参苓白术散对皮肤机械屏障功能障碍小鼠皮肤水分的影响

刘媛++解宇环++何丹++王思敏++陶颖++孙晓菲

摘要：目的通過观察参苓白术散对皮肤机械屏障功能障碍模型小鼠皮肤水分的影响，探讨其对皮肤机械屏障功能的修复作用。方法将50只健康ICR小鼠，随机分为5组，每组10只，即正常组，模型组，参苓白术散高、中、低剂量组。参苓白术散各组从第1 d 起，分别给予参苓白术散（40 g·kg-1、20 g·kg-1、10 g·kg-1）灌胃；其余各组灌胃给予蒸馏水。1次/d，连续13d。模型组，参苓白术散高、中、低剂量组从第9d起，采用胶带剥离法复制小鼠皮肤屏障功能障碍模型，2次/d，连续5d。分别于造模前1d、造模第1d及造模第5d测定皮肤经皮水丢失值（transepidermal water loss，TEWL）及皮肤水合度。结果造模前1d，各组小鼠皮肤TEWL值及皮肤水合度均无明显变化（P>005）；造模第1d，模型组小鼠皮肤TEWL明显升高（P<0001），皮肤水合度明显下降（P<0001）；造模第5d，参苓白术散给药组小鼠皮肤TEWL值显著低于模型组（P<001，P<0001），参苓白术散给药组小鼠皮肤水合度显著高于模型组（P<001，P<0001）。结论参苓白术散具有保水作用进而促进皮肤机械屏障功能修复。

关键词：参苓白术散；皮肤机械屏障；TEWL；皮肤水合度

中图分类号：R2855文献标志码：A文章编号：1007-2349（2017）08-0075-03

[WT5HZ][JZ]Effect of Shenlingbaizhu Powder on Skin Moisture of Mice with Skin Mechanical Barrier Dysfunction

[WT5BZ][JZ]LIU Yuan，XIE Yu-huan，HE Dan，WANG Si-min，TAO Ying，SUN Xiao-fei

[WT5"BX][JZ]（Yunnan University of Traditional Chinese Medicine，Kunming 650500，China）

[WTHZ]【Abstract】[WTBZ]Objective：To observe the effect of Shenlingbaizhu Powder on the skin moisture of mice with skin mechanical barrier dysfunction and to explore its effect on the repair function of skin mechanical barrierMethods：50 healthy ICR mice were randomly divided into 5 groups，10 rats in each group，normal group，model group，Shenlingbaizhi groups with high，middle and low doseShenlingbaizhi groups were intragastricaly respectively administrated with Shenlingbaizhu Powder（40 g·kg-1，20 g·kg-1，10 g·kg-1）from the first day while the other groups were given distilled water，once daily for continuous 13 daysIn the model group and Shenlingbaizhi groups with the high，middle and low dose，the skin barrier dysfunction model was duplicated by tape stripping method from the 9th day，twice daily for continuous 5 daysThe transepidermal water loss（TEWL）and skin hydrature were respectively measured 1 day before modeling，the 1st day and 5th day of model establishmentResults：TEWL and skin hydrature did not change significantly（P>005）1 day before modelingBut the TEWL significantly increased（P<0001）and the skin hydrature significantly decreased（P<0001）in the model groupAt the 5th day after model establishment，TEWL value of mice skin in Shenlingbaizhu powder groups was significantly lower than that in model group（P<001，P<0001）The skin hydration in Shenlingbaizhi groups was significantly higher than that in the model group（P<001，P<0001）Conclusion：Shenlingbaizhu powder has water retention and promote the repair of skin mechanical barrier function

[WTHZ]【Key words】[WTBZ]Shenlingbaizhu powder，skin mechanical barrier，TEWL，skin hydrature

