HPLC法测定利格列汀的S-异构体

董海霞

(山东标准检测技术有限公司 ， 山东 济南 250101)

HPLC法测定利格列汀的S-异构体

董海霞

(山东标准检测技术有限公司 ， 山东 济南 250101)

目的 ： 建立高效液相色谱法测定利格列汀原料药中S-异构体的方法。方法： 采用AD-H色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙醇-乙醇胺(100:0.1)，柱温为35℃，流速为0.4mL·min-1，检测波长为220nm。结果： 利格列汀S-异构体在0.0899～0.6744μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9996)，低、中、高浓度平均回收率分别为101.8%、98.4%、96.0%，RSD分别为1.68%、1.63%、1.40%(n=3)，检出限为0.18ng，日内、日间精密度RSD分别为3.4%和4.6%(n=6)。结论： 该方法灵敏、准确，专属性强，可作为利格列汀原料药中的S-异构体含量测定方法。

利格列汀；S-异构体；高效液相色谱法

利格列汀是一个每日1次给药的二肽基肽酶-4(DPP-4)抑制剂(在中国获批，欧唐宁)，可在饮食控制和体育锻炼的基础上改善2型糖尿病(T2DM)成年患者的血糖控制水平[1-5]。这一新型治疗药物仅需每日口服一次5mg，就可带来显著的、可靠的血糖水平的改善[6]。对于分离利格列汀中S-异构体的HPLC法报道相对较少，本文建立了测定列格列汀S-异构体的HPLC法，该方法简便，专属性强，结果准确可靠,利格列汀S-异构体的结构式见图1。

图1 利格列汀S-异构体的结构式

1 仪器与试药

高效液相色谱仪(紫外检测器，美国Aglient 1260)、高效液相色谱仪(Waters e2695，UV2489检测器，)；紫外-可见分光光度计(美国Aglient 8453型)；超声波仪(美国Branson 3510)；电子分析天平(德国Sartorius BT25S)；pH计(美国梅特勒-托利多仪器有限公司 Seven Easy)；乙醇、正己烷(天津市康科德科技有限公司，色谱纯)，乙醇胺(国药集团化学试剂有限公司，分析纯)；水为蒸馏水。

利格列汀S-异构体(批号20161201，含量98.8%)，自制；利格列汀原料药(批号20170101、20170102、20170103)，自制。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：AD-H色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙醇-乙醇胺(100:0.1)；检测波长为220nm；流速为0.4mL·min-1；柱温为35℃；进样量：20μL。理论塔板数以利格列汀S-异构体计算为≥1500。

2.2 溶液配制与测定

2.2.1 溶剂

无水乙醇-正己烷(1：1)。

2.2.2 对照品溶液

精密称取利格列汀S-异构体对照品约11.25mg，置100mL量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取1.0mL，于25mL量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，做为储备液(4.5μg·mL-1)；精密吸取1.0mL，于10mL量瓶中，加溶剂稀释成0.45μg·mL-1的溶液作为对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液

论长相，二狗伢当然比宝玉爹差了一截。乡党们概括二狗伢有三句话，长相歪里鳖佬，性格犟头术佬，脾气性里肏佬。二狗伢自己也说，谁能跟他比，站倒坐倒都像一主礼，一副嫖客相，爹娘给的。后面四个字说出了二狗伢的不服与不屑，意思很明白，你长得标致出众没什么了不起，那是爹娘造就的，要比比本事。

精密称取本品75mg，置25mL量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀做为储备液(3mg·mL-1)，精密吸取储备液1.0mL，于10mL量瓶中，加溶剂稀释成300μg·mL-1的溶液作为供试品溶液。

2.2.4 系统适用性溶液

分别精密量取列格列汀及利格列汀S-异构体储备液各1mL，于10mL量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。

取系统适用性溶液20μL注入液相色谱仪，色谱图见图2。利格列汀S-异构体按外标法以峰面积计算。

图2 系统适用性HPLC色谱图

2.3 定量限

取利格列汀S-异构体对照品溶液(0.45μg·mL-1)适量，采用逐步稀释法当其信噪比(S/N)为10：1时，相应的利格列汀S-异构体质量为0.18ng。

2.4 线性试验

分别精密量取“2.2.2”项下储备液0.2、0.6、0.8、1.0、1.5mL置10mL量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，制成含利格列汀S-异构体浓度分别为0.0899、0.2698、0.3597、0.4496、0.6744μg·mL-1的系列溶液。取上述系列溶液分别进样测定，以峰面积A对浓度C进行线性回归，得标准曲线方程：A=379006.8C+1183.1，r=0.9996，表明利格列汀S-异构体在0.0899～0.6744μg·mL-1与峰面积线性关系良好。

