川崎病患儿血浆VEGF、ES的表达水平及临床意义

赵 茜,窦常胜

(皖南医学院第一附属医院 弋矶山医院 儿科，安徽 芜湖 241001)

川崎病患儿血浆VEGF、ES的表达水平及临床意义

赵 茜,窦常胜

(皖南医学院第一附属医院 弋矶山医院 儿科，安徽 芜湖 241001)

目的：探讨川崎病(KD)患儿血浆血管内皮生长因子(VEGF)及内皮抑素(ES)的水平变化与冠状动脉损伤(CAL)的关系。方法：根据超声心动图结果将35例KD患儿分为冠状动脉损伤(CAL)组(14例)与无冠状动脉损伤(NCAL)组(21例)，并分别选取40例同期住院的支气管肺炎患儿及门诊体检健康儿童作为病例对照组和健康对照组，采用酶联免疫法检测各组患儿VEGF及ES水平。结果：CAL和NCAL组治疗前、后血浆VEGF、ES水平均高于健康对照组和病例对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)；其中CAL组VEGF、ES水平高于NCAL组，差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后CAL组和NCAL组VEGF、ES水平较治疗前下降，两组间差异有统计学意义(P<0.05)。CAL组VEGF/ES的比值高于NCAL组、健康对照组和病例对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)，而NCAL组与健康对照组和病例对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后CAL和NCAL两组间VEGF/ES比值的比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论：高表达的VEGF、ES及VEGF/ES比例的失衡可能参与KD冠状动脉损伤的发病机制。

川崎病；血管内皮生长因子；内皮抑素

川崎病(Kawasaki disease，KD)曾被称为皮肤黏膜淋巴结综合征(mucocutaneous lymph node syndrome,MCLS),是一种急性发热出疹性小儿免疫系统疾病，其病理学特点是累及全身中小动脉的炎症性改变，由于可并发严重心血管损伤并致患儿死亡而逐渐受到人们关注[1]。该病病因至今未明，目前主要依靠临床表现进行排他性诊断，相关实验室指标的检测虽不具有特异性意义，但却可以辅助KD的诊断。本文通过检测患儿血浆血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、内皮抑素(endostatin，ES)的表达水平探讨其在KD发病中的意义及其与冠状动脉损伤(coronary artery lesion，CAL)的关系，现报道如下。

1 资料及方法

1.1 研究对象 研究对象来自2014年12月～2016年6月弋矶山医院儿科收治的35例KD患儿，所有患儿均符合日本KD研究委员会新修订的KD诊断标准[2]。其中男性20例，女性15例，年龄9个月～7岁，平均年龄(4.24±1.56)岁。患儿均行心脏彩色多普勒超声检测，根据冠状动脉有无病变，分为冠状动脉损伤(coronary artery lesion，CAL)组和无冠状动脉损伤(non-coronary artery lesion，NCAL)组。

病例对照组：选取40例同期住院的支气管肺炎患儿，其中男性19例，女性21例，年龄1～7岁，平均年龄(4.21±1.59)岁。

健康对照组：选取40例门诊体检健康儿童，其中男性23例，女性17例，年龄1～8岁，平均年龄(4.41±2.07)岁。各组年龄及性别构成差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 实验方法 所有确诊为KD的患儿均在入院24 h内，丙种球蛋白(IVIG)治疗前于清晨空腹采集静脉血2 mL，3000 r/min离心15 min，留取上清液， -80℃超低温冰箱保存待测。所有患儿均给予IVIG(2 g/kg)及阿司匹林治疗，4周后再次于同样条件下采集静脉血2 mL待测。病例对照组及健康对照组采用相同方法检测。VEGF及ES均采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测，试剂盒由美国R&D公司提供，所有操作严格按照说明书进行。

2 结果

2.1 各组患儿一般资料 在35例KD患儿中，CAL组 14例，男8例，女6例，年龄9个月～7岁，平均年龄(4.19±1.67)岁；NCAL组21例，男12例，女9例，年龄1～7.5岁，平均年龄(4.26±2.19)岁，与病例对照组和健康对照组比较，各组年龄及性别构成差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2 KD患儿治疗前、后血浆VEGF、ES水平及VEGF/ES比值的变化 CAL和NCAL组治疗前、后血浆VEGF、ES水平均高于健康对照组和病例对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)；其中CAL组VEGF、ES水平高于NCAL组，差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后CAL组和NCAL组VEGF、ES水平较治疗前下降，两组间差异有统计学意义(P<0.05)。CAL组VEGF/ES的比值高于NCAL组、健康对照组和病例对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)，而NCAL组与健康对照组和病例对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后CAL和NCAL两组间VEGF/ES比值的比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 KD患儿治疗前、后血浆VEGF、ES水平及VEGF/ES比值

分组nVEGF/(pg/mL)治疗前治疗后配对tES/(ng/mL)治疗前治疗后配对tVEGF/ES治疗前治疗后配对tCAL组14213.36±19.52abc131.92±34.4910.77d37.29±2.39abc6.14d6.14d5.72±0.33abc4.18±0.2315.28dNCAL组21169.84±27.94ab98.40±11.6912.76d31.77±3.72ab9.07d9.07d5.30±0.43ab3.94±0.558.64d病例对照组4021.28±3.3911.14±1.821.92±0.11健康对照组4020.64±2.6610.76±2.301.97±0.30F(t)1188.9910.05709.668.85364.221.78P<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05>0.05