完整的皮肤是机体与外界的一道天然屏障，具有抵御外界物理、化学损伤及生物抗原等物质侵入的功能，还能适应外界温度变化影响，参与新陈代谢过程。皮肤屏障有狭义与广义之分[1]。狭义的皮肤屏障通常指表皮，尤其是角质层的物理性或机械性屏障结构；广义的皮肤屏障包括皮肤的机械性屏障、神经屏障、免疫屏障等，其中机械性屏障直接与外界接触，是机体与外界环境之间的重要屏障，可防止体内营养物质、水分等的丢失，在一定程度上可以阻止外界化学、生物等因素对机体造成的损伤。皮肤屏障功能障碍是特应性皮炎[2]、老年性皮肤瘙痒症[3]、银屑病[4]及鱼鳞病[5]等皮肤病疾病共同的发病机制之一，也是这些皮肤病变发生发展、反复发作的重要原因，改善皮肤屏障功能是治疗多种皮肤病的重要措施。目前现代医学在治疗皮肤屏障功能障碍相关皮肤病时主要采取抗炎、抗过敏、免疫抑制及保湿等对症处理的原则[6-9]，虽能缓解皮肤急性期的病变，但对慢性期皮肤屏障功能的修复疗效不佳，无法解决停药后复发的问题。中医治疗皮肤病虽然起效慢，但具有远期疗效好，[HJ]复发率低的优势。中医认为“脾虚湿盛”是该类疾病基本病机，当以“健脾渗湿”为主要治法之一。健脾经典方剂参苓白术散源于《太平惠民和剂局方》，是健脾渗湿经典代表方药，具有益气健脾，渗湿止泻之功效。因此本研究选用参苓白术散，根据中医“健脾法”对该类皮肤病的确切疗效，探讨参苓白术散对皮肤机械屏障功能障碍的修复作用。

1材料与仪器

11实验动物ICR小鼠，SPF级，雌雄各半，体重18-22 g，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供。合格证号：SCXK（京）2014-0004，合格证号：11401300043224。

12主要药品及试剂参苓白术散：人参60 g，茯苓60 g，炒白术60 g，山药60 g，炒白扁豆45 g，莲子肉30 g，炒薏苡仁30 g，砂仁30 g，炒桔梗30 g，炙甘草60 g，购于昆明市一心堂连锁店，经中药鉴定教研室张洁老师鉴定为正品。按方中比例水煎（人参单独先煎煮30 min），过滤、合并滤液，浓缩制成浸膏，4℃保存。

13仪器及设备YLS-Q4耳肿打耳器（山东省医学科学院设备站），FR-3018剃毛器（余姚飞人电器有限公司），MSC1177紧凑型皮肤水合测量仪（芬兰 Delfin Technologies 公司），SWL4经皮水分流失测定仪（芬兰 Delfin Technologies 公司）。

2方法

21动物分组及给药选取50只ICR小鼠，随机分为5组，每组10只，即正常组，模型组，参苓白术散高、中、低剂量组。高剂量组灌胃给予40 g生药·kg-1参苓白术散水煎液；中剂量组灌胃给予20 g生药·kg-1参苓白术散水煎液；低剂量组灌胃给予10 g生药·kg-1參苓白术散水煎液，其余各组灌胃给予蒸馏水。按020 mL/10 g给药体积给药，1次/d，连续13 d。

22胶带剥离法复制小鼠皮肤机械屏障功能障碍模型模型组，参苓白术散高、中、低剂量组从第9 d起，采用胶带剥离法复制小鼠皮肤机械屏障功能障碍模型，2次/d，连续5 d。

23皮肤TEWL值测定分别于造模前1 d、造模第1 d及造模第5 d，用VapoMeter测量仪测定小鼠颈背部皮肤，造模第1 d以判定模型是否成功，造模第5 d以测定受试物对小鼠皮肤TEWL的干预作用。测量在室内进行，无阳光直射，室温20～25℃，空气相对湿度10%～60%。测量时应固定好小鼠，保证测量仪器与待测皮肤表面垂直接触，每一测试部位测量3次，3个数值取其平均值。

