2012—2014年上海市蜱和宿主动物新型布尼亚病毒感染状初步调查

朱奕奕，吴寰宇，张春哲，毛盛华，周 欣，张清慧，潘 浩

2012—2014年上海市蜱和宿主动物新型布尼亚病毒感染状初步调查

朱奕奕1，吴寰宇1，张春哲1，毛盛华1，周 欣1，张清慧2，潘 浩1

目的掌握上海市蜱分布及携带新型布尼亚病毒情况，了解上海市蜱动物宿主以及动物感染病毒状况，从而评估上海地区是否存在新型布尼亚病毒的传播风险。方法采用布旗法捕捉室外“游离蜱”，动物“寄生蜱”采用动物体表采集法捕获犬体表蜱类样本；蜱病毒核酸的检测采用荧光定量PCR法；动物血清抗新型布尼亚病毒的总抗体检测采用双抗原夹心法。结果2012—2014年期间，上海松江辰山和金山大金山岛监测到室外“游离蜱”，蜱种均为长角血蜱；上海17个区中10个区监测到“寄生蜱”，主要分布在崇明、奉贤、闵行等区，血红扇头蜱为优势蜱种。检测的143只蜱中，未发现病毒核酸。上海“寄生蜱”的动物宿主主要为犬，其次为羊，分布在6个主城区的198只犬、浦东新区和奉贤区的120份猪和崇明区的36头羊中，均未发现感染病毒。结论2012—2014年上海地区蜱尚未发现新型布尼亚病毒的携带，动物监测中未发现感染。因此，尚无证据证实上海地区为新型布尼亚病毒自然疫源地，需进一步调查研究证实。

发热伴血小板减少综合征；蜱；血红扇头蜱；长角血蜱

“发热伴血小板减少综合征”(Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome，SFTS)是由人粒细胞无形体、立克次体、病毒等病原体引起并以发热伴血小板减少为主要临床特征的一种综合症。2010年9月，Yu XJ等学者在我国部分省份SFTS病例的血液中分离到了一种新型病毒，命名为“发热伴血小板减少综合征新型布尼亚病毒”，简称新型布尼亚病毒(SFTSV)[1]。新型布尼亚病毒病例多分布于丘陵地带，呈高度散发。研究表明蜱是最为可能的传播媒介，部分病例有蜱暴露或叮咬史；蜱中分离到病毒并且蜱源的病毒序列与人源病毒同源性高达93%～100%；蜱的宿主动物(牛、羊、犬)中血清学抗体检测呈阳性。蜱是一种吸食血液的节肢动物，能寄生于家畜体表。2010年，吕燕宁等人对北京地区5个郊区县81份鼠类、19份犬类血清以及97只蜱开展了SFTSV核酸检测，结果均为阴性[2]。目前上海地区已报告输入性发热伴血小板病例[3]，但关于蜱是否携带SFTSV，蜱动物宿主SFTSV的感染状况等未见相关研究报道。因此，有必要对上海地区蜱种类、宿主动物以及携带新布尼亚病毒情况开展研究。本研究选择上海具有代表性的区，于2012—2014年连续开展蜱分布、带毒情况调查和动物宿主病毒感染状况的检测，从而为掌握上海地区蜱的种群分布、动态变化和携带新布尼亚病毒情况，为宿主动物感染的种类、状况提供科学依据，同时为上海市蜱传疾病的科学防制和防控决策提供决策参考。

1 材料与方法

1.1 时间和地点 2012—2014年期间，每年开展两次，于5—10月在上海市17个区范围内开展寄生蜱、野外和室内游离蜱调查：1)每个区调查点数量不少于5个；2)调查动物总数不少于100头，两条件均需满足。调查同时，若该地点不适宜开展室内游离蜱调查，可以另选其他点以补足数量。发现蜱阳性后需在周边开展拖旗法调查外环境蜱情况。

