接骨丹胶囊的质量标准研究

耿燕楠，崔维刚，周利章 ,石俊英

(1.山东中医药大学附属医院，山东 济南 250011；2.临沂市食品药品检验检测中心，山东 临沂 276001;3.山东中医药大学，山东 济南 250355)

接骨丹胶囊的质量标准研究

耿燕楠1，崔维刚2，周利章2,石俊英3

(1.山东中医药大学附属医院，山东 济南 250011；2.临沂市食品药品检验检测中心，山东 临沂 276001;3.山东中医药大学，山东 济南 250355)

目的: 完善接骨丹胶囊的质量标准。方法: 增加薄层色谱法对接骨丹胶囊中延胡索和栀子进行定性鉴别，采用高效液相色谱法测定制剂中柚皮苷的含量。采用Agilent Cl8柱，流动相为以甲醇-冰醋酸-水(33∶2∶65)，检测波长283nm。结果: 定性鉴别方法专属性强；含量测定中柚皮苷范围为 0.03146μg～0.2517μg( r =0.9999)，平均回收率为98.17%。结论: 建立的分析方法稳定、准确，可用于该制剂的质量控制。

接骨丹胶囊;薄层色谱法;柚皮苷;液相色谱法;质量标准

接骨丹胶囊是临沂市沂南攀峰骨科医院自制的经山东省食品药品监督管理局批准使用的医疗机构制剂(鲁药制ZBZ1613)，该制剂由桃仁、红花、当归、川芎、土鳖虫、牛膝、血竭、自然铜等28种中药组成，其功效为活血化瘀，补肾接骨，用于各种骨折，骨不连、股骨头坏死等，具有较高的临床疗效。该制剂质量标准中仅包含显微鉴别(5个特征)与薄层色谱鉴别(当归、川芎)以及常规的胶囊检查项目。由于该制剂涉及药味数量众多，药材原料质量不一，很难保证临床上中成药疗效的稳定性与安全性，鉴于此类问题，对接骨丹胶囊进行深入分析研究，遵循质量标准提高优先兼顾检验成本与效率的原则，增加了延胡索、栀子药材的薄层色谱鉴别[1]，以保证该药材的专属性投料，同时，增加了柚皮苷含量测定项目，以保证接骨丹胶囊的质量稳定性，为临床疗效提供保障，最终在原标准的基础上，形成高效、优化、可控的质量控制标准，以解决中药原材料投料质量水平参差不齐导致成药质量不一的现实状况。

1 仪器和试药

1.1 仪器

XS205DU电子分析天平(梅特勒-托利多生产)；KQ3200型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；硅胶G薄层板(10×20cm，Merck KgaA,Germany)；Agilent 1260 高效液相色谱仪(美国 Agilent 公司)；Agilent -C18柱(4.6×250mm，5μm)色谱柱。

1.2 试药

柚皮苷(批号：110722-201111)、延胡索乙素(批号：110726-200208)、栀子苷(批号：110749-200410)；对照品(中国食品药品检定研究院)；延胡索(批号：120928-201007)、栀子(批号：120986-200504)；对照药材(中国药品生物制品检定所)；接骨丹胶囊(沂南攀峰骨科医院制剂室，批号：20131111，20131114，20131118)；甲醇、乙腈为色谱纯，水为纯化水，其余试剂为分析纯。

2 定性鉴别

2.1 延胡索的薄层鉴别

取本品内容物1.5g，加甲醇50mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取3次，每次10mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液[2]。再取缺延胡索的样品制备阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各3～5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮(9∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸中约3min后取出，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照在相应的位置上无荧光斑点，展开系统的分离效果良好，结果见图1。

1．延胡索乙素对照品；2.延胡索对照药材；3～4.样品20131111；5～6.样品20131114；7～8.样品20131118；9.阴性对照

图1 延胡索的薄层鉴别

2.2 栀子的薄层鉴别

取本品内容物1g，加50%甲醇10mL，超声处理40min，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取栀子对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取栀子苷对照品，加乙醇制成每1mL含3mg的溶液，作为对照品溶液[2]。再取缺栀子的样品制备阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶5∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照在相应的位置上无斑点，展开系统的分离效果良好，结果见图2。

1．栀子苷对照品；2.栀子对照药材；3～4.样品20131111；5～6.样品20131114；7～8.样品20131118；9.阴性对照

图2 栀子的薄层鉴别

2 柚皮苷含量测定

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent SB-C18 柱 (5μm，4.6×250mm)；以甲醇-冰醋酸-水(33∶2∶65)为流动相；柱温：35℃。理论板数按柚皮苷峰计算应不低于3000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取柚皮苷对照品16.88mg，置200mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取20mL，置50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取本品适量(批号：20131111)，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25mL甲醇，称定重量，加热回流1h，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.4 线性关系的考察

分别精密吸取对照品溶液各1,2,4,6,8μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。以柚皮苷对照品的进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：Y =1720.540X +6.0612，相关系数r=0.9999。结果表明，柚皮苷进样量在0.03146～0.2517μg之间进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.5 仪器精密度试验