2.5 精密度试验

照“2.2”项下方法，配制对照品溶液及6份供试品溶液，精密吸取供试品溶液和对照品溶液各20μL注入液相色谱仪，同日内各连续测定；按相同方法，连续进样6d，测定峰面积。结果显示利格列汀S-异构体的日内、日间含量的平均值分别为0.008%和0.009%；RSD分别为3.4%和4.6%(n=6)，表明本方法的精密度良好。

2.6 稳定性试验

将供试品溶液于室温放置，分别于0，2，4，6，8，10，12h进样，记录色谱图，考察供试品溶液的稳定性。测得RSD为0.82%(n=7)，说明供试品溶液在12h内稳定。

2.7 回收率试验

分别取“2.2.3”项下供试品储备液个1.0mL，置3个10mL量瓶中，分别量取"2.2.2"项下对照品储备液0.2，1.0，1.5mL，分别置上述3个量瓶中，即得0.03%、0.15%、0.225%杂质限度的混合液，平行配制3份，按“2.1”项下色谱条件进样，按外标法计算回收率，结果低、中、高浓度平均回收率分别为101.8%、98.4%、96.0%，RSD分别为1.68%、1.63%、1.40%(n=3)。

2.8 耐用性试验

调整试验条件，分别考察流动相比例、柱温变化、流速变化时，测定结果的变化。在各条件下进样，利格列汀与S-异构体均能与主峰有效分离，故本色谱条件适合利格列汀S-异构体检查。

2.9 样品测定结果

HPLC法分别测定自制3批样品(批号：20170101、20170102、20170103)，结果见表1，三批样品结果均控制在0.15%以内。

表1 HPLC法测定结果

3 讨论

本实验对HPLC法测定利格列汀的S-异构体进行了方法学研究，用手性色谱柱【填料为三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸)纤维素酯键合硅胶CHIRALPAK®AD(250mm×4.6mm，5μm)】，以乙醇-乙醇胺(100:0.1)为流动相，检测波长为220nm，流速为0.4 mL·min-1，利格列汀S-异构体于利格列汀峰的相对保留时间分别约为0.86和1.0；利格列汀S-异构体和利格列汀峰的分离度大于3.0。系统适用性、专属性、线性和范围、定量限与检测限、准确度、精密度、稳定性均符合检测要求，故该方法可用于测定利格列汀的S-异构体。

[1] 乔玉清.HPLC法测定利格列汀原料药的有关物质[J].海峡药学，2016，28(1)：62-63.

[2] FDA . FDA Approves type 2 diabetes drug from boehringer ingelheim and lilly[EB/OL].(2011-05-03).http://www.genengnews.com/gen-newshigh-lights/fda-approves-type-2-diabetesdrug-from-boehringer-ingelheim-andlilly/81245092.

[3] Del Prato S,Barnett A H,Huisman H.Effect of linagliptin monotherapy on glycaemic control and markers of B-cell function in patients with inadequately controlled type 2 diabetes:a randomized controlled trial[J].Diabetes Obes Metab 2011,13:193-287.

[4] Barnett A H,Harper R.Linagliptin monotherapy improves glycaemic control in type 2 diabetes patients for whom metformin therapy is inappropriate[C].46th Annual Meeting of the European Association for the Study of Diabetes.Stockholm,2010: 823.

[5] Chen Y X，Du J B，Zhang Y F，et al. The enantioselective phar?macokinetic study of desvenlafaxine sustained release tablet in Chinese healthy male volunteers after oral administration[J].Acta Pharm Sin，2015，50(4)：486-491.

[6] Lai Zengwei, Li Chunhong, Sun Hongbin et al.Discovery of highly potent DPP-4 inhibitors by hybrid compound design based on linagliptin and alogliptin[J].European Journal of Medicinal Chemistry, 2014, 83:547-560.

(本文文献格式：董海霞.HPLC法测定利格列汀的S-异构体[J].山东化工，2017，46(10)：89-91.)

Determination of S-isomer in Linagliptin by HPLC

DongHaixia

(Shandong Standard and Test Technology Co.,Ltd.,Jinan 250101,China)

To determine S-isomer in linagliptin by HPLC.Methods :The chromatography separation was performed on a CHIRALPAK AD-H column(250mm×4.6mm，5μm)at 35℃,The flow rate was at 0.4 mL·min-1,The mobile phase was ethanol-ethanolamine=100:0.1.The detection wavelength was 220nm.Results: S-isomer showed a good linearity at 0.0899～0.6744μg·mL-1.The average recovery of low,medium,high concentration of S-isomer was 101.8%,98.4% and 96.0%,RSD was 1.68%,1.63%and1.40%(n=3),respectively.The limit for determination was 0.18ng and the RSD of intra-day and inter-day was 3.4% and 4.6%(n=6),respectively.Conclusion: The method is simple and accurate for the determination of S-isomer in linagliptin.

linagliptin;S-isomer;HPLC

2017-03-22

董海霞(1979—)，女，山东济南人，助理工程师，主要从事医药研发工作。

O657.7+2

A

1008-021X(2017)10-0089-03

分析与测试