1.2 方法

1.2.1 野外环境游离蜱的采集 发现蜱阳性的调查点周边开展野外环境游离蜱调查。采用人工布旗法： 用90 cm×60 cm的白棉布旗，窄的一边两端用绳子固定在竹竿上，将旗子平铺地面，拖拉绳子前进，每步行10 m即可停下检视附着的蜱数，根据调查地段内植被情况选择不同的方法进行定时或定距拖蜱。如需调查密度，可在选择的样地均匀地拖或挥旗，以人/h 或100 m/h所捕捉的蜱数进行密度指数统计。采集的蜱放入统一编号的采集管内，带回实验室进行分类鉴定、计数和检测。

1.2.2 室内游离蜱的采集 于畜舍、圈栏、狗房、鸡窝等场所采集时，需检查其表面尤其是墙角，不易进入的巢穴，可利用吸引或粘附的长柄工具如勺匙、绒布探棒等进行调查，狗舍、鸡舍等如是土坯或砖可翻砖寻找。采集的蜱放入统一编号的采集管带回实验室进行分类鉴定、计数和检测。

1.2.3 动物“寄生蜱”采用动物体表捕捉法

1.2.3.1 采用宿主动物体表检拾法 在家畜如牛、羊、狗等身上进行体表捡拾，采集的蜱在实验室中进行相关的分类鉴定、计数和检测。

1.2.3.2 家畜和家禽中蜱的检查方法 动物适当固定，重点检查动物的耳朵、眼睛周围、口鼻周围、脖子、腋窝、胸脯、乳房、大腿根、阴囊、肛周、会阴、尾根等部位，毛较长的动物需用手触摸，发现蜱时，如正在吸血的蜱类假头容易折断，应用小镊子夹紧假头先轻轻拉拽和左右晃动，使之能上下摇动，再果断拔除，必要时可连带部分动物皮毛。

1.2.4 蜱病毒核酸的检测 蜱标本按重量分组，每组约30 mg，用高压灭菌过的无菌、去除RNA酶的水清洗3次后，然后用高压灭菌过的滤纸吸干。各组标本分别放入无菌研钵中，加入适量液氮快速冷冻，加入500 μL裂解液,在冰上研磨均匀。按照RNA提取试剂盒(购自中山大学达安基因股份有限公司)说明提取总RNA，检测设阳性和阴性对照，进行荧光定量PCR检测和结果判定。试验结果判定Ct≤35为阳性，Ct值>35时为阴性。

1.2.5 动物血清抗病毒的总抗体检测 采用ELISA法检测动物血清中的抗新型布尼亚病毒总抗体。试剂盒(受赠于中国疾病预防控制中心病毒病控制所出血热室)在微孔条包被新型布尼亚病毒重组抗原，配以新型布尼亚病毒酶标抗原，采用双抗原夹心法原理检测人及各种动物血清、血浆或血浆中的SFTS总抗体。检测设阳性和阴性对照，设定酶标仪波长为450 nm，测定各孔OD值。Cutoff=阴性对照OD值的平均值+0.1，阳性判定：样品OD值≥Cutoff者判为阳性，样品OD值

2 结 果

2.1 上海市蜱分布及携带新型布尼亚病毒的调查研究

2.1.1 游离蜱 2014年在本市17个区共捕获54只蜱，均为长角血蜱。其中松江区辰山捕捉到40只，金山区大金山岛捕捉到14只。

2.1.2 寄生蜱 2012-2014年在本市共捕获“寄生蜱”306只，其中2012年捕捉到132只，2013年捕捉到63只，2014年捕捉到111只。3年期间能够捕捉到蜱虫的共有10个区，仅闵行区和崇明区每年均能捕捉到蜱。区分布详见表1。

“寄生蜱”宿主有犬、猫、羊、牛、猪等动物。其中调查的犬最多，占3年宿主总调查数的83.4%。从表2可以看出，“寄生蜱”主要来自于犬类，其次是羊，但在猫、牛和猪等动物中没有发现蜱。2014年从鼠(黄胸鼠)体表捕捉到一只蜱。2012、2013年捕捉的蜱全部来自犬，2014年捕捉的蜱来自犬、羊和黄胸鼠。在3种宿主动物中，“寄生蜱”来于犬的最多，共捕捉到的“寄生蜱”数量达247只，来源于羊的“寄生蜱”捕捉量达58只。来源于鼠的寄生蜱仅捕捉到1只。

