利用气相色谱法同步测定饲料香味剂中麝香草酚、丁香酚和香兰素的研究

李会荣,宫玲玲

（山东省饲料质量检验所，山东济南250022）

利用气相色谱法同步测定饲料香味剂中麝香草酚、丁香酚和香兰素的研究

李会荣,宫玲玲

（山东省饲料质量检验所，山东济南250022）

本研究建立了同时测定饲料香味剂中麝香草酚、丁香酚和香兰素含量的气相色谱方法。饲料样品用无水乙醇提取，以HP-5（30 m×0.25 μm）柱为分析柱，FID检测器在温度270℃时检测，外标法定量。结果表明：在所选择的色谱条件下，空白载体中麝香草酚、丁香酚和香兰素能很好的分离；麝香草酚、丁香酚和香兰素在1.0～500 μg/mL内线性关系良好，最低定量限为50 mg/kg；添加回收率为86%～104%，变异系数为2.7%～6.7%。本方法样品前处理简单，简便可靠，可用于饲料香味剂中麝香草酚、丁香酚和香兰素的同步检测。

饲料香味剂；麝香草酚；丁香酚；香兰素；同步测定

麝香草酚又称百里香酚，对口腔咽喉黏膜有杀菌作用，能刺激唾液和消化液的分泌，促进气管纤毛运动，有利于气管黏液的分泌。丁香酚可缓解腹部胀气，增加胃液分泌，增强消化能力，减轻恶心呕吐，对多种细菌有抑制作用。香兰素具有浓烈的奶香味，能把动物吸引到饲料周围，增加动物食欲，改善饲料的适口性。

国内食品添加剂中百里香酚（中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会，2015）、丁香酚（中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会，2015）和香兰素（中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会，2008）的检测技术，主要是以气相色谱为主。饲料添加剂中香味物质，大多也是以气相色谱方法检测为主（宫玲玲等，2014；山东省技术监督局，2012）。本研究针对饲料香味剂添加成分复杂的特性，参照食品添加剂的检测方法，建立了气相色谱法同步检测饲料香味剂中麝香草酚、丁香酚和香兰素的方法，同时对该方法的检出限、准确度和精密度等进行了实验验证。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂分析纯无水乙醇。

1.1.2 仪器和设备分析天平（感量0.1 mg）；Agilent6890N气相色谱仪（具有FID检测器和可程序升温的柱温箱）。

1.1.3 标准物质麝香草酚、丁香酚和香兰素标准品纯度大于98%。

1.1.3.1 混合标准贮备溶液准确称取麝香草酚、丁香酚和香兰素各0.1000 g，置于10 mL棕色容量瓶中，加5 mL无水乙醇溶解后，用无水乙醇定容。该溶液中麝香草酚、丁香酚和香兰素的浓度均为10 mg/mL。2～8℃密封保存，保质期1个月。

1.1.3.2 混合标准中间溶液准确移取麝香草酚、丁香酚和香兰素混合标准贮备溶液1 mL，置于10 mL棕色容量瓶中，用无水乙醇定容。该溶液中麝香草酚、丁香酚和香兰素的浓度均为1 mg/mL。2～8℃保存，保质期1周。

1.1.3.3 混合标准工作溶液准确移取适量麝香草酚、丁香酚和香兰素混合标准贮备溶液和混合标准中间溶液，分别配制成浓度为1.0、5.0、10、20、50、100、500 μg/mL的混合标准工作溶液。现用现配。

1.2 方法

1.2.1 气相色谱参考条件的确定由于香味剂的相关特性，在参照多种香味剂检测方法（李会荣，2014）的基础上，对色谱条件进行了逐步的优化，最终确定的条件为：色谱柱：HP-5（30 m×0.25 μm）；进样口温度：250℃；分流进样：分流比10∶1；载气流速：2.0 mL/min；柱温箱温度：起始90℃，保持1 min，以20℃/min的速率升温至240℃，保持0.1 min；检测器温度：270℃。

实验结果见图1。结果表明，该色谱条件均能满足色谱分析的需要。

图1 麝香草酚、丁香酚和香兰素混合标准工作液图谱

1.2.2 提取条件的确定由于大部分香味剂均能溶解于有机溶剂，相比其他试剂无水乙醇具有毒性和成本较低的优点，因此选择无水乙醇作为提取剂。在空白载体中添加相同浓度的香味剂，选用振荡器振荡、旋涡混合器混匀和手动振摇三种不同的方法提取，上机测定其回收率。结果表明，不同提取方式的回收率几乎相同，考虑到成批量操作时简便的因素，本实验采用振荡器振荡提取5 min的方式。最终确定的提取步骤为：准确称取适量试样（精确至0.0002 g），置于10 mL棕色容量瓶中，加5 mL无水乙醇，振荡器振荡5 min后，用无水乙醇定容至刻度。混匀后静置。取上清溶液，过0.45 μm的微孔滤膜，供上机测定。若试液中香味剂的浓度超出标准工作溶液的线性范围，进样前用一定体积的无水乙醇稀释，使稀释后上机试液中的香味剂浓度在标准工作溶液的线性范围内。

