大黄素固相脂质纳米粒对大鼠帕金森模型的治疗效果

王 霞，孟 敏，吴玉琼，李金成，史彦斌

(1. 甘肃省人民医院 药剂科，甘肃 兰州 730000；2. 甘肃省第二人民医院 药剂科，甘肃 兰州 730000； 3. 兰州大学 药学院，甘肃 兰州 730000)

大黄素固相脂质纳米粒对大鼠帕金森模型的治疗效果

王 霞1，孟 敏1，吴玉琼2，李金成3，史彦斌3

(1. 甘肃省人民医院 药剂科，甘肃 兰州 730000；2. 甘肃省第二人民医院 药剂科，甘肃 兰州 730000； 3. 兰州大学 药学院，甘肃 兰州 730000)

目的 评价大黄素固相脂质纳米粒对大鼠帕金森模型的防治效果，为大黄素新制剂的研发提供参考。方法 采用乳化蒸发-低温固化法，应用单硬酯酸甘油酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油RH40和聚山梨酯(吐温-80)(3∶1，w/w)将大黄素制成固相脂质纳米粒，通过口服给药，调查其对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱发的帕金森病模型大鼠的行为学、中脑组织中儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)和单胺氧化酶B(MAO-B)含量的影响，评价其对帕金森症的防治作用。结果 大黄素固相脂质纳米粒在透视电镜下观察，外观呈圆球形，粒径介于40～100 nm；与生理盐水组帕金森模型大鼠比较，大黄素固相脂质纳米粒能够显著降低帕金森模型大鼠的中脑组织中的COMT和MAO-B浓度，大黄素混悬液能显著降低帕金森模型大鼠中脑组织中MAO-B浓度，但对COMT浓度无显著影响。结论 大黄素固相脂质纳米粒通过降低6-OHDA诱发的帕金森模型大鼠脑内的COMT和MAO-B水平发挥治疗帕金森症的作用，其效果优于混悬液。

帕金森障碍；大黄素；固相脂质纳米粒

大黄素(1， 3， 8-三羟基-6-甲基蒽醌)是一种广泛存在于蓼科植物大黄、首乌和虎杖中植物中的蒽醌类衍生物。现代药理学研究表明，大黄素具有泻下[1]、抗肿瘤[2-4]、神经保护[5-6]、降脂降血糖[7]、抗感染[8]、抗微生物[9]等生物活性。

随着我国人口的老龄化，帕金森症的发病率呈现上升趋势。现代医学认为帕金森症可能与泛素-蛋白酶体系统功能障碍与蛋白分解障碍、神经递质多巴胺减少、氧化应激、神经营养因子缺乏、细胞凋亡等多种因素有关[10-11]。单胺氧化酶B(MAO-B)和儿茶酚氧位甲基转基酶(COMT)高表达均可使多巴胺减少，导致帕金森症状[12-13]。文献报道大黄素、大黄酚和大黄素甲醚均具有保护神经活性[6]。大黄素能显著抑制脑缺血再灌注后细胞间黏附分子1的表达[14]，降低脑缺血组织中NF-κB mRNA表达水平，降低大脑皮层神经元β-淀粉样蛋白诱导的神经毒性[15]，减少神经元凋亡和脑梗死体积而表现出神经保护活性[16]。由此可见，大黄素是一种具有潜在神经保护活性的天然蒽醌类化合物。

Liu[17]和Teng等[18]报道大鼠口服给药后，大黄素进入体循环主要以葡萄糖醛酸化代谢产物的形式存在，首过效应明显。大黄素与葡萄糖醛酸结合而使自身极性增强，进而排出体外，从而在一定程度上导致大黄素体内生物利用度低。为了克服大黄素口服生物利用度低的不足，一些药物制剂新技术应用于大黄素的新型给药系统，如大黄素纳米粒[19]、脂质体[20]、聚合物胶束[21]、固相脂质纳米粒[22]和纳米乳[23]等。