表2 2012-2014年上海市“寄生蜱”调查中被调查的宿主和阳性宿主情况Tab.2 Tick carriage and prevalence on host animals in Shanghai, from 2012 to 2014

2.1.3 上海地区主要蜱种和分布 由表3可知：于2012-2014年每年5—10月期间，在本市17个区中捕捉蜱。其中血红扇头蜱共捕捉到243只，均为“寄生蜱”，除一只捕捉于鼠，其他均捕捉于犬。243只血红扇头蜱主要分布在上海郊区，主要为奉贤、崇明、松江、闵行、青浦等郊区，城区也有少量分布。血红扇头蜱活动高峰分别为6月和9月，以6月为主。长角血蜱共捕捉到113只，其中59只为“寄生蜱”，占52.2%，“寄生蜱”的长角血蜱主要捕捉于闵行和崇明，闵行为主(98.3%)，崇明只有1只；宿主来源主要来自于羊(98.3%)，只有1只来自犬。另捕捉4只铃头血蜱，捕捉地点在嘉定区华庭街道，来自于宠物犬。

表3 2012-2014年期间上海市不同蜱种的月分布情况Tab.3 Monthly distribution of tick species in Shanghai, from 2012 to 2014

2.1.4 蜱中新型布尼亚病毒的检测情况 360只蜱被送至实验室，检测了其中的143只蜱，检测率41.21%。143只蜱中既有游离蜱也有寄生蜱，既包含血红扇头蜱也包含长角血蜱,经real time RT-PCR检测结果均为阴性。见表4。

2.2 宿主动物新型布尼亚病毒感染状况调查 在本市蜱宿主动物犬、羊等可查到寄生蜱，开展上海市犬、猪、羊等动物中新型布尼亚病毒的感染情况调查。2.2.1 犬中抗新型布尼亚病毒总抗体结果 共检测了本市6个区共198头犬的血清标本犬主要为家养宠物犬，各区的犬血清采集情况如下：黄浦区59份；静安区：28份；徐汇区：33份；长宁区：28份；虹口区：20份；杨浦区：30份。所有犬类血清检测结果均为抗新型布尼亚病毒总抗体阴性。

2.2.2 猪中抗新型布尼亚病毒总抗体结果 共检测了本市2个区共120头猪的血清标本，其中60份来自浦东新区，60份来自奉贤区。所有猪血清检测结果均为抗新型布尼亚病毒总抗体阴性。

2.2.3 羊中抗新型布尼亚病毒总抗体结果 共检测了崇明区36头羊的血清标本，均为抗新型布尼亚病毒总抗体阴性。

3 讨 论

蜱作为一种重要的媒介，可以传播新型布尼亚病毒等多种病原体[4]。人类感染SFTSV的风险与宿主的数量，疫源地的特点、人类暴露概率、蜱虫叮咬频率和个人防护等均有关。截至2006年，世界已知蜱类有3科18属897种，中国发现2科10属119种[5]。本研究发现上海地区采集的蜱经鉴定分别隶属于硬蜱科、硬蜱亚科的血蜱亚科和扇头蜱亚科，血蜱亚科为长角血蜱(Haemaphysalis longicornis) 和铃头血蜱(Haemaphysalis campanulata)，扇头蜱亚科为血红扇头蜱(Rhipicephalus sanguineus)。其中游离蜱均为长角血蜱，寄生蜱发现蜱种类为血红扇头蜱、长角血蜱和铃头血蜱。中国和韩国等均发现长角血蜱和血红扇头蜱携带新型布尼亚病毒[6-8]。2016年希腊在血红扇头蜱中检出新型布尼亚病毒[9]。中国铃头血蜱虽未发现新型布尼亚病毒携带阳性，但作为可能的传播媒介，仍应引起重视[8]。本次研究检测了捕获的143只蜱，包括上述血红扇头蜱和长角血蜱，新型布尼亚病毒核酸检测结果均为阴性。

