驻石部队师职女干部高危型HPV基因型分布

王宪灵，王缚鲲，赵博华

(白求恩国际和平医院检验科，河北石家庄050082)

驻石部队师职女干部高危型HPV基因型分布

王宪灵，王缚鲲，赵博华

(白求恩国际和平医院检验科，河北石家庄050082)

目的了解驻石部队师职女干部宫颈高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染情况及亚型分布特点，为宫颈癌的预防与诊治提供理论依据。方法采集2013年6月至2016年8月于白求恩国际和平医院妇科体检的588例师职女干部宫颈脱落细胞，应用实时荧光PCR对其进行高危型HPV基因分型检测。结果588例受检者高危型HPV总感染率为11.9%(70/588)，其中单一感染率为8.2%，多重感染率为3.7%，检测出的高危型HPV主要型别依次为HPV52型(14.6%)、58型(14.6%)、68型(14.6%)、18型(12.5%)、66型(12.5%)。HPV感染年龄分布情况：≤40岁组4例均未感染；41～50岁组感染率为11.2%(33/294)，主要型别依次为HPV66型、52型、18型；51～60岁组感染率为12.8% (32/250)，主要型别依次为HPV68型、58型、52型；＞60岁组感染率为12.5%(5/40)，主要型别为HPV58型；各年龄组的HPV感染率比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论驻石部队师职女干部高危型HPV感染以单一感染为主，感染率较高的亚型是HPV52、58、68型，不同年龄分布的感染率无显著差异。

人乳头瘤病毒；基因分型；感染率；师职女干部

人乳头瘤病毒(human papilloma virus，HPV)是一种嗜皮肤和黏膜上皮细胞的双链环状DNA病毒，人是其唯一宿主，目前已发现170多种亚型[1]。感染HPV的型别不同，临床表现也不相同。人们依据其不同型别致癌危险性高低分为低危险型和高危险型HPV，低危型HPV主要引起疣等良性病变，而高危险型HPV则与宫颈癌的发病密切相关。高危型HPV主要有16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、82等型别。为了解高危型HPV在驻石部队师职女干部中的感染情况，制定有效的防治措施，笔者通过实时荧光定量PCR技术对588例驻石部队师职女干部的宫颈脱落细胞进行了高危型HPV的基因分型检测，并对型别分布进行统计分析。

1 材料与方法

1.1 标本来源选择2013年6月至2016年8月于白求恩国际和平医院妇科体检师职女干部，剔除复查数据，共计588例，年龄39～63岁，平均52.3岁；其中≤40岁组4例，41～50岁组294例，51～60岁组250例，＞60岁组40例。

1.2 主要仪器和试剂ABI7500 Rea1-time PCRSystem及其配套分析软件(美国ABI公司)；HPV提取及分型检测试剂盒由上海之江生物科技股份有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 宫颈脱落细胞的收集月经干净后至少3 d，检查3 d内无性生活史、无阴道用药及冲洗史。用无菌生理盐水棉球洗去宫颈外分泌物，将宫颈刷伸入宫颈处停留5 s，顺时针轻轻转动宫颈刷3～5圈，慢慢取出宫颈刷，将其放入装有专用细胞保存液的样本管中送检，标本于-20℃保存，避免反复冻融。

1.3.2 DNA提取严格按照操作步骤提取DNA。标本室温复融，充分震荡混匀15 s，吸取1 mL液体转至1.5 mL离心管中，13 000 r/min离心5 min，沉淀加无菌生理盐水1 mL混匀，13 000 r/min离心5 min，小心吸弃上清，沉淀直接加入100 μL核酸抽提液充分混匀15 s，100℃水浴(99℃干浴)10 min，13 000 r/min离心5 min，上清即为PCR反应模板。同时取阴性和阳性对照各100 μL于1.5 mL离心管中(冻存试剂融解后需震荡混匀10 s)，分别加入核酸提取液100 μL充分混匀，100℃水浴10 min，13 000 r/min离心5 min，取上清作为PCR反应模板。

1.3.3 DNA扩增取4种HPV核酸荧光PCR检测混合液n×36 μL分别与4份n×0.4 μL Taq酶(n为反应管数)，震荡混匀数秒，3 000 r/min离心数秒。上述4种配制好的混合液各36 μL分别置于薄壁PCR反应管，然后将待检标本、阴性、阳性对照品的处理上清液4 μL分别加入上述反应管中，盖好管盖，立即进行PCR扩增反应。扩增条件为：94℃×2 min；再按93℃× 10 s→62℃×31 s，循环40次；单点荧光检测在62℃。反应体系为40 μL，能检出HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、82共15个型别。

1.4 统计学方法应用SPSS 14.0统计软件进行数据分析，率的比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。多重感染者则重复计算各基因型阳性率。

2 结果

2.1 HPV感染情况588例体检者中，检出高危型HPV感染70例，总感染率为11.9%。其中单一感染48例(8.2%)；双重感染18例(3.0%)，其中39+68型4例，33+58型2例，58+66型2例，16+18型2例，58+16型2例，68+31型1例，52+59型1例，58+18型1例，39+68型1例，66+68型1例，52+18型1例；三重感染4例(0.7%)，18+51+52型、31+58+66、18+56+66型、16+52+ 68型各1例。

2.2 HPV感染亚型分布588例体检者高危型HPV感染的各亚型分布中，其感染频度前5位依次为HPV52型14例(14.6%)、HPV58型14例(14.6%)、 HPV68型14例(14.6%)、HPV18型12例(12.5%)、H PV 66型12例(12.5%)。不同年龄段检出的高危型HPV各亚型分布见表1。

表1588例体检者不同年龄段检出的高危型HPV各亚型分布(例)