本课题组采用乳化蒸发-低温固化法，应用单硬酯酸甘油酯和聚氧乙烯氢化蓖麻油RH40/吐温-80(3∶1，w/w)将大黄素制成了固相脂质纳米粒，通过口服给药，调查其对帕金森模型大鼠的行为学、中脑组织的MAO-B、COMT含量的影响，探讨其对帕金森症的防治效果，为大黄素类药物新制剂的研发提供参考。

1 材料与方法

1.1 试剂 大黄素对照品，纯度>98%，批号：110757，规格：20 mg，购自中国食品药品检定研究院；单硬酯酸甘油酯，批号：20150217，规格：100 g，兰州旋光化学技术有限公司；泊洛沙姆188，批号：P08978，规格：250 g，阿达玛斯试剂(上海)有限公司；聚氧乙烯氢化蓖麻油RH40，规格：1 kg，批号：81088756p0，德国BASF公司；6-羟基多巴胺(6-OHDA)，纯度>98.5%，批号：083M4624V，规格：5 mg，美国Sigma公司；盐酸阿扑吗啡(APO)，纯度>98.5%，批号：SLBG9333V，规格：100 mg，美国Sigma公司；大鼠单胺氧化酶-B(MAO-B)和儿茶酚氧位甲基转基酶(COMT)ELISA试剂盒，批号：201608，武汉华联科生物技术有限公司；甲醇(色谱纯)，批号：20151106083，山东禹王实业有限公司化工分公司。

1.2 动物 Wistar大鼠，雄性，250～320 g，清洁级，购自兰州大学实验动物中心，生产许可证号：SCXK(甘)2005-0007，使用许可证号:SYXK(甘)2005-0007。所有动物均食用全价营养配合饲料，自由摄食饮水。

1.3 仪器 Waters 2998 高效液相色谱仪(Waters Co.， Ltd， USA)、DF-101S 集热式恒温加热磁力搅拌器(郑州长城科工贸有限公司)、RE-52AA 旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)、JY92-IIN 超声波细胞粉碎机(宁波新芝生物科技股份有限公司)、CR21GIII 日立高速离心机(株式会社日立制作所，日本)、CPA225D 数显电子天平(北京赛多利斯仪器有限公司)、JEM-1200EX 型透射电镜(JEOL公司，日本)； Zetasizer Nano 3600 激光动态散射仪(马尔文仪器有限公司，英国)；大鼠脑立体定位仪(深圳市瑞沃德生命科技有限公司)。

四要提升设施建设水平，积极整合渠道防渗、管道灌溉、水稻控灌、土壤墒情预报、大沟蓄水等节水农业灌溉技术，充分利用空中、地表、地下水资源，实现农田输水节水、生态节水、生育节水，提高水份生产率，建设一批节水工程；紧紧围绕现代化农田水利，分区建成满足“堤固河畅，沟保渠硬，水清岸绿，生态农田，管理民主，良性运行”要求的流域性万亩以上高标准农田水利小区，着力建设末级沟（渠）系工程，从沟渠路配置方式、渠道硬化、灌溉方法、农业生产等方面优化末级渠道建设和灌溉技术方案，解决农田“最后一公里”输水问题。

1.4 试验药物制备

1.4.1 大黄素的提取与纯化 甘肃掌叶大黄块状根茎，来源：甘肃礼县，存样凭证：No. 856002，鉴定人：李建银(兰州大学药学院生药学研究所)。掌叶大黄根茎粉碎，粉末按照1:5(w/v)与20%硫酸混合，70 ℃酸解，抽滤，滤渣水洗后干燥。按照1:30(w/v)加入90%乙醇，超声提取，抽滤，滤液减压浓缩，残留水混悬液用氯仿萃取，有机层用氢氧化钠溶液萃取，加入盐酸调pH值至2.0，离心，沉淀用水洗至中性，真空干燥得大黄蒽醌粗提物。粗提物经硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，浓缩，重结晶得黄色至棕红色产物。用对照品为参照，经薄层色谱法定性鉴别为大黄酚、大黄素甲醚、大黄素、芦荟大黄素及大黄酸。以大黄素对照品为参照， 反相高效液相色谱外标一点法定量分析，色谱柱为Diamonsil-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-0.1%磷酸(88:12，v/v)，流速1 ml/min，紫外检测波长254 nm，柱温40 ℃，进样体积：20 μl。所得大黄素纯度不低于95.0%。纯化大黄素的高效液相色谱(HPLC)，见图1。