注：a与病例对照组比较，P<0.05；b与健康对照组比较，P<0.05；c与NCAL组比较，P<0.05；d治疗前后比较，P<0.05。

3 讨论

KD于1967年由日本川崎富作首次报道，是一种免疫介导的血管炎性病变，由于冠状动脉病变发生率高，未经治疗的患儿20%～25%可并发严重心血管损伤，早期诊断及治疗尤为重要。在KD急性期，除常规实验室指标CRP、ESR、PLT、外周血白细胞等显著增高，支持KD诊断之外，多种细胞因子及炎性介质都被证实参与KD的发病，国外学者在KD动物模型中证实MMPs水平的上调是导致KD冠状动脉动脉损伤的重要因素之一[3]。Oharaseki[4]通过小鼠KD血管炎模型证实TNF-α在血管炎的发展中起着重要作用。此外，内皮素(ET) 和一氧化氮(NO)[5]、血管内皮细胞抗体(AECA)[6]都被发现参与血管内皮损伤，从而辅助KD的诊断。

本文的结果发现：KD患儿CAL组和NCAL组治疗前血浆VEGF水平均高于健康对照组和病例对照组，且CAL组VEGF水平高于NCAL组，差异有统计学意义(P<0.05)，提示KD患儿血浆VEGF水平升高越显著并发冠状动脉损伤的可能越大。VEGF作为一类多功能细胞因子，能特异性作用于血管内皮细胞，使其产生基质金属蛋白酶，破坏血管壁完整性，引起血管通透性增加，从而导致血管炎性改变[7]。它还能刺激内皮细胞产生一氧化氮和超氧化物，直接损伤血管内皮[8]。此外，在Ueno等[9]的研究中也证实：KD血管炎症的急性期，血浆VEGF水平异常增高的患儿并发冠脉损伤可能更明显。而后Breunis等[10]提出血浆VEGF含量增高会介导血管内皮细胞功能紊乱，从而导致动脉瘤的发生，表明VEGF表达的变化可能参与了KD血管损伤的病理过程。

ES是1997年O′Reilly 等从培养的小鼠内皮细胞瘤(EOMA) 上清中分离纯化的一种能特异性抑制血管生成的负性调节因子[11]，它能通过阻断KDR/F1K-1酪氨酸的磷酸化阻断VEGF介导的信号传导，从而抑制血管内皮细胞增殖和迁移，导致血管内皮细胞生长周期阻滞和凋亡[12]。Ferrara等[13]在研究中发现，正常情况下，体内VEGF 和ES 保持着动态平衡，其相互作用能调节新生血管的程度，当内皮细胞受到炎症因子刺激时，相互平衡被打破，内皮细胞就会开始活化，活化的内皮细胞会引起内皮功能的紊乱和损伤，最终导致血管炎性改变。本文的结果同时也发现：CAL组和NCAL组治疗前血浆ES水平均高于健康对照组和病例对照组，CAL组高于NCAL组，治疗后CAL组和NCAL组ES水平较治疗前下降，两组间差异有统计学意义(P<0.05)。CAL组VEGF/ES的比值高于NCAL组、健康对照组和病例对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，而NCAL组与健康对照组和病例对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后CAL和NCAL两组间VEGF/ES比值的比较无差异。有研究发现[14]，急性期KD患儿血浆VEGF升高程度较ES更加明显，提示VEGF、ES的失衡可能参与了KD并发冠状动脉损伤的发病机制。

本文通过KD患儿血浆VEGF、ES表达水平检测及VEGF/ES比值变化的研究，初步表明KD并发冠状动脉损伤患儿血浆VEGF、ES水平及VEGF/ES比值的显著增高，提示异常增高的 VEGF、ES及VEGF、ES的失衡可能参与KD并发冠状动脉损伤的发病机制。但血浆VEGF、ES水平及VEGF/ES比值是否可作为川崎病乃至川崎病合并冠状动脉损伤的诊断指标，尚缺乏有效的实验室证据，仍需进一步的研究。

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Expression level and clinical significance of VEGF and ES in children with Kawasaki disease

ZHAO Qian,DOU Changsheng

Department of Pediatrics,The First Affiliated Hospital of Wannan Medical College,Wuhu 241001,China

Objective：To investigate the relationship between plasma vascular endothelial growth factor (VEGF) and endostatin (ES) expression level and severity of coronary artery lesion(CAL) in children with Kawasaki disease(KD).Methods:Thirty-five KD children were divided into CAL group (n=14) and non-coronary artery lesion(NCAL) group(n=21) by the results of echocardiography,and another 40 children with bronchial pneumonia treated on inpatient basis or undergoing physical examination on outpatient basis in the same periods were included as controls.All subjects

measurement of VEGF and ES level using enzyme-linked immunoassay.Results:Children in the CAL and NCAL groups had higher VEGF and ES levels before and after treatment than both case and healthy controls (P<0.05),and children in CAL had higher VEGF and ES level than those in the NCAL group(P<0.05).Decreased VEGF and ES levels were observed in the CAL and NCAL groups following treatment,and the difference was significant between groups(P<0.05).VEGF/ES ratio was higher in CAL group than the NCAL group,healthy control group and case control group(P<0.05),yet the difference was not significant between NCAL group and healthy control group and case control group(P>0.05).There was also no significant difference in VEGF/ES ratio between CAL and NCAL two group(P>0.05).Conclusion:High expression of VEGF,ES and VEGF/ES imbalance may be responsible for the coronary artery lesion in children with KD.

Kawasaki disease；vascular endothelial growth factor；endostatin

1002-0217(2017)04-0343-03

2016-10-05

赵 茜(1990-)，女，2014级硕士研究生，(电话)18895327942，(电子信箱)727764374@qq.com； 窦常胜，男，主任医师，硕士生导师，(电子信箱)samwuhu@163.com，通信作者。

R 725.4

A

10.3969/j.issn.1002-0217.2017.04.011