6种杀菌剂对山苍子组培污染控制效果研究

张立　李涛　吴娇

摘要 山苍子是我国的能源树种，具有很高的经济价值。在山苍子组培中，染菌比较严重，导致继代培养无法进行。为解决生产中的实际问题，在配制培养基时，分别添加了6种杀菌剂进行对比试验。结果表明，防止山苍子组培苗染菌效果较好的药剂为80%多福锌可湿性粉剂，其防治效果为85.71%，抑菌效果为89.39%，山苍子存活率为61.90%。

关键词 山苍子；组织培养；杀菌剂；染菌率

中图分类号 S482.2 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）13-0108-01

Abstract Litsea cubeba is our country′s energy tree species with high economic value.In the tissue culture of Litsea cubeba，contamination is serious，resulting in the subculture can not be done.To solve the actual problems in the production，in the preparation of culture medium，6 kinds of fungicides were used respectively.The results showed that the better fungicide to control contamination of Litsea cubeba plantlets was the 80% of Christopher zinc wettable powder.The controlling effect was 85.71% and the inhibitory effect was about 89.39%.At the same time，the survival rate of Litsea cubeba plantlets was 61.90%.

Key words Litsea cubeba；tissue culture；fungicide；pollution rate

山苍子是我国的特有资源，其果实含有丰富的柠檬醛、脂肪醇，具有较高的经济开发价值。目前，山苍子主要为种子繁殖，成活率低，但利用组培快繁技术，山苍子外植体又易褐化[1]，杂菌污染现象严重。游 玲等从山苍子植株中分离出25株内生真菌[2]，魏练平等从山苍子叶中分离出2株内生真菌[3]。采用杀菌剂防治外植体污染在植物组织培养中已有研究[4-6]。本试验在培养基中添加6种农用杀菌剂，研究控制山苍子组培内源菌污染的有效方法，可为以后组培快繁提供参考和依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

组织培养材料为当年生山苍子枝条。选取的杀菌剂多数为复配剂，分别为50%氯溴异氰尿酸可溶粉剂、31%绿亨氮苷·吗啉胍可溶粉剂、80%多福锌可湿性粉剂、70%恶霉灵可溶性粉剂、80%恶霉·福可湿性粉剂、80%多菌灵可湿性粉剂。所用培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L。

1.2 试验设计与实施

试验根据所用药剂及浓度不同，共设7个处理，分别为50%氯溴异氰尿酸可溶粉剂800倍液（A）、31%绿亨氮苷·吗啉胍可溶粉剂1 000倍液（B）、80%多福锌可湿性粉剂800 倍液（C）、70%恶霉灵可溶性粉剂1 000倍液（D）、80%恶霉·福可湿性粉剂800倍液（E）、80%多菌灵可湿性粉剂800倍液（F），以空白为对照（CK）。按使用浓度计算杀菌剂用量，直接加入培养基中，高温常规灭菌。3次重复。每组7瓶，每瓶接种3株山苍子外植体（山苍子枝条洗净后，无菌条件下，75%酒精浸泡30 s，0.1%升汞浸泡8 min，无菌水冲洗4～5次）。在光照培养箱中培养，1周后调查结果。

1.3 调查统计

用直尺测量每一个培养瓶中的菌落直径，菌落不规则的测量其长径和短径，并以其平均值表示直径，然后计算净生长量和抑菌效果[7]。

2 结果与分析

由表1可知，山苍子组培苗存活率从高到低依次是处理C（61.90%）>处理F（42.86%）>处理A（33.33%）>处理B（19.05%）>处理E（4.76%）>处理D（0），抑菌效果由高到低依次是处理C（89.39%）>处理F（75.73%）>处理E（73.36%）>处理B（54.17%）>处理A（52.66%）>处理D（6.28%）。从防治效果看，最好的是处理C（85.71%），其他处理均<50%。同时，也观察到处理E的抑菌效果为73.36%，但防治效果却为4.76%，说明80%恶霉·福可湿性粉剂对抑制病原菌生长有效，但对植物内源菌无效。

3 结论与讨论

试验结果表明，80%多福锌可湿性粉剂的防治效果为85.71%，抑菌效果为89.39%，山苍子组培苗存活率为61.90%；80%多菌灵可湿性粉剂的抑菌效果为75.73%，但防治效果只有42.86%。植物组织培养在固定的空间环境里，包括操作环境和培养环境，常见的优劣病原菌应是相对固定和特定的，因而研究时主要是比较植物组织培养的培养基和杀菌剂的效果，其中利用杀菌剂防止植物组织培养污染可大大降低污染率，也可以降低成本，不过也可能对植物产生负面影响。有针对性地使用杀菌剂或是杀菌剂组合，既可防止污染又不会影响培养物生长。根据杀菌剂的作用机理，若能筛选出能抑制菌种又不会影响或少影响培养物生长的杀菌剂，在组织培养中省略培养基灭菌环节，将大大节约人工和能源。

如果利用杀菌剂解决了这2方面的问题，那么就有可能改变传统的封闭式植物组织培养模式，实现开放式的植物组织培养模式。在组培环境中，例如光照、湿度、气体、培养基固化物、组培容器和仪器设备等因素对植物组织培养的局限性将有极大地改善，从而带来组培技术的重大突破。

4 参考文献

[1] 刘友银.山苍子繁殖材料外植体防褐变技术研究[J].中国园艺文摘，2014（2）：41-42.

[2] 游玲，林娜，郭华，等.山苍子内生真菌多样性研究[J].西南师范大学学报（自然科学版），2012，38（1）：121-126.

[3] 魏练平，魏洪璇，吴丹，等.山苍子叶内生真菌的纯化与鉴定[J].中国微生态学杂志，2013，25（10）：1131-1133.

[4] 王志成，刘明稀，易自力.杀菌剂防治植物组织培养污染的初步研究[J].长沙电力学院学报（自然科学版），2004，19（1）：82-84.

[5] 刘静，孙海伟，段祖安，等.混合杀菌剂对植物组培污染防治实验[J].山东林业科技，2004（5）：10-12.

[6] 李晓莺，罗青，张曦燕，等.杀菌剂对枸杞组织培养中真菌污染的控制[J].安徽农业科学，2008，36（36）：15804.

[7] 李涛，张圣喜，曾维军.魚腥草白绢病室内药效试验[J].湖南农业科学，2007（6）：128-130.