图1 大黄素的高效液相色谱图

1.4.2 大黄素固相脂质纳米粒的制备 采用乳化蒸发-低温固化法制备固相脂质纳米粒。准确称取自制大黄素6.0 mg，单硬脂酸甘油酯60 mg，加入5 ml丙酮后，置于60 ℃水浴中加热溶解；取适量聚氧乙烯氢化蓖麻油RH40 和吐温-80(3∶1，w/w)，加入20 ml去离子水，使得乳化剂浓度为15%(w/v)，于同样温度下加热溶解。在上述水浴温度下，将油相逐滴加入到水相中，滴注过程中以1 000 g的速度持续搅拌约2 小时，蒸发除去丙酮。剩余水混悬液快速置于冰水浴中持续搅拌2 小时，水相滤膜过滤，冷冻干燥，即得大黄素固相脂质纳米粒。给药前用纯水稀释至含大黄素质量浓度为1 mg/ml的固相脂质纳米粒混悬液。用Sephadex G凝胶柱分离游离药物和包封药物，HPLC分析计算包封率和载药量。

1.4.3 大黄素固相脂质纳米粒的表征 透射电镜下观察大黄素固相纳米粒的形态。马尔文激光粒度仪分析其粒径和Zeta电位。以葡聚糖凝胶Sephadex G-50色谱小柱分离大黄素固相脂质纳米粒和未包封的大黄素，活化后上样，用去离子水洗脱，收集带有乳光的洗脱液，转移至25 ml容量瓶，用甲醇定容。取同体积的同一批载药纳米粒，不经过凝胶过滤色谱分离，直接加入甲醇定容至25 ml，摇匀。

1.4.4 空白脂质纳米粒的制备 按照大黄素固相脂质纳米粒的制备方法制备不加大黄素的脂质纳米粒。给药前按与大黄素固相脂质纳米粒稀释相同倍数得混悬液。

1.4.5 大黄素混悬液的制备 配制含0.2%吐温80和0.5%(w/v)羧甲基纤维素钠的混合溶液，按每毫升混合溶液加入1.0 mg大黄素，磁力搅拌均匀，即得大黄素混悬液。

1.5 方法

1.5.1 大鼠帕金森模型的建立 Wistar大鼠，用10%水合氯醛按4.0 ml/kg剂量腹腔注射麻醉。之后将大鼠俯卧位固定于大鼠大脑立体定位仪上。剪毛后常规消毒，钝性分离至暴露头骨，30%双氧水和生理盐水清洗。依照Paxinos and Watson(1986)图谱，以前囟为标准参考点，牙科钻开颅，按硬膜下两点将6-OHDA溶液定位注射于一侧纹状体内。每点注射1.5 μl 6-OHDA溶液(5 μg/μl)，注射速度为0.3 μl/min，留针5 min，术后大鼠置于安静保温处直至清醒，自由进食饮水。

1.5.2 分组与给药 Wistar大鼠随机分为5组，每组5～10只，其中1～4组进行6-OHDA立体定位注射造模，造模后次日分别口服给予大黄素固相脂质纳米粒混悬液、空白脂质纳米粒混悬液、大黄素混悬液和生理盐水，单次口服剂量为10 ml/kg (10 mg/kg)，给药间隔为12小时，连续给药4周；第5组作为正常大鼠对照组，不给予任何药物。各组大鼠分别于注射6-OHDA进行纹状体损伤后第1、2、3和4周进行行为学评价。