表4 2012-2014年期间蜱中布尼亚病毒检测结果Tab.4 Novel bunyavirus detection on ticks in Shanghai, from 2012 to 2014

调查发现上海地区犬、羊和鼠携带寄生蜱。2011年刘琴等发现上海市犬类动物体表携带血红扇头蜱和长角血蜱，本次研究结果与之一致[10]。中国山东、湖北等地区均发现羊、犬、牛等动物中新型布尼亚病毒抗体阳性[11-14]。羊(74.8%), 牛(57.1%), 狗(52.1%), 鸡(35.9%)等动物中的抗体水平[12]可能较实际报告病例数更为真实体现SFTSV疫源地的实际感染情况。此外，有研究发现黑线姬鼠SFTSV检测阳性，可能是发热伴血小板减少综合征的潜在宿主[15]。根据中国宁波地区的一项研究，蜱虫叮咬鼠的过程可能导致鼠感染SFTSV[6]。本次研究结果发现上海地区犬、羊、猪等动物中开展血清新型布尼亚病毒IgG抗体检测结果均为阴性，暂未发现动物感染SFTSV。因此，本次研究尚未能明确上海地区是否为SFTSV的自然疫源地，在今后的监测中，应关注蜱、动物和人群的监测结果。

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Pan Hao，Email：panhao@scdc.sh.cn

PreliminaryinvestigationoninfectionofnovelbunyavirusamonganimalsandticksinShanghai,from2012to2014

ZHU Yi-yi1, WU Huan-yu1, ZHANG Chun-zhe1, MAO Sheng-hua1, ZHOU Xin1, ZHANG Qing-hui2, PAN Hao1

(1.ShanghaiMunicipalCenterforDiseaseControlandPrevention,Shanghai200336,China; 2.ShanghaiSongjiangDistrictCenterofDiseaseControlandPrevention,Shanghai, 201620,China)

To investigate the distribution of ticks and to detect the new bunyavirus in ticks and infection rate in animals in Shanghai, outdoor free ticks were captured by flag method and ticks on animals were collected by animal capture. SFTSV in ticks were detected by real-time RT-PCR. Total antibodies against SFTSV in host animal sera were tested by double antigen sandwich method. Results showed that during 2012-2014, free ticks were captured in Chenshan Park and Jinshan Island, which were allHaemaphysalislongicornis. Ten of seventeen districts found ticks on animals which were dominantlyRhipicephalussanguineus. No nucleic acid of SFTSV was detected in 143 ticks. Main host animal for ticks was dog, sheep was in the second. Sera in 198 dogs from 6 urban districts, 120 swine from Pudong and Fenxian districts and 36 sheep from Chongming District were all SFTSV antibody negative. Ticks were not found with SFTSV in Shanghai during 2012-2014. No SFTSV infection was found in host animals. Therefore, there is no evidence that Shanghai is the natural foci of SFTSV. Further surveillance and investigations should be carried out in the future.

SFTS; tick;Rhipicephalussanguineus;Haemaphysalislongicornis

10.3969/j.issn.1002-2694.2017.08.007

上海市第四轮公共卫生三年行动计划传染病与病原微生物学重点学科资助项目(No.15GWZK0101)，上海市第四轮公共卫生三年行动计划高端海外研修团队培养计划资助项目(No.GWTD2015S02)，长三角区域重大突发性传染病跨境公共卫生安全保障技术的开发及示范应用(No.16495810201)联合资助

潘 浩，Email：panhao@scdc.sh.cn

1.上海市疾病预防控制中心，上海 200336； 2.上海市松江区疾病预防控制中心，上海 200336

The 4th Round of Three-Year Public Health Action Plan of Shanghai(No. 15GWZK0101)；the 4th round of three years action plan on public health of Shanghai for overseas training plan for high-end talents(No. GWTD2015S02)；Study on the Innovation and Demonstration of Regional Public Health Security Technology on Cross-border Emergency Infectious Diseases Control and Prevention in Yangtze River Delta(No. 16495810201)

R384.4

：A

：1002-2694(2017)08-0700-05

2017-02-17编辑：梁小洁