急性胃出血患者早期血液CD4+CD25+T细胞及其细胞因子的变化

马金环

(昌邑市妇幼保健院 检验科，山东 昌邑261300)

急性胃出血患者早期血液CD4+CD25+T细胞及其细胞因子的变化

马金环

(昌邑市妇幼保健院 检验科，山东 昌邑261300)

急性胃出血是消化内科常见的急性疾病，主要由于胃部及十二指肠溃疡、口服阿司匹林、胃癌、烧伤等原因引起的活动性出血[1]。近年研究发现[2]，免疫系统紊乱会加重原发病灶病变程度，进而加重出血的发生。CD4+CD25+T细胞是具有免疫增强及抑制的双重T细胞，是一群能同时表达CD4及CD25分子的T细胞，能减轻过度免疫反应，从而减轻对器官及组织的损害，但当其水平过度升高时不仅不能有效抑制机体过强的炎症反应，反而会加重炎症损伤，进而加重患者病情[3,4]。本研究将探讨急性胃出血患者早期血液CD4+CD25+T细胞及其细胞因子的变化及其与患者贫血程度的关系，旨在为急性胃出血患者早期诊断及预后评价提供指导。

1 资料及方法

1.1 临床资料

2014年6月至2015年6月收治急性胃出血患者38例，患者符合中华医学会消化内科学会对急性胃出血的诊断标准，临床表现为血压下降、腹痛、呕血、黑便等，患者均经胃镜检查确诊，男 18例，女20例，年龄18-68岁，平均(42.3±4.9)岁；另选取同期就诊的35例经胃镜诊断为消化溃疡但未发生出血的患者为溃疡组，男 18例，女17例，年龄18-66岁，平均(41.9±5.2)岁；选取同期行常规身体检查的30例健康体检者为对照组，男 16例，女14例，年龄18-67岁，平均(42.2±4.9)岁，3组性别、年龄无统计学差异(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法 急性胃出血患者入院后禁食、禁水，同时留置胃管接引流观察胃部内容物性状，并从胃部注入止血药物，同时给予保护胃黏膜、抑酸等治疗，对于Hb<70 g/L的患者则输注红细胞直至恢复正常血压水平。治疗72 h后再次采集静脉血测量相关指标。

1.2.2 CD4+CD25+T细胞测定 溃疡组及对照组于检查当天清晨8-9点空腹抽取静脉血5 ml，急性胃出血组于入院当天及治疗第3 d后分别抽取静脉血5 ml，加入肝素钠抗凝后离心处理10 min，留取血浆，并置于-80℃中待测。取上述样品恢复至常温后，调整样品浓度至2×106/ml，并将样品接种在6孔培养板中培养，收集对数生长期的细胞于测定管中，采用PBS洗涤2次后，分别加入IL-17A-FTTC及IFN-γ-FTTC染色剂对细胞浆进行染色，并采用美国贝克曼公司提供的Beckm Epics流式细胞仪测定外周血CD4+CD25+T细胞比例。

1.2.3 CD4+CD25+细胞因子测定 采用ELISA法测定3组IL-10、TGF-β水平，IL-10试剂盒由上海博研生物工程研究中心提供，TGF-β试剂盒由上海常斤生物科技有限公司提供，操作过程严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.2.4 Hb、RBC水平测定 采用日本Sysnex公司提供的SYSMEX1000型全自动化血液分析仪测定患者血红蛋白含量(Hb)及红细胞水平。

1.3 贫血判断标准

血红蛋白浓度(Hb)水平120-160 g/L为正常；90 g/L

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 3组CD4+CD25+、IL-10、TGF-β、Hb、RBC水平对比

急性胃出血组CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平显著高于溃疡组及对照组(P<0.05)，而Hb、RBC平显著低于慢性胃溃疡组及对照组(P<0.05)。溃疡组与对照相比，CD4+CD25+、IL-10、TGF-β、Hb、RBC水平无统计学差异(P>0.05)，见表1。

表1 三组CD4+CD25+、IL-10、TGF-β、Hb、RBC水平对比

注：与对照组相比，aP<0.05；与胃溃疡组相比，bP<0.05.

2.2 急性胃出血组患者治疗前后CD4+CD25+、IL-10、TGF-β、Hb、RBC水平对比

急性胃溃疡组治疗后CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平较治疗前显著下降，而Hb、RBC较治疗前显著升高(P<0.05)，见表2。

表2 急性胃出血组治疗前后CD4+CD25+、IL-10、TGF-β、Hb、RBC水平对比

2.3 CD4+CD25+、IL-10、TGF-β与贫血程度的关系

与轻度及中度贫血组相比，重度贫血组CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平显著升高(P<0.05)，见表3。

表3 CD4+CD25+、IL-10、TGF-β与贫血程度的关系

注：与轻度组相比，aP<0.05；与中度组相比，bP<0.05.

