醋酸铅-铀双重染色，透射电子显微镜观察。

1.5统计学方法 应用SPSS17.0软件行t检验。

2 结 果

2.1MTT结果 0、10、20、40 μg/ml组A值1.34±0.15、1.12±0.11、0.83±0.18、0.72±0.22；抑制率分别为16.4%、38.1%、46.3%。不同浓度的VCR对Tca8113细胞增殖均有抑制作用，且呈正相关性，与对照组相比差异显著(P<0.01)。

2.2透射电子显微镜结果 不同浓度VCR药物作用Tca8113细胞后，可见胞质内有存在大量空泡，存在明显的线粒体肿胀，细胞和染色质可见凝集及趋边，能见到凋亡小体。见图1。

图1 透射电子显微镜结果(×5 000)

2.3流式细胞术结果 不同浓度的VCR药物作用Tca8113细胞后，G0/G1期细胞增多，S期细胞减少，G2/M期细胞相对增多(P<0.05,P<0.01)。见表1。

表1 不同浓度VCR对Tca8113细胞周期进程的影响及凋亡率

与0 μg/ml组比较：1)P<0.05，2)P<0.01

3 讨 论

VCR是从长春花叶中提取出来的，且有较强抗肿瘤活性的二聚吲哚类生物碱，是重要的抗肿瘤药物。MTT实验可准确反映VCR药物作用后Tca8113细胞的活化状态和活细胞数量，具有一定的客观性。线粒体作为半自主细胞器，在细胞能量代谢和氧自由基生成过程中扮演重要角色，极易受到外界因素的损伤，线粒体功能改变，从而导致细胞增殖受抑。

流式细胞仪结果显示，不同浓度的VCR对Tca8113细胞增殖周期各时相均有不同程度的抑制作用。细胞周期是较固定的且易受各种细胞因子影响及调控〔4〕，一旦发生某环节的调控失常，即容易发生功能学及形态学的明显改变，结果显示不同浓度的VCR诱导Tca8113细胞具有一定的浓度依赖性，均表现为G0/G1期细胞比例增加，S期细胞减少，以上导致G2/M期的细胞数相对增多，细胞损伤一般表现为G2/M期细胞增多，细胞凋亡率增多能证明以上结论。文献〔5〕报道，VCR属于细胞周期特异性药物，主要作用于细胞周期的M期，通过与微管蛋白的作用，导致微管解聚，从而破坏细胞有丝分裂以及纺锤体形成，这样导致细胞有丝分裂停止于中期，促使细胞凋亡，使细胞增殖得到抑制。

综上所述，VCR对Tca8113细胞作用具有一定的时间浓度依赖性。为了提高VCR的抗癌效能、减轻不良反应，在探索新的药物剂型时应以降低毒性为前提，通过增加剂量、合理延长药物作用时间对VCR进行修饰改造，从而达到提高疗效以及提升临床顺应性的目的。

1刘爱芹，李莎莎，周 旋，等.信号传导及激活因子调控微RXA-21影响人舌鳞状细胞癌细胞侵袭能力的体外研究〔J〕.中华口腔医学杂志，2013；18(9)：539-44.

2蒋烈浩，凌志强.miR-21与头颈部恶性肿瘤〔J〕.国际肿瘤学杂志，2014；41(10)：750-2.

3冯青杰，孙立群，腾 博，等.雷公藤内酯醇联合热疗对Hep-2细胞的增殖抑制作用〔J〕.吉林大学学报(医学版)，2009；35(5)：862-5.

4Pratheeshkumar P，Kuttan G.Oleanolic acid induces apoptosis by modulating p53，Bax, Bcl-2 and caspase-3 gene expression and regulates the activation of transcription factors and cytokine profile in B16F〔J〕.J Environ Pathol Toxicol Oncol，2011；30(1)：21-31.

5Silvenman JA，Deitcher SR.Marqibo(vincristine sulfate liposome injection) improves the pharmacokinetics and pharmacodynamics of vincristine〔J〕.Cancer Chemother Pharmacol，2013；71(3)：555-64.

〔2016-12-25修回〕

(编辑 袁左鸣)

韩昕彤(1977-)，女，副主任护师，主要从事护理研究。

明智慧(1967-)，女，主管护师，主要从事护理研究。

R739.8

A

1005-9202(2017)17-4206-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.17.016

1 吉林大学第一医院透析中心