Foxp3蛋白泛素化在急性期川崎病中的改变及意义

曹亚船

【摘要】目的：探讨急性期川崎病Foxp 3的改变及意义。方法：选取我院接诊急性期川崎病住院患儿18例，另选取健康儿童15例，抽取入组儿童静脉血，采用流式细胞术行FOXP 3蛋白及泛素化相关因子测定。结果：川崎病组Foxp 3、USP7表达低于对照组，STUB1、HSP70、pSTAT3表达高于对照组（P<0.05）；治疗后，Foxp 3、USP7表达高于治疗前，STUB1、HSP70、pSTAT 3表达低于治疗前（P<0.05）。结论：急性期川崎病患儿FOXP 3蛋白泛素化会出现明显改变，治疗后FOXP 3蛋白泛素化表达有所改善，即在川崎病发病中，FOXP 3蛋白泛素化与其存在明显关系。

【关键词】急性期川崎病；FOXP3；泛素化

调节性T细胞（Treg）主要是指具备免疫调节功能的CD4+T细胞亚群，其在对免疫耐受的诱导以及免疫自稳的维持中发挥着非常重要的作用。插头状蛋白（FOXP3）主要表达于Treg亚群，其可直接影响Treg的发育、分化以及免疫功能，为此，FOXP3的稳定性及表达直接影响着Treg的功能和数量。泛素化是非常多见的翻译后多肽修饰，其能够在靶蛋白特定区域内实现泛素标记，使靶蛋白能够输送到蛋白酶体内，并因此发生降解处理。近几年来，关于川崎病发病机制中，Treg作用是其中热点话题，但引起Treg功能异常与数量改变的分子机制却尚不明确。为此，本研究拟对急性期川崎病FOXP3蛋白泛素化的变化进行研究，以此实现对川崎病免疫发病机制的揭示，有关情况报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

我院2010年1月-2015年12月共接诊18例急性期川崎病住院患儿，所有患儿均符合日本川崎病研究会所拟定的诊断标准。其中女孩7例，男孩11例，年龄为（2.95±1.24）岁，病程为（5.27±1.35）d。另从同期健康体检儿童中选取15例健康儿童作为对照组。两组儿童性别、年龄均无显著差异（P>O.05），具有可比性。

1.2方法

1.2.1检测方法

（1）标本收集：对两组儿童行外周静脉血采集，各取5mL，均于清晨空腹状态下抽取，置于乙二胺四乙酸二钠盐（EDTA.Na2）行抗凝处理，30min后，行血浆分离、流式抗体孵育、RNA提取以及eDNA制备等。（2）流式细胞术（FCM）检测：根据流式细胞仪说明书与人全血调节性T细胞检测试剂盒要求进行严格操作，即对T细胞表面抗原CD4、CD25以及细胞核内抗原Foxp3进行标记处理，并完成CD4+CD25+FOXP3（Tregs）细胞数的计算。另取通过流式软件Diva V6.1.3对细胞内STUB1、USP7、HSP70、pSTAT3蛋白表达进行计数。

1.2.2临床治疗

为患儿提供静脉注射免疫球蛋白（IVIG）冲击治疗，每日1次，连续2d，总量2g/kg；同时口服大剂量阿司匹林，每日30-50mg/kg。

1.3统计学方法

以统计学软件SPSS17.0分析处理，实验结果以均数±标准差（x+s）表示，t值检验，若P<0.05即表示差异有统计学意义。

2结果

2.1两组FOXP3蛋白及泛素化相关因子表达

川崎病组Foxp3及泛素化相关因子STUB1、USP7、HSP70、pSTAT3表达与对照组比较均有显著差异（P<0.05），见表1。

2.2川崎病患儿治疗前后FOXP3蛋白及泛素化相关因子表达

川崎病患儿治疗前后Foxp3及泛素化相关因子STUB1、USP7、HSP70、pSTAT3表达比较均有显著差异（P<0.05），见表2。

3讨论

川崎病是一种免疫相关性疾病，当其处于急性阶段时，其免疫功能处于全面活化的状态下，表现为T细胞数量异常增多、急性期外周MC增多以及B细胞异常活化等，患儿血浆中存在着大量的黏附因子、炎性因子以及趋化因子等均会表现为非常明显的升高。

Foxp3主要用于对Treg亚群进行表达，可作用于Treg发育、分化和免疫功能的维持，为此，Foxp3蛋白表达水平及其稳定性可直接影响Treg功能，而在Foxp3蛋白泛素化中，又直接受到STUB1、HSP70、USP7等的影响。本研究通过对急性期川崎病患儿细胞Foxp3蛋白进行测定，结果显示，其表达水平明显低于对照组，但其大多数泛素化相关因子水平却出现了明显升高。这一结果表明，急性期川崎病患儿Foxp3蛋白呈现为低表达，而泛素化却呈现为高表达，出现这种情况可能与泛素化修饰介导蛋白异常降解有关。而针对调节Foxp3蛋白泛素化修饰分子机制目前尚无定论，且本研究也未得出结论，故有待进一步研究。

为进一步证实在川崎病发生、发展中，Foxp3蛋白泛素化相关因子在其中的作用，本研究为18例患儿提供WIG治疗，结果显示，Foxp3、USP7出现了明显的升高，STUB1、HSP70、pSTAT3则出现了明显下降（P<0.05）。这表明通过治疗，可有效改善Foxp3蛋白泛素化相关因子表达，这可能是由于通过IVIG治疗可实现Fe段与细胞表面受体的有机结合，从而实现对相关炎症细胞因子产生以及DC成熟的抑制，并且还可促使TLRs表达因此下调等，从而促使免疫系统维持动态平衡。

综上所述，在急性期川崎病发生、发展中，Foxp3蛋白泛素化起着重要作用，故可能是导致川崎病患儿Treg功能和数量异常的主要因素，而通过MG治疗，则可对炎症细胞因子进行有效抑制，从而有效缓解泛素化，从而达到恢复Treg功能和數量的作用。