3 讨论

CD4+CD25+是重要的辅助性T细胞，可分泌IL-10、TGF-β等重要细胞因子，同时具有免疫调节的重要作用。与免疫增强作用相比，CD4+CD25+T细胞往往起到重要的免疫抑制作用[5,6]。研究表明[7]，免疫细胞功能异常尤其是T细胞异常会引发胃肠道疾病并会导致消化道出血如炎症性肠病、消化性溃疡、恶性肿瘤等。有研究指出[8]，胃肠疾病患者肠细胞壁免疫性损伤是导致胃部大出血的重要原因，而其主要作用机制可能与CD4+CD25+T细胞不能有效抑制血管壁内过强的炎症反应，从而加重胃肠血管壁内膜损伤，并最终导致血管破裂有关。

本研究结果显示，急性胃出血组患者外周血CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平显著高于溃疡组及对照组，而溃疡组与对照组外周血CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平差异无统计学意义，这表明在急性胃出血患者中存在免疫功能失调现象，CD4+CD25+比例上调、IL-10、TGF-β表达水平增多与胃出血发病有密切的关系。因此通过测定CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平有助于早期急性胃出血诊断，结果与Thanh等[9]一致。本研究发现，急性胃出血患者Hb、RBC水平显著低于溃疡组及对照组，从而提示急性胃出血患者容易由于失血过多而发生贫血。此外，本研究发现急性胃出血患者经积极的治疗后，外周血CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平显著低于治疗前，从而提示外周血CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平可作为急性胃出血患者预后的评价指标。与治疗前相比，治疗后患者Hb、RBC水平较明显升高，这提示急性胃出血患者入院后经止血、保护胃黏膜等措施治疗后能有效减轻胃肠道黏膜免疫性损害，从而有效改善患者病情。本研究发现，与轻度及中度贫血组相比，重度贫血组CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平显著升高，这提示急性胃出血患者免疫功能失调与贫血存在一定的关系，即CD4+CD25+T细胞水平越高，患者出血程度越重，Hb水平越低，其可能机制可能与CD4+CD25+T细胞表达水平过高会导致消化黏膜免疫屏障功能障碍，从而表现为黏膜下血管通透性升高，增加患者出血量[11,12]。

[1]柴明如.胃大部分切除术治疗胃十二指肠溃疡大出血的近期疗效观察[J].河南外科学杂志,2012,18(4):89.

[2]Peris Munyaka,Mohammad F,Valentin A,etal.Central Muscarinic Cholinergic Activation Alters Interaction between Splenic Dendritic Cell and CD4+CD25- T Cells in Experimental Colitis[J].PLoS One,2014,9(10):109272.

[3]吕承刚,李永翔.胃肠道恶性肿瘤患者CD4+CD25+调节性T细胞的检测及意义[J].安徽医科大学学报,2012,47(7):817.

[4]Yi-Ying Wu,Jiunn-Horng Chen,Jung-Ta Kao,etal.Expression of CD25high Regulatory T Cells and PD-1 in Gastric Infiltrating CD4+T Lymphocytes in Patients with Helicobacter pylori Infection[J].Clin Vaccine Immunol,2011,18(7):1198.

[5]陆 威,李永翔,张尚鑫，等.胃癌患者外周血及癌组织中CD4+CD25+调节性T细胞、转录因子Foxp3的表达及临床意义[J].安徽医科大学学报,2013,48(7):790.

[6]卢 芩,俞 婷,张有珍，等.胃癌患者外周血及癌组织中调节性T细胞和Foxp3的表达意义[J].中国老年学杂志,2014,(18):5140.

[7]Thanh-Long,Nguyen,Shradha S,et al.Autoimmune gastritis mediated by CD4+ T cells promotes the development of gastric cancer[J].Cancer Res,2013,73(7):2117.

[8]邹小杰,徐 震,毛姗姗，等.轻度胃肠炎伴婴幼儿良性惊厥患儿T细胞活化亚群、细胞因子的变化[J].中华实验和临床病毒学杂志,2014,28(5):349.

[9]Thanh-Long M,Nguyen,Nabil T,et al.In Vitro Induced Regulatory T Cells Are Unique from Endogenous Regulatory T Cells and Effective at Suppressing Late Stages of Ongoing Autoimmunity[J].PLoS One,2014,9(8):104698.

[10]乔晓媛,牛润桂,魏淑青等.中晚期肺癌患者化疗前后的CD4+CD25+调节性T细胞含量变化及其作用研究[J].中国药物与临床,2015,(5):680.

[11]郄 燕.胃癌患者CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞数量和分布的研究[J].国际检验医学杂志,2013,34(5):545.

[12]龚晓成,曾 辉,韩 伟,等.胃癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞55例分析[J].中华危重症医学杂志(电子版),2013,6(5):38.

1007-4287(2017)07-1170-03

2016-07-17)