1.5.3 取样与检测 第4周行为学评价后，处死大鼠，取出脑组织，分离出中脑，称取重量，加入一定量的pH 7.4磷酸缓冲液，2～8 ℃的温度下匀浆，3 500 g低温离心20 分钟，收集上清。按照试剂盒操作说明(酶联免疫分析/ELISA)，分别检测大鼠的中脑组织中单胺氧化酶B(MAO-B)和儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)含量，比较各组间酶含量的变化。含量测定时，先用纯化的酶抗体包被微孔板，制成固相抗体。往包被单抗的微孔中加入待测酶对照液或样品，37 ℃温育30分钟，再加入辣根过氧化物酶标记的待测酶抗体，37 ℃温育30分钟，经3次洗涤后加底物TMB显色。用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度(OD值，X)，分别通过标准曲线计算样品中MAO-B和COMT的浓度(Y)。

2 结 果

2.1 大黄素固相脂质纳米粒的性质 采用乳化蒸发-低温固化法制备所得的大黄素固相脂质纳米粒在透视电镜下观察，外观呈圆球形，平均粒径介于40～100 nm，与激光粒度分析仪测定结果基本相符。泽塔电位(ZP)值为(-25.2±0.5) mV。柱分离-HPLC法测得平均包封率为51.2%，载药量为3.6%。见图2。

图2 大黄素固相脂质纳米粒的透射电镜图

2.2 大鼠帕金森模型的评价

2.2.1 APO诱导的旋转行为 从注射6-OHDA损伤纹状体手术后第1周开始，大鼠正中颈部皮下注射APO 2.0 ml/kg(0.5 mg/kg)诱导旋转行为。大鼠旋转时以健侧后肢为支点，原地逆时针旋转，首尾相接360度为1转，从皮下注射APO后5 分钟开始记录旋转的次数，观察30 分钟；不完全损伤的大鼠会绕1个圈旋转，也纳入造模成功范围。每周观察1次，连续4周。至第4周时约90%的术后大鼠能够发生连续旋转行为。

2.2.2 大鼠悬空摆动试验 经中后部尾巴提起大鼠，使大鼠头处于向下垂直状态，头部距离地面约2 cm，以摆动偏离垂直位并再返回到垂直位记为摆动1次，记录提起20次中大鼠头或上身向左摆动的次数。该指标判断干扰因素多，但基本能确定有75%的大鼠向左摆动的频率明显高于其它方向。

2.2.3 行为学评价 预实验中，APO诱导的大鼠旋转行为随6-OHDA损伤时间延长而加快。而在术后给予药物干预后，第4周观察时，大黄素固相脂质纳米粒组大鼠旋转行为与大黄素混悬液组和生理盐水组相比，均得到一定程度的改善，正常组大鼠无规律性旋转。

2.3 MAO-B和COMT含量检测 通过ELISA实验，得到COMT的标准曲线为Y(ng/g)=(0.0434-2958.12954)/(1+(x/4.70641E7)^(0.72237))+2958.12954，r2=0.98943，线性范围为8.734～3 694.252 ng/g。同法得到MAO-B标准曲线为Y(ng/g)=(0.09316-3.32865)/[1+(x/58.58028)^(1.22077)]+3.32865，r2=0.99633，线性范围为0.756～241.62 ng/g。

大黄素固相脂质纳米粒与生理盐水组比较，两种酶含量均显著降低；而大黄素混悬液组与生理盐水组比较，仅MAO-B含量显著降低。生理盐水组与空白固相脂质纳米粒组比较，两种酶含量差异均无统计学意义，大黄素固相脂质纳米粒组与正常对照组比较，两种酶含量差异均无统计学意义，而大黄素混悬液组和正常对照组间比较，MAO-B含量差异无统计学意义，但大黄素混悬液组的COMT含量比正常对照组的含量显著增高。见表1。