3 结果

3.1 气相色谱法的线性范围将标准工作溶液依次从低浓度到高浓度进样，每一浓度进样三针，以所得峰面积的平均值为纵坐标，标液浓度（μg/mL）为横坐标作标准曲线，计算出回归方程和相关系数。实验结果见图2。结果表明，麝香草酚、丁香酚和香兰素标准工作溶液浓度在1.0～500 μg/mL内有良好的线性关系，相关系数均达到0.999以上。

图2 麝香草酚、丁香酚和香兰素标准曲线

3.2 标准溶液重复性用50 μg/mL麝香草酚、丁香酚和香兰素的混合标准中间溶液连续进样6次。实验结果见表1。结果表明，同一浓度的标准溶液有较好的重复性，其RSD均小于5.0%。

表1 混合标准中间溶液峰面积重复性检测

3.3 最低定量限的确定在空白载体中分别添加麝香草酚、丁香酚和香兰素各50 mg/kg，实验结果见图3和表2。结果表明，在添加量为50 mg/kg时，其回收率为在80%以上，而添加量在100 mg/kg以上时，回收率也均在80%以上。由于该方法中采用程序升温的色谱条件，当添加量小于50 mg/kg时，其信噪比不能满足定量的要求，所以，将该方法的最低定量限定为50 mg/kg。目前市场上常见的饲料香味剂中麝香草酚、丁香酚和香兰素的配方含量为0.2～100 g/kg。所以，该定量限完全可以满足实际生产中产品含量检测的要求。

图3 空白载体中添加麝香草酚、丁香酚和香兰素50 mg/kg色谱图

表2 方法最低定量限确定的检测结果

3.4 方法的准确度和精密度的测定在空白载体中分别添加各100、1000、2000、3000 mg/kg浓度的麝香草酚、丁香酚和香兰素，每个浓度做4次重复，分别计算其回收率，实验结果见表3。结果表明,在添加不同浓度的麝香草酚、丁香酚和香兰素时，其回收率为86%～104%，且相对标准偏差均小于10%。

3.5 方法的适用范围为考察方法的适用性，本文研究了5个香味剂样品，2个样品中三种成分均有，另3个样品中只含有香兰素和丁香酚。5个样品测定结果均大于样品添加含量的标示量。检测结果见表4。结果表明，不同的生产厂家、不同成分的香味剂均可用该方法检测。

4 结论

本研究建立的饲料香味剂中麝香草酚、丁香酚和香兰素同步检测方法，色谱条件易于掌握，仪器性能稳定，测试数据重复性好，回收率高，精密度和准确度均能满足分析要求，且具有较好的定量限。

表3 空白载体中添加回收的检测结果

表4 方法适用范围的验证

[1]宫玲玲，李会荣，气相色谱法同步测定饲料添加剂中百里香酚、香芹酚的研究[J].中国饲料，2014，2（6）：38～40.

[2]李会荣，利用气相色谱法同步测定饲料香味剂中四种成分的研究[J].山东畜牧兽医，2014，2（183）：3～5.

[3]山东省质量技术监督局.DB37/T 2141-2012[S].山东省地方标准—饲料香味剂中乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯的测定-气相色谱法.济南：山东标准出版社，2012-05-14.

[4]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.GB 1886.129-2015[S].中华人民共和国国家标准—食品安全国家标准食品添加剂丁香酚.北京：中国标准出版社，2015-09-22.

[5]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.GB 1886.139-2015[S].中华人民共和国国家标准—食品安全国家标准食品添加剂百里香酚.北京：中国标准出版社，2015-09-22.

[6]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.GB 3861-2008[S].中华人民共和国国家标准—食品添加剂香兰素.北京：中国标准出版社，2008-12-03.■

This study established a gas chromatographic method for simultaneous determination of thymol，eugenol and vanillin in feed flavor.Feed samples were firstly extracted by anhydrous ethanol，after being isolated by HP-5（30 m× 0.25 μm）capillary column，eventually detected by flame ionization detector（FID）detector at 270℃，and were quantified by external standard method.The results showed that under the chosen chromatographic conditions，thymol，eugenol and vanillin were separated successfully；thymol，eugenol and vanillin were linear in the range of 1.0 to 500 μg/mL and the lowest determination limit was 50 mg/kg.The relative standard deviation（RSD）was 2.7%～6.7%when the recovery rate was 86%～104%.The method was proved to be simple，rapid and resproducible for determination of thymol，eugenol and vanillin in feed flavor.

feed flavor；thymol；eugenol；vanillin；simultaneous determination

S816.17

A

1004-3314（2017）14-0036-03

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20171409