2.3 高危型HPV感染年龄分布588例体检者在≤40岁、41～50岁、51～60岁和＞60岁组高危型HPV的感染率分别为0、11.2%、12.8%、和12.5%。除≤40岁组检测例数较少不参与统计外，对其余3个年龄组进行χ2检验，显示不同年龄段高危型HPV感染情况差异无统计学意义(χ2=0.329，P＞0.05)，见表2。

表2588例体检者不同年龄段高危型HPV感染情况

3 讨论

宫颈癌是全球除乳腺癌之外导致妇女死亡的第二大恶性肿瘤，根据我国国家癌症中心公布的最新数据估计，2015年我国宫颈癌新发病例约10万例，死亡病例约3万例[2]。生殖道高危型HPV持续感染是导致宫颈癌和子宫颈上皮内瘤变(CIN)的必要因素之一[3-4]，一旦发生感染，患宫颈癌的危险性相对增加250倍[5]。HPV是一种具有种属特异性的病毒，人是HPV感染的唯一宿主，具有高度的宿主特异亲和力[6]。有70%～80%的女性一生中至少感染过一种HPV型，但大多数为一过性感染，1～2年可自然清除，只有少数免疫系统较弱的女性才会造成持续感染。持续感染尤其是高危型HPV持续感染是引起宫颈癌及癌前病变的重要因素[7-8]。从感染到发生癌变一般需要10年左右的时间[9]。

不同型别的HPV感染有地域性差异，世界范围内以高危型HPV16、18型感染率最高[10]，亚洲常见HPV58、52型感染[11]。岑尧等[12]所做的中国女性人乳头瘤病毒感染状况及高危型别分布的Meta分析显示：我国高危型HPV感染主要型别依次为16型、52型、58型、33型、18型，南方地区和北方地区高危型HPV型别分布存在差异，南方地区以16型和52型为主，北方地区则以16型和58型常见。本研究共检测15个高危型HPV基因，除35、45、82三个型别未检出外，其他型别均有检出。检出的高危型HPV主要型别依次为52型、58型、68型、18型、66型，而我国最常见感染型别HPV16型在本研究中检出例数较少，且不同年龄段间型别分布略有差异。目前针对HPV感染尚无特效治疗办法，虽已研制出宫颈癌疫苗，但其针对的高危型别仅为16、18型，并且对接种年龄有一定要求，以11～12岁为佳。疫苗只有预防作用，对宫颈癌或癌前病变没有治疗作用。在宫颈癌的防治上早期发现HPV感染、早期分型、早期干预治疗具有重要意义[13]。

本研究显示高危型HPV感染率(11.9%)低于2008年中国癌症基金会发布的一项流行病学研究，即中国汉族妇女高危型HPV感染率约为15%，这可能与本研究所选人群为部队师职女干部，与其文化水平较高、卫生状况较好有关。感染类型以单一型别为主，与王烈宏等[14]的报道一致。单一型别感染率为8.2%，多重型别混合感染率为3.7%，多重感染更易导致宫颈瘤变的发生[15]。高危型HPV在各年龄段均存在一定的感染，不同年龄段感染无显著差异，和赵夏丰等[16]的研究一致。虽然本研究例数较少，但足以说明在临床无症状人群中，高危型HPV仍存在较高的感染率，有必要加强宣传宫颈癌的防治知识，加大普查力度，以进一步减少宫颈癌的发生。

不同地区、不同种族HPV感染率以及感染型别存在差异[17]，不同型别所致宫颈癌的危险性亦不同，HPV基因分型检测对于生殖道感染以及子宫颈癌的早期发现、预防及治疗具有重要意义。

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Genotype distribution of high-risk human papillomavirus in female division-level cadres in Shijiazhuang area.

WANG Xian-ling,WANG Fu-kun,ZHAO Bo-hua.Department of Clinical Laboratory,Bethune International Peace Hospital of PLA,Shijiazhuang 050082,Hebei,CHINA

ObjectiveTo investigate the genotype distribution of high-risk human papillomavirus(HPV)infection of female division-level cadres in Shijiazhuang area,and to provide evidence for the diagnosis and prevention of HPV infection.MethodsA total of 588 cervical exfoliated cell samples was collected from female division-level cadres who underwent physical examination in Bethune International Peace Hospital from June 2013 to August 2016.HPV genotypes were determined with real-time fluorescent PCR(Real-time PCR)assay.ResultsAmong the 588 cases,70 cases were tested for HPV-positive with the total positive rate of 11.9%.Among the positive cases,8.2%were determined to be infected with single HPV genotype and 3.7%with multiple HPV genotypes.The most prevalent HPV subtypes in the present study were as follows：HPV52(14.6%),HPV58(14.6%),HPV68(14.6%),HPV18(12.5%),and HPV66(12.5%).The HPV-positive rate were 0(0/4)in the age≤40 group,11.2%(33/294)in the range age of 41～50 group with the most prevalent HPV subtypes as followed HPV66,HPV52,HPV18,12.8%(32/250)in the age of 51～60 group with the most prevalent HPV subtypes of HPV68,HPV58,HPV52 and 12.5%(5/40)in the age＞60 group with the most prevalent HPV subtypes of HPV58,respectively.There was no significant difference among different age groups (P＞0.05).ConclusionFor the female division-level cadres in Shijiazhuang area,single infection is the major form of HPV infection.The most prevalent high-risk HPV subtypes are HPV52,HPV58 and HPV68.There is no significantly difference in the HPV positive-rate among different age groups.

Human papillom avirus(HPV);Genotyping;Infection rate;Female division-level cadres

R711

A

1003—6350（2017）14—2306—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.14.021

2017-01-18)

王缚鲲。E-mail：wangfk8@sina.com