表1 考察大黄素及其制剂对6-OHDA诱发帕金森大鼠模型的中脑组织中COMT和MAO-B含量的影响

注：与生理盐水组比较，*P<0.05；与空白固相脂质纳米粒组比较，#P<0.05；与大黄素混悬液组比较，△P<0.05

3 讨 论

3.1 大黄素固相脂质纳米粒的制备 课题组之前进行了大黄素纳米乳的制备，虽然解决了大黄素水溶性差、口服生物利用度低的问题[23-24]。但发现所制纳米乳长期贮存不稳定，主要表现为乳液由澄清变浑浊，提示乳滴发生聚集，进而会影响口服给药的吸收。因此，选用生物相容性材料脂肪酸甘油酯类，将大黄素制成了固相脂质纳米粒，既增加了稳定性，又避免了选用含氰基高分子材料制备纳米粒的生物毒性。连续4周的口服给药显示大黄素的体重增加与正常对照组相似，提示大黄素固相脂质纳米粒不会对大鼠造成明显的毒性。

3.2 大鼠帕金森模型的建立 建立帕金森膜型的方法很多，一般选择雄性大鼠进行造模。诸如大鼠6-OHDA模型、机械损伤大鼠帕金森模型、1-甲基-4苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(MPTP)帕金森模型、鱼藤酮大鼠帕金森模型等[25]。其中最常用的是大鼠6-OHDA模型，其也是第一个选择性破坏儿茶酚胺神经系统的工具药。模型成功与否的评价手段很多，包括行为学异常、神经病理改变和神经递质变化、神经毒性评价等。本研究基于预实验的经验和节约成本考虑，在挑选帕金森模型大鼠时仅采用了诱导旋转和悬空摆动。主要依据单侧纹状体注射神经毒素6-OHDA后，皮下注射APO诱导旋转的方法判断造模是否成功。

3.3 防治效果的评价 ELISA实验在加入待测样本时，有双抗体夹心一步法和两步法[26]。预实验采用双抗体夹心一步法，即将对照液或样本和辣根过氧化物酶标记的抗体同时加入到含有酶抗体的微孔板孔中，考察了大黄素固相脂质纳米粒给药模型组的中脑组织中的COMT和MAO-B表达量随时间的变化趋势。预实验结果显示大黄素固相脂质纳米粒给药模型组的中脑组织中的MAO-B浓度和COMT的OD值(COMT浓度低于检测限)在4小时和36小时均达到谷值，36小时后又上升。为了能够分别定量COMT和MAO-B浓度，本实验采用两步法(即待测样本加入后温育，再加HRP标记的抗体后温育)，COMT和MAO-B最低检测浓度分别达到7.834 ng/g和0.756 ng/g。由实验结果可知，生理盐水组MAO-B与COMT含量最高，与正常对照组相比差异有统计学意义，结合行为学结果，表明单侧纹状体内两点注射6-OHDA能够引起帕金森样病变；大黄素固相脂质纳米粒混悬液组与生理盐水组间差异有统计学意义，表明大黄素固相脂质纳米粒可以显著降低模型组脑内两种酶含量，理论上可以降低两种酶诱导的多巴胺降解反应。大黄素固相脂质纳米粒混悬液组与空白固相脂质纳米粒混悬液组间酶含量明显差异，表明引起两种酶表达量降低的为药物大黄素。大黄素固相脂质纳米粒混悬液组和大黄素混悬液组间的显著差异显示固相脂质纳米粒剂型在降低COMT表达量作用优于混悬液。而两种剂型对于MAO-B作用差异无统计学意义，这对进一步研究给药剂量设计提供参考，也为将来的研究提供新的思路。

[1] Srinivas G， Babykutty S， Sathiadevan PP， et al. Molecular mechanism of emodin action: transition from laxative ingredient to an antitumor agent[J]. Med Res Rev， 2007， 27(5): 591-608.