24皮肤水合度测定分别于造模前1 d、造模第1 d及造模第5 d，用MoistureMeter SC Compact测量仪测定小鼠颈背部皮肤，造模第1 d以判定模型是否成功，造模第5 d以测定受试物对小鼠皮肤水合度的干预作用测量在室内进行，无阳光直射，室温20～25℃，空气相对湿度20%～70%。测量时应固定好小鼠，保证测量仪器与待测皮肤表面垂直接触，每一测试部位测量3次，3个数值取其平均值。

3统计学分析

实验数据以表示，组间比较采用单因素方差分析法（One-way analysis of variance ANOVA），方差齐者采用LSD法检验，方差不齐者采用Tamhanes法检验。

4实验结果

41参苓白术散对小鼠皮肤TEWL值的影响结果显示，造模前1d，与正常组比较，其余各组小鼠皮肤TEWL值无明显变化，差异无统计学意义（P>005）。造模第1d，与正常组比较，模型组小鼠皮肤TEWL值明显升高，差异具有统计学意义（P<0001），表明模型组小鼠皮肤机械屏障功能受损；与模型组比较，参苓白术散各给药组小鼠皮肤TEWL值有下降趋势，但差异无统计学意义（P>005）。造模第5d，与正常组比较，模型组小鼠皮肤TEWL值明显升高，差异具有统计学意义（P<0001）；与模型组比较，参苓白术散各给药组小鼠皮肤TEWL值均明显下降，差异具有统计学意义（P<001，P<0001）。结果见表1、2、3。

42参苓白术散对小鼠皮肤水合度的影响结果显示，造模前1 d，与正常组比较，其余各组小鼠皮肤水合度无明显变化，差异无统计学意义（P>005）。造模第1 d，与正常组比较，模型组小鼠皮肤水合度明显降低，差异具有统计学意义（P<0001），表明模型组小鼠皮肤机械屏障功能受损。造模第5 d，与正常组比较，模型组小鼠皮肤水合度明显下降，差异具有统计学意义（P<0001）；参苓白术散各给药组小鼠皮肤水合度均升高。其中高剂量组和中剂量组与模型组比较，差异具有统计学意义（P<001，P<0001）。结果见表4、5、6。

5讨论

TEWL值与皮肤水合度是评价皮肤屏障功能的重要指标[10]。TEWL是通过测定皮肤表面的水蒸气压梯度表明水分散失的情况，反映皮肤的水通透屏障[11]。当皮肤屏障功能受损时，TEWL值升高；相反地，TEWL的降低提示皮肤屏障的修复。TEWL值的变化可准确、稳定地反映皮肤屏障的早期恢复过程。皮肤水合度，即皮肤角质层含水量[12]。正常情况下，角质层的含水量约占角质层干重的30%～50%，若含水量低于角质层干重的10%角质层变脆易碎，可导致皮肤屏障功能减弱，皮肤会发生干燥、脱屑的病征。本研究使采用胶带剥离法复制小鼠皮肤机械屏障功能障碍模型，给予参苓白术散干预后，通过测定皮肤TEWL值及皮肤水合度，研究参苓白术散对皮肤机械屏障功能障碍模型的修复作用。本实验结果显示造模前1d，各组小鼠皮肤TEWL值及皮肤水合度均无明显变化；造模第1d，模型组小鼠皮肤TEWL值较正常组显著升高，皮肤水合度较正常组显著下降，表明造模成功；造模第5d，给药组小鼠皮肤TEWL值较模型组显著下降，而皮肤水合度较模型组显著升高，说明参苓白术散具有保水作用，进而促进皮肤机械屏障功能的修复。

“健脾渗湿”是中医治疗皮肤屏障功能障碍性皮肤病的重要治法，但中医治疗往往缺乏机理研究。本研究将中医学理论与现代医学理论相结合，为中医健脾法治疗皮肤屏障功能障碍相关皮肤病提供了一定的现代科学依据，但参苓白术散修复皮肤屏障功能作用的机制还待进一步研究。

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