精密吸取柚皮苷对照品溶液(0.03146mg/mL)5μL，注入液相色谱仪，连续进样6次，测其峰面积。结果柚皮苷峰面积均值为278.5，RSD值为1.25%(n=6)，表明仪器精密度良好。

2.6 样品稳定性试验

取本品适量(批号：20131111)，制成供试品溶液。每隔4小时进样一次，每次5μL，测定柚皮苷的峰面积，共考察24h，以观察供试品溶液在检测过程中待测成分的稳定性。结果峰面积均值为221.351，RSD值为0.59%，表明供试品溶液在24h内稳定性良好，能够满足测定需要。

2.7 方法重复性考察

平行制备6份供试品溶液,分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定，用外标法计算。结果样品中柚皮苷的平均含量为0.378mg/粒，RSD值为0.6%，表明含量测定方法的重复性良好。

2.8 加样回收率试验

取6份已知含量的样品(批号：20131111)，柚皮苷的含量为0.38mg/粒，精密称定，每份中精密加入稀释前柚皮苷对照品溶液5mL，按2项下的色谱条件进行测定，结果见表1。

表1 柚皮苷加样回收率考察结果

试验结果表明，测定方法的回收率良好。

2.9 专属性试验

阴性对照溶液的制备：取处方中除去骨碎补、枳壳的其他药味，按处方比例制成缺骨碎补、枳壳阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制得阴性对照溶液，即得。

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各5μL，注入液相色谱仪进行测定。结果供试品色谱中，在与对照品色谱保留时间相同的位置上，有相应色谱峰，而阴性对照色谱中无相应色谱峰。说明处方中其他药味对测定结果无干扰。见图3。

A.柚皮苷对照品；B.接骨丹胶囊样品；E.阴性样品

图3 RP-HPLC色谱图2.10 样品测定

按本方法的测定条件，对所收集到的3批样品进行测定，结果见表2。

表2 样品测定结果

3 讨论

接骨丹胶囊原标准中，采用当归、川芎的薄层色谱鉴别，而从接骨丹胶囊的处方组成来看，共有28味中药材，仅1个薄层色谱鉴别项目，无法从鉴别上覆盖该制剂的专属性鉴别。因此，在考虑处方组成以及鉴别可操作性的基础上，共增加栀子、延胡索2个薄层色谱鉴别项目，并以接骨丹胶囊中对接骨具有较大功能贡献的骨碎补为定位目标，增加了柚皮苷的含量测定[3]，增强了该制剂的专属性鉴别。

实验中发现在栀子的薄层色谱鉴别中，栀子样品溶液过滤与取上清液时，过滤溶液点样效果较上清液好，提示点样时采用过滤溶液。实验中考察了采用超声30,45,60min，加热回流60,120,180min分别处理样品，结果发现超声结果与回流结果有比较明显的差异，而回流60min与120min和180min无明显差异，综合考虑选择回流60min提取样品。本课题试验了乙腈与磷酸水溶液、甲醇与冰醋酸水溶液，结果表明乙腈-磷酸水溶液流动相的峰型在平均柱效的前提下容易出现拖尾，而甲醇流动相系统则表现出峰型对称，分离效果好，柱效高，故最终采用甲醇-冰醋酸水溶液流动相。

[1] 魏 海,付艳敏,李伯军.麝香接骨丹质量研究标准[J].长春中医学院学报,2002,18(3):55-56.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：中国医药科技出版社，2010:130，231-239.

[3] 林 葳,胡健敏,陈恩瑜.HPLC测定接骨丹片中柚皮苷的含量[J].海峡药学,2009,21(12):96-97.

(本文文献格式：耿燕楠，崔维刚，周利章，等.接骨丹胶囊的质量标准研究[J].山东化工，2017，46(08)：90-92，97.)

Quality Control of Jiegudan Capsules

GengYannan1,CuiWeigang2,ZhouLizhang2，ShiJunying3

(1. Affiliated Hospital of ShanDong university of traditional chinese medicine, Jinan 250011,China;,2. Linyi Food and Drug Inspecting and Testing CenterLinyi 276001, China;,3.Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355,China)

Objective： To establish a method for the quality control of Jiegudan Capsules.Method： Radix Corydalis Rhizoma and Fructus Gardeniae in Jiegudan Capsules were identified by TLC. The content of naringin was determined by HPLC. The chromatographic conditions were: Agilent Cl8 column, mobile phase being methanol-glacial acetic acid-water (33:2:65), and the detection wavelength at 283 nm. Results： The qualitative identification with TLC was specific. The linear ranges of naringin were 0.03146μg～0.2517μg( r =0.9999)，the average recovery was 98.17%.Conclusion： This method is sensitive, stable and accurate. It can be used for the quality control of Jiegudan Capsules.

Jiegudan capsules; TLC; naringin HPLC

2017-03-03

耿燕楠(1985—)，女，山东青岛人，主管药师，硕士研究生学位，主要从事中药质量控制和药理学研究。

R283.6；R927.2

A

1008-021X(2017)08-0090-03