[2] Shia CS， Suresh G， Hou YC， et al. Suppression on metastasis by rhubarb through modulation on MMP-2 and uPA in human A549 lung adenocarcinoma: An ex vivo approach[J]. J Ethnopharmacol， 2011， 133(2): 426-433.

[3] Hsu CM， Hsu YA， Tsai Y， et al. Emodin inhibits the growth of hepatoma cells: Finding the common anti-cancer pathway using Huh7， Hep3B， and HepG2 cells[J]. Biochem Biophys Res Commun， 2010， 392(4): 473-478.

[4] Wang CG， Yang JQ， Liu BZ， et al. Anti-tumor activity of emodin against human chronic myelocytic leukemia K562 cell lines in vitro and in vivo[J]. Eur J Pharmacol， 2010， 627(1-3): 33-41.

[5] Ali S， Watson MS， Osborne RH. The stimulant cathartic， emodin， contracts the rat isolated ileum by triggering release of endogenous acetylcholine[J]. Auton Autacoid Pharmacol， 2004， 24(4): 103-105.

[6] Li M， Fu Q， Li Y， et al. Emodin opposes chronic unpredictable mild stress induced depressive-like behavior in mice by upregulating the levels of hippocampal glucocorticoid receptor and brain-derived neurotrophic factor[J]. Fitoterapia， 2014， 98: 1-10.

[7] Xue JF， Ding WJ， Liu Y. Anti-diabetic effects of emodin involved in the activation of PPARγ on high-fat diet-fed and low dose of streptozotocin-induced diabetic mice[J]. Fitoterapia， 2010， 81(3): 173-177.

[8] 孙燕妮， 杨洁， 王丽敏， 等. 大黄素对脓毒症急性肺损伤大鼠水通道蛋白1表达的影响[J]. 临床荟萃， 2014， 29(8): 903-908.

[9] Xiong HR， Luo J， Hou W， et al. The effect of emodin， an anthraquinone derivative extracted from the roots of Rheum tanguticum， against herpes simplex virus in vitro and in vivo[J]. J Ethnopharmacol， 2011， 133(2): 718-723.

[10] 田明秀， 张志清， 解洪荣， 等. 帕金森病发病机制的研究进展[J]. 中国老年学杂志， 2012， 32(16): 3597-3601.

[11] Thomas B， Beal MF. Parkinson’s disease[J]. Hum Mol Genet， 2007， 16(2): R183-194.

[12] 曾文晶， 张晓莺， 李燕云， 等. 新疆维吾尔族单胺氧化酶B基因多态性与帕金森病的关系[J]. 临床荟萃， 2012， 27(9): 764-766.

[13] Ebrahimi A， Schluesener H. Natural polyphenols against neurodegenerative disorders: potentials and pitfalls[J]. Ageing Res Rev，2013， 11(2): 329-345.

[14] 巫志峰， 罗翠霞， 孙静， 等. 大黄素对缺血性中风大鼠脑组织NF-κB，ICAM-1基因表达的影响[J]. 中国中医急症， 2009， 18(6): 934-936.

[15] Liu T， Jin H， Sun QR， et al. Neuroprotective effects of emodin in rat cortical neurons against β-amyloid-induced neurotoxicity[J]. Brain Res， 2010， 1347(6): 149-160.

[16] 谭力， 王联英， 向海鹰， 等. 大黄素对脑缺血再灌注大鼠的保护作用及机制研究[J]. 中西医结合心脑血管病杂志， 2010， 8(9): 1100-1101.

[17] Liu W， Zheng ZJ， Liu X， et al. Sensitive and robust UPLC-MS/MS method to determine the gender-dependent pharmacokinetics in rats of emodin and its glucuronide[J]. J Pharm Biomed Anal， 2011， 54(5): 1157-1162.

[18] Teng Z， Yuan C， Zhang F， et al. Intestinal absorption and first-pass metabolism of polyphenol compounds in rat and their transport dynamics in Caco-2 cells[J]. PLoS One， 2012， 7(1): e29647.

[19] 徐丽， 关凤军， 董晨， 等. 大黄素-聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒的制备[J]. 中南药学， 2012， 10(9): 674-678.

[20] 顾宜， 石玉， 张三奇， 等. 大黄素纳米脂质体的制备和质量评价[J]. 第四军医大学学报， 2003， 24 (5): 479-479.

[21] 典灵辉， 于恩江， 程纪伦， 等. 大黄素soluplus聚合物胶束的制备及质量评价[J]. 中国实验方剂学杂志， 2014， 20(16): 15-18.

[22] Wang SP， Chen TK， Chen R， et al. Emodin loaded solid lipid nanoparticles: preparation， characterization and antitumor activity studies[J]. Int J Pharm， 2012， 430(1-2): 238-246.

[23] Shi YB， Li HL， Li JC， et al. Development， optimization and evaluation of emodin loaded nanoemulsion prepared by ultrasonic emulsification[J]. J Drug Delivery Sci Technol， 2015， 27: 46-55.

[24] Shi YB， Li JC， Li HL， et al. Pharmacokinetics and tissue distribution of emodin loaded nanoemulsion in rats[J]. J Drug Delivery Sci Technol， 2015， 30: 242-249.

[25] 梁希彬， 周宇， 谢俊霞， 等. 大鼠帕金森病模型的建立及其评价[J]. 中国神经科学杂志， 2000， 16(1): 65-67.

[26] 马良艳， 王秋实， 王殿昌， 等. ELISA一步法与二步法在HBsAg检测的应用比较[J]. 中国医学工程， 2011， 19(10):92-93.

Effect of emodin loaded solid lipid nanoparticles on Parkinson model in rats

Wang Xia1， Meng Min1， Wu Yuqiong2， Li Jincheng3， Shi Yanbin3
1.DepartmentofPhamaceutics，thePeople'sHospitalofGansuProvince，Lanzhou730000，China；2.DepartmentofPhamaceutics，theSecondPeople'sHospitalofGansuProvince，Lanzhou730000，China；3.CollegeofPharmacy，LanzhouUniversity，Lanzhou730000，China

Objective To evaluate therapeutic effect of emodin loaded solid lipid nanoparticles (EMO-SLN) on Parkinson model of rats. Methods EMO-SLN were prepared by applying emulsion evaporation-solidification at low temperature method with glyceryl monostearate and cremophor RH40 as well as polysorbate 80(tween 80) (3:1，w/w). To observe the influence of EMO-SLN in 6-OHDA induced the behavior of Parkinson model rats′， concentration of MAO-B and COMT in middle brain following oral administration， therapeutic effect of EMO-SLN on rats model of Parkinson disease.Results EMO-SLN was spherical in morphology and the diameter was in the range of 40-100 nm. Compared with Parkinson disease model rats divided into normal saline group， rotating behavior of rats in EMO-SLN group and emodin suspension group was improved. Concentrations of MAO-B and COMT in middle brain of Parkinson disease model rats for EMO-SLN group were significantly reduced，while MAO-B concentration in middle brain of emodin suspension group reduced significantly but COMT concentration showed no significant difference compared to normal saline control group. Conclusion EMO-SLN showed effect on 6-OHDA rat model of Parkinson disease by lowering concnentation of COMT and MAO-B， and its therapeutic efficiency is better than that of emodin suspension.

Parkinsonian disorders； emodin; solid lipid nanoparticles

甘肃省自然科学基金(1606RJZA147， 145RJZA026)；兰州市人才创新创业科技计划项目(2014-RC-71)

史彦斌， Email：shiyb@lzu.edu.cn

R745.7

A

1004-583X(2017)09-0782-05

10.3969/j.issn.1004-583X.2017.09.012

2017-05-23 编辑:张卫国

Correspondingauther:ShiYanbin，Email：shiyb@lzu.edu.cn